第３２卷第１期 ２０１４年ｉ月 海洋科学进展 Ｖｏ１．３２ ＮＯ．１ ＡＤＶＡＮＣＥＳ ＩＮ ＭＡＲＩＮＥ ＳＣＩＥＮＣＥ Ｊａｎｕａｒｙ，２０１４ 不同温度和Ｎ、Ｆｅ３＋质量浓度对微拟球藻 脂肪酸组成及ＳＣＤ基因表达的影响 黄一江 ，郑明刚 ，孙中涛 ，郑 立 ，王 玲。，杨佰娟。 （１．山东农业大学生命科学学院，山东泰安２７１０１８；２．国家海洋局第一海洋研究所，山东青岛２６６０６１； ３．青岛大学化学化工与环境学院，山东青岛２６６０７１） 摘 要：为了研究不同温度和Ｎ、Ｆｅ 质量浓度对微拟球藻脂肪酸组成的影响，采用气相色谱一质谱联用仪，测定了 不同处理条件下微拟球藻脂肪酸的组成。并利用荧光定量ＰＣＲ技术，监测了在不同处理条件下微拟球藻硬脂酰 辅酶Ａ去饱和酶（ｓＣＤ）基因的表达差异。结果表明：在缺Ｎ的条件下，微拟球藻中的不饱和脂肪酸的比例如 Ｃ１８：２、Ｃ１８：ｌ和Ｃ２０：４明显降低；在富Ｎ条件下Ｃ１８：２、Ｃ２Ｏ：４和Ｃ２０：５等不饱和脂肪酸的比例明显提高； 在高温处理下，微拟球藻中Ｃ１６：１和Ｃ１８：１等单不饱和脂肪酸占总脂肪酸的比例有显著提高，而Ｃ２Ｏ：４和Ｃ２Ｏ ：５等多不饱和脂肪酸则有明显的降低趋势；在低温处理组中，多不饱和脂肪酸如Ｃ１８：２和Ｃ２０：４在微拟球藻 总脂中的比例明显提高；在富Ｆｅ条件下，多不饱和脂肪酸尤其是Ｃ２０：４和Ｃ２０：５发生积累；在缺Ｆｅ条件下，不 饱和脂肪酸如Ｃ１８：１、Ｃ２Ｏ：５等占总脂肪酸的比例明显下降。与此同时，在富Ｎ、低温、高温和富Ｆｅ的条件下， ＳＣＤ基因的表达量有显著的提高；在缺Ｎ和缺Ｆｅ的条件下，ＳＣＤ基因的表达量下降。这揭示了ＳＣＤ基因在不饱 和脂肪酸形成途径中所起的重要作用，同时也证明了基因的表达与产物的合成有着密切的联系。 关键词：微拟球藻；不饱和脂肪酸；荧光定量ＰＣＲ；硬脂酰辅酶Ａ去饱和酶 中图分类号：Ｘ８３４ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７１—６６４７（２０１４）０１—００９２—０７ 不饱和脂肪酸（Ｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ Ｆａｔｔｙ Ａｃｉｄｓ，ＵＦＡｓ）广泛存在于动植物中，在一些藻类中的质量浓度尤其 丰富ｌ＿】］。有研究表明ＵＦＡｓ对治疗心血管疾病、癌症、风湿性关节炎等病症有着重要作用ｌ＿２ ］。因此，人们越 来越关注ＵＦＡｓ在制药和保健品中的应用。当前，许多重要的ＵＦＡｓ产自深海鱼油，而鱼类通过食用微藻 来积累ＵＦＡｓ＿６］。随着环境的污染，捕鱼业已经无法满足人们对ＵＦＡｓ日益增长的需求＿７Ｊ８＿。故研究海洋微 藻中的ＵＦＡｓ，对缓解当前社会中ＵＦＡｓ的需求压力有着极其重要的意义。目前，微藻中不饱和脂肪酸的低 提取量是其发展与应用的一大难题。因而，通过分子生物学手段来提高微藻中ＵＦＡｓ的质量浓度，为 解决这一难题提供了新的思路。然而微藻中ＵＦＡｓ的合成受许多基因的，故研究这些基因的表达与 ＵＦＡｓ合成的关系成为目前首要任务。 硬脂酰辅酶Ａ去饱和酶（ｓｔｅａｒｏｙｌ—ｃｏｅｎｚｙｍｅ Ａ ｄｅｓａｔｕｒａｓｅ，ＳＣＤ）在催化饱和脂肪酸形成不饱和脂肪酸 的途径中起着重要的作用。它是催化饱和脂肪酸第９位碳链形成ｎ一９系不饱和脂肪酸的关键酶，其催化底 物主要以棕榈酸（Ｃ１６：Ｏ）和硬脂酸（Ｃ１８：Ｏ）为主 。该基因的表达与不饱和脂肪酸的合成有着密切的关 系。该基因已经从大鼠、小鼠、牛、人类以及仓鼠中克隆获得。目前，对该基因的研究主要存在于动物体中。 在微藻中对ＳＣＤ基因的研究主要集中在该基因的克隆与结构的分析以及该基因在脂肪酸合成代谢中的作 资助硼：呈 ： 肖＃会一ｊ缸 枞球藻（№ 脂积累转录因子的研兖“ ６脂 ｌ４８）；ｆ每洋可再生能源专 驯 九 “ … …一… 项一一海洋微藻制备生物柴油耦合ｃ０２减排技术研究与不范（ 。 ｗ 作者简介： 一￣２Ｅ（１９８９－），男，硕士研究生，主要从事分子生物学方面研究・Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｕａｎｇｙｉｊｉ “ ＠ “ “・。。 ＧＨＭ ０２）＊通讯作者，Ｅ＿ｍａｉ ：ｑｄ ｚｍｇ＠１６３，ｔｏｍ （王佳实 编辑） １期 黄一江，等：不同温度和Ｎ、Ｆｅ”质量浓度对微拟球藻脂肪酸组成及ＳＣＤ基因表达的影响 ９３ 用机制，然而在转录水平上揭示ＳＣＤ基因与不饱和脂肪酸合成关系的报道尚未发现。有研究表明当基因的 表达量增加时，其所催化合成的代谢产物的质量浓度也随之增加 “］。因此，研究ＳＣＤ基因表达差异对探 明不饱和脂肪酸合成的分子机制有重大意义。 本研究测定了不同的温度和Ｎ、Ｆｅ件质量浓度对微拟球藻脂肪酸组成以及ＳＣＤ基因表达的影响。实验 结果将有助于进一步揭示ＳＣＤ基因表达与微拟球藻不饱和脂肪酸合成之间的关系。同时为日后利用海洋 微藻生产不饱和脂肪酸打下了理论基础。 １材料与方法 １．１微藻培养及总ＲＮＡ提取 实验选用国家海洋局第一海洋研究所藻种库的微拟球藻藻种（』＼，口 ｏ ｚ０ｒ０ ５ ５ ｇａｄｉｔａｎａ ＨＨ－１）。将 微拟球藻接入ｆ／２培养基中，在温度为２５℃，光照强度７ ０００ ｌｘ的条件下培养ｌ＿１ 。培养至指数后期，离心收 集藻体（４℃、５ ０００ ｒｐｍ、５ ｍｉｎ），并接种到新的ｆ／２培养基中，分别在不同温度和Ｎ、Ｆｅ。 质量浓度的条件下 对其进行处理，分别设置条件如下：１５。Ｃ（低温）、２５℃（对照）、３５℃（高温），０ ｍｇ／Ｌ ＮａＮＯａ（缺Ｎ）、７５ ｍｇ／Ｉ ＮａＮＯ３（对照）、１５０ ｍｇ／Ｌ ＮａＮＯ３（富Ｎ），０ ｍｇ／Ｌ ＦｅＣ１３（缺Ｆｅ）、３．１５９ ｍｇ／Ｌ ＦｅＣ１３（对照）、６ ｍｇ／Ｌ ＦｅＣＩ３（富 Ｆｅ）。当微拟球球藻细胞密度达到７×１０ ｃｅｌｌ／ｍＬ时，离心（４。Ｃ，４ ０００ ｒｐｍ，５ ｍｉｎ）收集，保存于液氮中。 用Ｔｒｉｚｏｌ Ｒｅａｇｅｎｔ提取总ＲＮＡ，经琼脂糖凝胶电泳检测其完整性。利用ＴｒａｎｓＳｃｒｉｐｔ Ｆｉｒｓｔ—Ｓｔｒａｎｄ ｃＤ— ＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ＳｕｐｅｒＭｉｘ Ｋｉｔ（ＴｒａｎｓＧｅｎ公司，中国北京）对ＲＮＡ进行反转录，合成ｃＤＮＡ。 １．２ ＳＣＤ基因的表达分析 以本实验室获得的转录组数据库为基础，设计ＳＣＤ基因的荧光定量引物（前引物：５ ＴＴＧＴＧＧＧＣＴ— ＣＡＴＣＧＴＴＣＣＴＡ一３ ，后引物：５，－ＡＡＣＡＴＣＡＣＴＧＴＧＣＣＡＴＣＣＴＧ一３ ）。根据ＴｒａｎｓＳｔａｒｔ州Ｔｏｐ Ｇｒｅｅｎ ｑＰＣＲ ＳｕｐｅｒＭｉｘ Ｋｉｔ说明，设置ｑＲＴ—ＰＣＲ的反应条件：９４。Ｃ ３ ｍｉｎ；９４。Ｃ １５ Ｓ，５５℃１５ Ｓ，７２℃３４ Ｓ，４０个 循环。以微拟球藻的ａｃｔｉｎ和１８Ｓ ｒＲＮＡ基因作双内参。 １．３脂肪酸组成分析 脂肪酸甲脂化：称取１ ｇ的油脂，加人盐酸一甲醇溶液（ （ＨＣ）： （ＣＨ。ＯＨ）一１：９）４．０ ｍＬ，混匀，充 Ｎ：保护，在６Ｏ℃水浴环境下甲酯化２０ ｍｉｎ，甲酯化过程中每隔１０ ｒａｉｎ震荡一次，甲酯化后的样品冷却后加 入饱和氯化钠３．０ ｍＬ，正己烷１．０ ｍＬ，充分震荡，静置，取正己烷层用无水硫酸钠脱水后进行色谱分析。 脂肪酸组成分析：采用美国Ａｇｌｉｅｎｔ ７８９０Ａ ＧＣ ｓｙｓｔｅｍ气相色谱仪（氢火焰离子化检测器（ＦＩＤ）和ＨＰ一５ 毛细管柱（规格）），程序升温以１Ｏ℃／ｍｉｎ从５０℃初温升到２８０℃。进样口温度为２７０℃，载气为高纯度 氦，流速１ ｍＩ ／ｍｉｎ。采用无分流进样，进样量为１ Ｌ，以面积归一化法计算脂肪酸组分的相对含量。 １．４数据处理 用ＳＰＳＳ软件对所得数据进行单因素方差分析，以Ｐ％０．０５作为差异显著性水平，以Ｐ％０．０１作为差 异极显著性水平。采用Ｄｕｎｃａｎ多重比较法对平均值进行多重比较。 海洋科学进展 ３２卷 ３ 结 论 藻类的脂肪酸组成受多种环境因素的影响。培养基中Ｎ的水平、培养温度以及Ｆｅ抖质量浓度都是影响 微藻脂肪酸组成的重要因素。不同温度和Ｎ、Ｆｅ抖质量浓度对单细胞藻类的脂肪酸组成影响较大。Ｙｏｎｇ— ｍａｎｉｔｃｈａｉｌ１。 发现，在高质量浓度的Ｎ处理条件下，小球藻（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ ｓｐ．）、栅藻（Ｓｃｅｎｅｄｅｓｍｕｓ ｓｐ．）和三角 褐指藻（Ｐｈａｅｏｄａｃｔｙｌｔｔｍ ｔｒｉｃｏｒｎｕｔｕｍ Ｂｏｈｌｉｎ）的多不饱和脂肪酸质量浓度会显著增加＿１ 。有研究者指出， 当处于缺Ｎ条件时，微藻细胞能够选择性地优先利用一种或多种含氮大分子，使细胞内的含氮物质（如蛋白 质等）的质量浓度下降，而使细胞内的碳水化合物（如多糖及脂肪酸等）的质量浓度升高口 。Ｃｏｎｖｅｒｔｉ等＿ｌ 发现，当温度从２Ｏ℃升高至２５℃时，微拟球藻脂肪酸质量浓度会增加一倍ｌ＿ｌ 。有研究表明高质量浓度的 Ｆｅ抖可以促进总脂的积累，并且可以促进鱼类组织中长链多不饱和脂肪酸的合成＿１ 。 本研究发现，在缺Ｎ的条件下，微拟球藻中的饱和脂肪酸的比例显著提高，尤其是Ｃ１４：０，占总脂肪酸 的比例提高了４４．４８ ，而Ｃ１８：２、Ｃ１８：１、Ｃ２ｏ：４则有明显的降低趋势，降幅分别为１８．１８ 、６．１１ 和 ２２．５１ 。这与之前研究三角褐指藻在Ｎ的培养条件下，多不饱和脂肪酸在总脂肪中的质量浓度下降 的结果相符。在富Ｎ条件下Ｃ１８：２、Ｃ２０：４和Ｃ２０：５在微拟球藻总脂肪酸中的比例明显提高，分别提高 了９．９１ ９／６、９．１２ 和２１．４６ 。在高温处理下，微拟球藻中Ｃ１６：１和Ｃ１８：１占总脂肪酸的比例有显著提 高，分别提高了８ 和７Ｏ．８１ 。而Ｃ２０：４和Ｃ２０：５则有明显的降低趋势，降幅分别为１７．０９ 和 １９．４１ 。在低温处理组中，Ｃ１８：２和Ｃ２０：４在微拟球藻总脂肪酸中的比例明显提高，分别提高了３５．５４ 和１５．６７ 。在富Ｆｅ条件下，多不饱和脂肪酸尤其是Ｃ２０：４和Ｃ２ｏ：５发生积累。这表明富Ｎ、低温、高温 以及富Ｆｅ可以使微拟球藻的不饱和脂肪酸增加，而缺Ｎ以及缺Ｆｅ则使得细胞内不饱和脂肪酸的质量浓度 有所下降。Ｎ是许多酶的组成要素，同时也是微藻生长所不可或缺的营养要素，因此缺Ｎ的条件下不仅会 影响微藻的生长同时也了如脂肪酸去饱和酶等一系列酶的合成，故而引起了不饱和脂肪酸质量浓度下 降。而Ｆｅ则是许多脂肪酸去饱和酶的辅助因子，是这些酶发挥活性所必需的，缺Ｆｅ将使得这些酶的活性 丧失从而导致不饱和脂肪酸的质量浓度下降。有研究表明，植物在低温环境下会产生不饱和脂肪酸以减小 低温对其的伤害，而较高的温度则可以适当增加酶的活性，从而使体内不饱和脂肪酸质量浓度增加。 不饱和脂肪酸是由饱和脂肪酸经过去饱和酶的催化引入双键而形成的。不饱和脂肪酸的质量浓度多少 与去饱和酶密切相关。有研究表明代谢物的质量浓度与合成该代谢物的相关基因的表达量呈正相关。ＳＣＤ 是催化饱和脂肪酸形成第一个双键的关键酶＿１ 。因此，为了从分子水平上揭示脂肪酸变化的原因，我们通 过荧光定量技术检测了在不同温度和Ｎ、Ｆｅ抖质量浓度的条件下，微拟球藻ＳＣＤ基因的表达情况。结果表 明，富Ｎ、低温、高温以及富Ｆｅ使ＳＣＤ基因的表达上调，而缺Ｎ和缺Ｆｅ则会抑制ＳＣＤ基因的表达。结合 ＧＣ—ＭＳ所测得的脂肪酸数据分析发现：当微拟球藻中不饱和脂肪酸质量浓度升高时ＳＣＤ基因的表达也随 之升高。二者之间呈现出显著的正相关。这一结果从某种程度上论证了，不饱和脂肪酸质量浓度升高的原 因是不同的处理条件使得ＳＣＤ基因的表达上调，从而增加了微拟球藻中ＳＣＤ的质量浓度，进而催化了饱和 脂肪酸形成双键。本实验揭示了ＳＣＤ基因在不饱和脂肪酸合成途径中的重要作用，然而脂肪酸代谢是由多 个基因共同的，因此更多的与不饱和脂肪酸合成相关的基因有待于进一步研究。 参考文献（Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ）： ［１］ＶＯＩ ＫＭＡＮ Ｊ Ｋ，ＢＲＯＷＮ Ｍ Ｒ，ＤＵＮＳＴＡＮ Ｇ Ａ，ｅｔ ａ ｐｈｙｃｅａｅ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈｙｃｏｌｏｇｙ，１９９３，２９（１）：６９ ７８． ［２］ＨＡＲＰＥＲ Ｃ Ｒ，ＪＡＣＯＢＳ（）Ｎ Ｔ Ａ．Ｂｅｙｏｎｄ ｔｈｅ ｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅａｎ ｄｉｅｔ：Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｏｍｅｇａ ３ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｒｏｎａｒｙ ｈｅａｒｔ ｄｉｓ ｅａｓｅ［Ｊ］．Ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ，２００３，６（３）：１３６—１４６． ［３］ＬＥＩＴＺＭＡＮＮ Ｍ Ｆ，ＳＴＡＭＰＦＥＲ Ｍ Ｊ，ＭＩＣＨＡＵＤ Ｄ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｄｉｅｔａｒｙ ｉｎｔａｋｅ ｏｆ ｎ ３ ａｎｄ ｎ一６ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｉｓｋ ｏｆ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ １期 黄一江，等：不同温度和Ｎ、Ｆｅ 质量浓度对微拟球藻脂肪酸组成及ＳＣＤ基因表达的影响 ９７ ＥＪ］．Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，２００４，８０（１）：２０４—２１６． ａ１．Ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｖｅｒｙ ｌｏｎｇ ｃｈａｉｎ ｐ０ｌｙｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｔｏ ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ［４］ ＧＲＡＨＡＭ Ｉ，ＣＩＲＰＵＳ Ｐ，ＲＥＩＮ Ｄ，ｅｔＴｒａｎｓｇｅｎｉｃ Ｐｌａｎｔｓ ａｓ ａｎ Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ Ｓｕｓｔａｉｎａｂｌｅ Ｓｏｕｒｃｅ ｔｏ Ｆｉｓｈ Ｏｉｌｓ［Ｊ］．Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ，２００４，２９（３）：２２８—２３３． Ｅｓ］ ＲＵＢＩＯ－ＲＯＤＲｉＧＵＥＺ Ｎ，ＢＥＩ ＴＲｄＮ Ｓ，ＪＡＩＭＥ Ｉ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｏｍｅｇａ一３ ｐｏｌｙｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓ：ａ ｒｅｖｉｅｗ［Ｊ］． Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｅｍｅｒｇｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，２０１０，１１（１）：１－１２． ［６］ＰＩＥＢＥＲ Ｓ，ＳＣＨＯＢＥＲ Ｓ，ＭＩＴＴＥＩ ＢＡＣＨ Ｍ．Ｐｒｅｓｓｕｒｉｚｅｄ ｆｌｕｉｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐ０ｌｙｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｍｉｃｒｏａｌｇａ Ｎａｎｎｏｃｈｌｏ— ｒｏｐｓｉｓ ｏｃｕｌａｔａ ＥＪ］．Ｂｉｏｍａｓｓ ａｎｄ Ｂｉｏｅｎｅｒｇｙ，２０１２，４７：４７４—４８２． ［７３ ＰＡＵｌ Ｙ Ｄ，ＡＩ ＤＥＲ Ｊ，ＢＥＮＮＥＴＴ Ｅ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｆｕｔｕｒｅ ｆｏｒ ｆｉｓｈｅｒｉｅｓ ＥＪ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００３，３０２（５６４９）：１３５９—１３６１． ［８］ＨＩＴＥＳ Ｒ Ａ，ＦＯＲＡＮ Ｊ Ａ，ＣＡＲＰＥＮＴＥＲ Ｄ Ｏ。ｅｔ ａ１．Ｇｌｏｂａｌ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｏｒｇａｎｉｃ ｃｏｎｔａｍｉｎａｎｔｓ ｉｎ ｆａｒｍｅｄ ｓａｌｍｏｎ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００４， ３０３（５６５５）：２２６－２２９． ［９］ＰＥＮＧ Ｇ，ＤＵ Ｙ Ｉ ，ＸＵ Ｓ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｓｔｅａｒｏｙｌ—ＣｏＡ ｄｅｓａｔｕｒａｓｅ一１ ａｎｄ ｌｉｐｉｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０１１，２３（１１）： １１０１—１１０５．彭恭，杜雅兰，徐式孟，等．硬脂酰辅酶Ａ去饱和酶与脂代谢［Ｊ］．生命科学，２０１１，２３（１１）：１１０１—１１０５． ［１０］ＲＥＮ Ａ，ＱＩＮ Ｉ ，ＳＨＩ Ｉ ，ｅｔ ａ１．Ｍｅｔｈｙｌ ｊａｓｍｏｎａｔｅ ｉｎｄｕｃｅｓ ｇａｎｏｄｅｒｉｃ ａｃｉｄ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｉｎ ｔｈｅ ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｏｕｓ ｆｕｎｇｕｓ Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｌｕｃｉｄｕｍ ［Ｊ］．Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１０，１０１（１７）：６７８５—６７９０． ［１１］ＬＩＡＮＧ Ｃ Ｘ，ＬＩ Ｙ Ｂ，ＸＵ Ｊ Ｗ。ｅｔ ａ１．Ｅｎｈａｎｃｅｄ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ａｎｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｇａｎｏｄｅｒｉｃ ａｃｉｄｓ ｉｎ ｓｔａｔｉｃ ｌｉｑｕｉｄ ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｌｕｃｉｄｕｍ ｕｎｄｅｒ ｐｈｅｎｏｂａｒｂｉｔａｌ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ａｐｐｌｉｅｄ ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１０，８６（５）：１３６７—１３７４． ［１２］ＨＡＲＲＩＳＯＮ Ｐ Ｊ，ＷＡＴＥＲＳＲ Ｅ，ＴＡＹＩ ＯＲ Ｆ．Ａ ｂｒｏａｄ ｓｐｅｃｔｒｕｍ ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ ｓｅａｗａｔｅｒｍｅｄｉｕｍｆｏｒ ｃｏａｓｔａｌ ａｎｄ ｏｐｅｎ ｏｃｅａｎ ｐｈｙｔｏｐｌａｎｋｔｏｎ１ ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈｙｃｏｌｏｇｙ，１９８０，１６（１） ２８—３５． ［１３］ＹＯＮＧＭＡＮＩＴＣＨＡＩ Ｗ，ＷＡＲＤ Ｏ．Ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ａｎｄ ｏｍｅｇａ ３ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ Ｐｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ ｔｒｉｃｏｒｎｕｔｕｍ ｕｎｄｅｒ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｕｌｔｕｒｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１９９１，５７（２）：４１９ ４２５． ［１４］ ＳＵＥＮ Ｙ，ＨＵＢＢＡＲＤ Ｊ，Ｈ（）Ｉ ＺＥＲ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｔｏｔａｌ ｌｉｐｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｇｒｅｅｎ ａｌｇａ Ｎａｎｎｏｃｈｌｏｒｏｐｓｉｓ ｓｐ．ＱＩＩ ｕｎｄｅｒ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｒｅｇｉｍｅｓｌ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈｙｃｏｌｏｇｙ，１９８７，２３（２）：２８９—２９６． Ａ。ＣＡＳＡＺＺＡ Ａ Ａ，ＯＲＴＩＺ Ｅ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｎｄ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｌｉｐｉｄ ｃｏｎｔｅｎｔ ［１５１ ＣＯＮＶＥＲＴＩｏｆ Ｎａｎｎｏｃｈｌｏｒｏｐｓｉｓ ｏｃｕｌａｔａ ａｎｄ Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ ｖｕｌｇａｒｉｓ ｆｏｒ ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ａｎｄ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ：Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｉｎｔｅｎｓｉｆｉ— ｃａｔｉｏｎ，２００９，４８（６）：ｌｌ４６－１１５１． Ｇ Ｍ，ＴＨＡＮＵＴＨ０ＮＧ Ｔ。ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｅｔａｒｙ ｉｒｏｎ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｎ ｇｒｏｗｔｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ， ［１６］ ＳＥＮＡＤＨＥＥＲＡ Ｓ Ｄ，ＴＵＲＣＨＩＮＩｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｉｎ ｒａｉｎｂｏｗ ｔｒｏｕｔ（Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓｍｙｋｉｓｓ）ｆｅｄ ｖｅｇｅｔａｂｌｅ ｏｉｌ ｂａｓｅｄ ｄｉｅｔｓ［Ｊ］．Ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ， ２Ｏｌ２，３４２—３４３：８Ｏ一８８． ｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｔｈｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｆｏｕｒ ｇｅｎｅｓ ｆｏｒ ｄｅｓａｔｕｒａｓｅｓ ｉｎ ［１７］ ＬＯＳ Ｄ Ａ，ＲＡＹ Ｍ Ｋ，ＭＵＲＡＴＡ Ｎ．ＤｉＳｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ ｓｐ．ＰＣＣ ６８０３［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１９９７，２５（６）：１１６７—１１７５． ９８ 海洋科学进展 ３２卷 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，Ｎｉｔｒｏｇｅｎ ａｎｄ Ｉｒｏｎ Ｓｔｒｅｓｓ ｏｎ ｔｈｅ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｆａｔｔｙ Ａｃｉｄｓ ａｎｄ ｔｈｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ ＳＣＤ Ｇｅｎｅ ｉｎ Ｎａｎｎｏｃｈｌｏｒｏｐｓｉｓ ｇａｄｉｔａｎａ ＨＵＡＮＧ Ｙｉ—ｊｉａｎｇ ¨．ＺＨＥＮＧ Ｍｉｎｇ—ｇａｎｇ ，ＳＵＮ Ｚｈｏｎｇ—ｔａｏ ， ＺＨＥＮＧ Ｌｉ ，ＷＡＮＧ Ｌｉｎｇ。，ＹＡＮＧ Ｂａｉ—ｊｕａｎ （１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉ＇ａｎ ２７１０１８，Ｃｈｉｎａ ２．ＴｈＰ Ｆｉｒｓｔ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｏｃｅａｎｏｇｒａｐｈｙ，Ｓｔａｔｅ Ｏｃｅａｎｉｃ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｉｎａ，Ｑｉｎｇｄａｏ ２６６０６１，Ｃｈｉｎａ ３．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｑｉｎｇｄａｏ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｑｉｎｇｄａｏ ２６６０７ １，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｎｉｔｒｏｇｅｎ ａｎｄ ｉｒｏｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｎ ｔｈｅ ｃｏｍＤｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｉｎ Ｎａｎｎｏｃｈｌｏｒｏｐｓｉｓ ｇａｄｉｔａｎａ，ＧＣ—ＭＳ ａｎｄ ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ＰＣＲ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔｅａｒｏｙｌ—ｃｏｅｎｚｙｍｅ Ａ ｄｅｓａｔｕｒａｓｅ（ＳＣＤ）ｇｅｎｅ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｓｖｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｕｎｓａｔｕｆａｔｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ，ｕｎｄｅｒ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｕｎｄｅｒ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｓｔａｒｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｒｏｎ ｓｔａｒｖａｔｉｏｎ，ｔｈｅ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｓ ｏｆ ｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｓｕｃｈ ａｓ １ ８。２， １ ８：１ ａｎｄ ２０：４ ｉｎ ｔｏｔａ１ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｗｅｒｅ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ．Ｕｎｄｅｒ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｅｘｃｅｓｓ，ｌｏｗ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｎｄ ｉｒｏｎ ｅｘ— ｃｅｓｓ，ｔｈｅ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｓ ｏｆ ｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｓｕｃｈ ａｓ １ ８：２，２Ｏ：４ ａｎｄ ２Ｏ：５ ｗｅｒｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ一 １ｙ．Ｗｈｅｒｅａｓ ｕｎｄｅｒ ｈｉｇｈ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｔｈｅ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｓ ｏｆ ｍｏｎｏｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｗｅｒｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ． Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＳＣＤ ｇｅｎｅ ｗａｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｕｎｄｅｒ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｅｘｃｅｓｓ，ｌｏｗ ｔｅｍｐｅｒｔｕｒｅ，ｈｉｇｈ ｔｅｍＤｅｒｔｕｒｅ ａｎｄ ｉｒｏｎ ｅｘｃｅｓｓ，ｂｕｔ ｉｔ ｗａｓ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｕｎｄｅｒ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｓｔａｒｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｒｏｎ ｓｔａｒｖａｔｉｏｎ．Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｎｏｔ ｏｎｌｙ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ＳＣＤ ｇｅｎｅ ｐｌａｙｓ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｒｏｌｅ ｉｎ ｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ｂｕｔ ａｌｓｏ Ｄｒｏｖｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ＳＣＤ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｈａｖｅ ａ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ． Ｋｅｖ ｗｏｒｄｓ：Ｎ口 ｎｏｃｈｌｏｒｏｐｓｉｓ ｇａｄｉｔａｎａ；Ｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ Ｆａｔｔｙ Ａｃｉｄｓ；Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ＰＣＲ；ｓｔｅａｒｏｙｌ—ｃｏｅｎｚｙｍｅ Ａ ｄｅｓａｔｕｒａｓｅ Ｒｅｃｅｉｖｅｄ：Ｍａｙ ２８，２０１３
