一种淫羊藿提取物的药用用途及制备方法[发明专利]

*CN102008533A*

(10)申请公布号 CN 102008533 A(43)申请公布日 2011.04.13

(12)发明专利申请

(21)申请号 201010574028.8(22)申请日 2010.12.06

(71)申请人吉林修正药业新药开发有限公司

地址130012 吉林春市高新区前进大街

2426号(72)发明人高陆 杨星钢

(74)专利代理机构吉林春市新时代专利商

标代理有限公司 22204

代理人孙国振(51)Int.Cl.

A61K 36/296(2006.01)A61P 13/08(2006.01)A61P 31/04(2006.01)

权利要求书 1 页 说明书 10 页 附图 1 页

()发明名称

一种淫羊藿提取物的药用用途及制备方法(57)摘要

一种淫羊藿提取物的药用用途及提取方法，属于医药理领域。所指淫羊藿提取物及药用用途为：含淫羊藿苷、淫羊藿苷A、淫羊藿次苷II、朝藿定B的淫羊藿提取物在制备治疗慢性细菌性前列腺炎、慢性非细菌性前列腺炎以及前列腺增生药物中的应用。制备方法为：取淫羊藿药材加水或乙醇提取，提取液浓缩至在70℃时相对密度为1.01～1.10，滤液用聚酰胺吸附法精制，得淫羊藿提取物。本发明的积极效果是：经过药理实验和相关文献及专利中的数据对比，用本发明的淫羊藿提取物制备的治疗慢性前列腺炎及慢性前列腺增生疾病，疗效确切，基本无副作用，治疗效果优于现有技术。CN 102008533 ACN 102008533 A

权 利 要 求 书

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1.一种包括淫羊藿苷、淫羊藿苷A、淫羊藿次苷II、朝藿定B的淫羊藿提取物在制备治疗慢性细菌性前列腺炎、慢性非细菌性前列腺炎以及前列腺增生药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的括淫羊藿苷、淫羊藿苷A、淫羊藿次苷II、朝藿定B的淫羊藿提取物在制备治疗慢性细菌性前列腺炎、慢性非细菌性前列腺炎以及前列腺增生药物中的应用，其特征是：该提取物含有50％--80％淫羊藿总黄酮，其中淫羊藿苷的含量大于5％。

3.根据权利要求1所述的括淫羊藿苷、淫羊藿苷A、淫羊藿次苷II、朝藿定B的淫羊藿提取物在制备治疗慢性细菌性前列腺炎、慢性非细菌性前列腺炎以及前列腺增生药物中的应用，其特征是：该提取物是用朝鲜淫羊藿为原料提取的。

4.一种权利要求1或2所述的淫羊藿提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)取淫羊藿药材加浓度30～90％的乙醇回流提取2～4次，每次加10～20倍乙醇，每次时间为0.5～3h；

(2)合并步骤(1)所得的提取液，浓缩至在70℃时相对密度为1.01～1.10；

(3)将经步骤(2)浓缩的滤液用聚酰胺吸附法或用大孔树脂吸附法精制，用聚酰胺吸附法精制条件为：上样量为淫羊藿药材比聚酰胺为1～5∶1，先用1～5倍柱体积水洗脱，弃去水洗脱液，再用2～10柱体积50～90％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，回收乙醇得淫羊藿提取物；用大孔树脂吸附法精制的条件为：上样量为淫羊藿药材比大孔树脂为1～5∶1，先用1～5倍柱体积水洗脱，弃去洗脱液，再用1～5倍柱体积的10～30％乙醇洗脱，弃去洗脱液，用5～20柱体积50～90％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，回收乙醇得淫羊藿提取物。

5.一种权利要求1或2所述的淫羊藿提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)取淫羊藿药材加水煎煮2～4次，每次加10～20倍水，每次时间为0.5～3h；(2)合并步骤(1)所得提取液，浓缩至在70℃时相对密度为1.01～1.10；

(3)将经步骤(2)浓缩的提取液加乙醇，使含醇量为60～80％，静置12～48h，取上清液回收乙醇至无醇味，加水至药液比药材为1～3∶1，静置12～48h，过滤；

(4)将步骤(3)所得滤液用聚酰胺吸附法或大孔树脂吸附法精制，用聚酰胺吸附法精制的条件为：上样量为淫羊藿药材比聚酰胺为1～5∶1，先用1～5倍柱体积水洗脱，弃去水洗脱液，再用2～10柱体积50～90％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，回收乙醇得淫羊藿提取物；用大孔树脂吸附法精制的条件为：上样量为淫羊藿药材比大孔树脂为1～5∶1，先用1～5倍柱体积水洗脱，弃去洗脱液，再用1～5倍柱体积的10～30％乙醇洗脱，弃去洗脱液，最后用5～20柱体积50～90％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，回收乙醇得淫羊藿提取物。

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CN 102008533 A

说 明 书

一种淫羊藿提取物的药用用途及制备方法

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技术领域

[0001]

本发明属于医药理由，具体涉及淫羊藿提取物的制药用途。

背景技术

淫羊藿为小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornum Maxim.、箭叶淫羊藿

Epimedium sagiyyatum(Sieb.et Zucc.)Maxim.、柔毛淫羊藿Epimedium pubescens Maxim.、巫山淫羊藿Epimedium wushanense T.S.Ying或朝鲜淫羊藿Epimedium koreanum Nakai的干燥地上部分。夏、秋季茎叶繁茂时采割，除去粗梗及杂质，晒干或阴干。淫羊藿是我国传统的补肾中药，《本草纲目》上记载有“益精气、坚筋骨、补腰膝、强心力”等作用，2010版《中国药典》上记载有“补肾阳、强筋骨、祛风湿”等作用。淫羊藿主要含有黄酮、多糖、木脂素、生物碱等化学成分。现代药理实验研究证明淫羊藿总黄酮具有调节免疫能力、调节性功能、治疗心血管疾病、骨质疏松、抗炎等作用。[0003] 目前，淫羊藿在治疗前列腺疾病方面的报道主要分为以下几方面：

[0004] 包括淫羊藿在内的复方中药制剂或组合物，如CN101007143“一种治疗前列腺的中药组合物”中的中药组合物，疗效显著，无任何副作用。CN16594“一种治疗前列腺炎中药”中的中药复方，能够治疗单体前列腺炎、前列腺炎合并尿道炎及前列腺增生。

[0005] 淫羊藿总黄酮和多糖组成的组合物，如ZL02148571.2“治疗前列腺增生的淫羊藿提取物及其在制备药物中的应用”中的淫羊藿总黄酮和多糖组合物，两者按重量比为2-8份∶8-2份，能够治疗前列腺炎和前列腺增生。

[0006] 淫羊藿苷、淫羊藿苷I、淫羊藿定A、箭叶淫羊藿苷A之一或它们的混合物，如ZL200710104013.3“含淫羊藿有效成分的药物组合物及其用途”中的淫羊藿苷、淫羊藿苷I、淫羊藿定A、箭叶淫羊藿苷A之一或它们的混合物，能够治疗前列腺炎和前列腺增生。

[0007] 上述报道中所涉及的淫羊藿并没有注明具体的种属，淫羊藿为小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornum Maxim.、箭叶淫羊藿Epimedium sagiyyatum(Sieb.et Zucc.)Maxim.、柔毛淫羊藿Epimedium pubescens Maxim.、巫山淫羊藿Epimedium wushanense T.S.Ying或朝鲜淫羊藿Epimedium koreanum Nakai的干燥地上部分，不同种属之间的淫羊藿质量差别很大，药效物质基础也不一样。

[0002]

发明内容

本发明的目的是为了提供一种包括淫羊藿苷、淫羊藿苷A、淫羊藿次苷II、朝藿

定B的淫羊藿提取物在制备治疗慢性细菌性前列腺炎、慢性非细菌性前列腺炎以及前列腺增生药物中的应用。

[0009] 本发明的淫羊藿提取物为以朝鲜淫羊藿为原料的提取物，并限定了采摘季节，保证了原药材的质量，因此保证了所制备总黄酮提取物的质量均一性。

[0008]

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CN 102008533 A[0010]

说 明 书

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基于最佳疗效要求，本发明的提取物中含有50％--80％淫羊藿总黄酮，淫羊藿

苷的含量大于5％。

[0011] 本发明的积极效果是：经过药理实验和相关文献、专利中的数据对比，发现本专利中所制备的淫羊藿提取物在慢性前列腺炎及慢性前列腺增生疾病上的治疗效果更好。因此，本发明是有区别于现有技术的，其疗效确切，基本无副作用。[0012] 本发明提取物的提取方法为：[0013] 制法1

[0014] (1)取淫羊藿药材加浓度30～90％的乙醇回流提取2～4次，每次加所用药材10～20倍重量乙醇，每次时间为0.5～3h；

[0015] (2)合并步骤(1)所得的提取液，浓缩至在70℃时相对密度为1.01～1.10；[0016] (3)将经步骤(2)浓缩的滤液用聚酰胺吸附法或用大孔树脂吸附法精制，用聚酰胺吸附法精制条件为：上样量为淫羊藿药材比聚酰胺为1～5∶1，先用1～5倍柱体积水洗脱，弃去水洗脱液，再用2～10柱体积50～90％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，回收乙醇得淫羊藿总黄酮：用大孔树脂吸附法精制的条件为，上样量为淫羊藿药材比大孔树脂为1～5∶1，先用1～5倍柱体积水洗脱，弃去洗脱液，再用1～5倍柱体积的10～30％乙醇洗脱，弃去洗脱液，最后用5～20柱体积50～90％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，回收乙醇得淫羊藿提取物。[0017] 制法2

[0018] (1)取淫羊藿药材加水煎煮2～4次，每次加所用药材10～20倍重量水，每次时间为0.5～3h，

[0019] (2)合并步骤(1)所得提取液，浓缩至在70℃时相对密度为1.01～1.10；

[0020] (3)将经步骤(2)浓缩的提取液加乙醇，使含醇量为60～80％，静置12～48h，取上清液回收乙醇至无醇味，加水至药液比药材为1～3∶1，静置12～48h，过滤；[0021] (4)将步骤(3)所得滤液用聚酰胺吸附法或大孔树脂吸附法精制，用聚酰胺吸附法精制的条件为：上样量为淫羊藿药材比聚酰胺为1～5∶1，先用1～5倍柱体积水洗脱，弃去水洗脱液，再用2～10柱体积50～90％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，回收乙醇得淫羊提取物；用大孔树脂吸附法精制的条件为：上样量为淫羊藿药材比大孔树脂为1～5∶1，先用1～5倍柱体积水洗脱，弃去洗脱液，再用1～5倍柱体积的10～30％乙醇洗脱，弃去洗脱液，最后用5～20柱体积50～90％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，回收乙醇得淫羊藿提取物。

[0022] 淫羊藿提取物中总黄酮的含量测定方法[0023] 1.1对照品溶液的配制

[0024] 精密称取淫羊藿苷对照品5.0mg，用甲醇溶解并定容于50mL量瓶中，摇匀，制成0.1mg/mL的对照品储备液。[0025] 1.2供试品溶液的配制

[0026] 取淫羊藿提取物约5.0mg，精密称定，置于25mL量瓶中，加入甲醇-水(60∶40，v/v)溶解，并定容至刻度，摇匀，再取1.0mL于10mL量瓶中，用甲醇-水(60∶40，v/v)定容至刻度，摇匀，即得供试品溶液。[0027] 1.3标准曲线的制备

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说 明 书

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分别取对照品储备液0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL置于10mL量瓶

中，分别用甲醇定容至刻度，摇匀，照紫外分光光度法，以甲醇为空白，在270nm波长下测定吸光度，以吸光度(A)对浓度(C)作标准曲线。结果表明，淫羊藿苷的浓度在5.0～25.0μg/mL范围内，与吸收度呈线性关系。A＝0.03746C+0.01230，r＝0.9996。[0029] 1.4精密度试验

分别量取15.0μg/mL对照品溶液1.0mL，按照标准曲线制备项下操作，连续测

定五次吸光度值，结果吸光度的RSD为1.2％。[0031] 1.5重复性试验

[0032] 取同一批供试品5份，制成供试品溶液，按照标准曲线制备项下操作，分别测定吸光度，并计算总黄酮含量和RSD。结果RSD为1.6％。[0033] 1.6稳定性试验

[0034] 取处理好的供试品溶液，分别在制备样品后的0、1、2、3、4、5h测定吸光度，计算RSD，结果吸光度的RSD分别为1.0％，结果表明供试品溶液在5小时内稳定。[0035] 1.7回收率试验

[0036] 取已知含量供试品五份，各约2.5mg，精密称定，分别精密加入1.0mg/mL淫羊藿苷对照品溶液1.0mL，按照标准曲线制备项下操作，测定吸光度，计算回收率，结果回收率为100.4％，RSD为3.6％。

[0037] 淫羊藿提取物中淫羊藿苷、淫羊藿苷A、淫羊藿次苷II、朝藿定B的含量测定方法

[0038] 从淫羊藿总黄酮提取物中分离出了淫羊藿苷、淫羊藿苷A、淫羊藿次苷II、朝藿定B等成分，并鉴定了它们的结构，用RP-HPLC梯度洗脱法同时测定了这四种成分的含量，既能兼顾主要成分的质量控制，又能对这一鲜有含量研究的淫羊藿次苷II提供参考。淫羊藿苷

[0039] A、淫羊藿苷、朝藿定B、淫羊藿次苷II的分子结构式如下：

[0030] [0040]

[0041] [0042]

淫羊藿苷A 淫羊藿苷

[0043] 朝藿定B 淫羊藿次苷II

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CN 102008533 A[0044] [0045] [0046] [0047] [0048]

说 明 书

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2.1色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：DIAMONSILC18(250mm×4.6mm，5μm)；

流动相：甲醇∶水(v∶v)，梯度洗脱，洗脱程序见表1；

波长：270nm；流速：0.8mL/min；柱温：25℃；进样量：5μL。表1流动相梯度洗脱程序

[0049]

2.2系统适用性试验

[0051] 在上述色谱条件下，淫羊藿苷A、朝藿定B、淫羊藿苷、淫羊藿次苷II对照品和供试品的色谱图见附图1和附图2，各色谱峰与相邻色谱峰的分离度大于1.5，理论塔板数按淫羊藿苷计算不低于3000，拖尾因子在0.95～1.05之间。[0052] 2.3溶液的制备

[0053] 对照品溶液的制备：分别精密称取对照品淫羊藿苷A、朝藿定B、淫羊藿苷、淫羊藿次苷II各适量，以甲醇配成质量浓度分别为1.65g/L、3.06g/L、9.60g/L、0.15g/L的对照品贮备液，分别取等量各对照品溶液，混合，摇匀，即得混合对照品储备液。每1mL含淫羊藿苷A 0.413mg、朝藿定B 0.765mg、淫羊藿苷2.40mg、淫羊藿次苷II 0.0375mg。

[00] 供试品溶液的制备：精密称取朝鲜淫羊藿提取物约25.0mg，置于25mL容量瓶中，甲醇-水(60∶40，v/v)溶解，并定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液作为供试品溶液。[0055] 2.4线性关系考察

[0056] 精密吸取混合对照品储备液1mL、2mL、3mL、4mL、5mL，置于25mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，按色谱条件测定峰面积，以对照品峰面积A为纵坐标，以对照品溶液的质量浓度C为横坐标，绘制标准曲线，求得回归方程(n＝5)。数据结果见表2。

[0057] 表2淫羊藿苷A、朝藿定B、淫羊藿苷、淫羊藿次苷II的标准曲线(n＝5)

[0050] [0058]

[0059]

结果淫羊藿苷A质量浓度在16.5～82.5mg/L内，淫羊藿苷质量浓度在96.0～

480.0mg/L内，朝藿定B质量浓度在30.6～153.0mg/L内，淫羊藿次苷II质量浓度在

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说 明 书

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1.5～7.5mg/L内，与峰面积具有良好的线性关系。[0060] 2.5精密度试验

[0061] 取混合对照品溶液，按上述色谱条件，重复进样5次，每次5μL，测定峰面积，结果淫羊藿苷A、淫羊藿苷、朝藿定B、淫羊藿次苷II峰面积的RSD分别为0.97％、1.2％、0.56％、1.1％。[0062] 2.6重复性试验

[0063] 取同一批的供试品5份，制成供试品溶液，按上述色谱条件测定，结果淫羊藿苷A、淫羊藿苷、朝藿定B淫羊藿次苷II的RSD分别为1.1％、1.8％、0.99％、1.4％。[00] 2.7稳定性试验

[0065] 将供试品溶液按上述色谱条件，分别在制备样品后的0、4、6、8、10、12h进样，测定峰面积，结果淫羊藿苷A、淫羊藿苷、朝藿定B、淫羊藿次苷II的RSD分别为0.88％、0.90％、1.3％、1.2％，结果表明供试品溶液在12小时内稳定。[0066] 2.8回收率试验

[0067] 取已知含量同一批样品五份，各约12.5g，精密称定，分别精密加入淫羊藿苷A、淫羊藿苷、朝藿定B、淫羊藿次苷II对照品溶液一定量，按供试品溶液制备方法处理，测定峰面积，计算回收率，平均回收率102.1％，RSD为1.2％。

[0068] 本发明的淫羊藿提取物提取物制备工艺简单，具有显著的治疗前列腺增生和前列腺炎的作用。附图说明

图1为淫羊藿苷A、朝藿定B、淫羊藿苷、淫羊藿次苷II标准溶液色谱图。

[0070] 图1中序号1为淫羊藿苷A，序号2为朝藿定B，序号3为淫羊藿苷，序号4为淫羊藿次苷II。

[0071] 图2为本发明淫羊藿提取物样品溶液色谱图。

[0072] 图2中序号1为淫羊藿苷A，序号2为朝藿定B，序号3为淫羊藿苷，序号4为淫羊藿次苷II。

[0069]

具体实施方式

[0073] 实施例1淫羊藿提取物提取制备工艺1

[0074] 取淫羊藿药材加70％的乙醇回流提取2次，每次加15倍乙醇，每次时间为1.5h，合并提取液，浓缩至在70℃时相对密度为1.02，滤液用聚酰胺吸附法精制，上样量为淫羊藿药材∶聚酰胺＝2∶1，先用1倍柱体积水洗脱，弃去水洗脱液，再用5倍柱体积50％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，回收乙醇得淫羊藿提取物。其中总黄酮含量为57.6％，淫羊藿苷含量为10.2％。

[0075] 实施例2淫羊藿提取物提取制备工艺2

[0076] 取淫羊藿药材加水煎煮3次，每次加20倍水，每次时间为1h，合并提取液，浓缩至在70℃时相对密度为1.05，加乙醇使含醇量为70％，静置24h，取上清液回收乙醇至无醇味，加水至药液：药材为2∶1，静置48h，过滤，滤液用聚酰胺吸附法精制，上样量为淫羊藿药材∶聚酰胺＝2∶1，先用1倍柱体积水洗脱，弃去水洗脱液，再用3柱

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体积70％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，回收乙醇得淫羊藿提取物。其中总黄酮含量为66.7％，淫羊藿苷含量为11.4％。

[0077] 实施例3淫羊藿提取物提取制备工艺3

[0078] 取淫羊藿药材加70％的乙醇回流提取2次，每次加15倍乙醇，每次时间为1.5h，合并提取液，浓缩至在70℃时相对密度为1.02，滤液用大孔树脂吸附法精制，上样量为淫羊藿药材∶大孔树脂＝2∶1，先用1倍柱体积水洗脱，弃去洗脱液，再用2倍柱体积的20％乙醇洗脱，弃去洗脱液，最后用10柱体积80％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，回收乙醇得淫羊藿提取物。其中总黄酮含量为68.4％，淫羊藿苷含量为9.7％。[0079] 实施例4淫羊藿提取物提取制备工艺4

[0080] 取淫羊藿药材加水煎煮3次，每次加15倍水，每次时间为1h，合并提取液，浓缩至在70℃时相对密度为1.04，加乙醇使含醇量为70％，静置24h，取上清液回收乙醇至无醇味，加水至药液∶药材为2∶1，静置24h，过滤，滤液用大孔树脂吸附法精制，上样量为淫羊藿药材∶大孔树脂＝2∶1，先用1倍柱体积水洗脱，弃去洗脱液，再用2倍柱体积的20％乙醇洗脱，弃去洗脱液，最后用10柱体积80％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，回收乙醇得淫羊藿提取物。其中总黄酮含量为57.0％，淫羊藿苷含量为12.1％。实施例5淫羊藿提取物普通片剂的制备

[0082] 取实施例1淫羊藿提取物200g、微晶纤维素200g、交联羧甲基纤维素钠100g过80目筛混匀，加入3％羟丙甲基纤维素溶液适量制软材，过18目筛制粒，放入50℃烘箱干燥12小时，之后用16目筛整粒，加入1％硬脂酸镁，混合均匀，压片。制成1000片即得，每片含淫羊藿提取物200mg。

[0083] 实施例6淫羊藿提取物普通胶囊剂的制备

[0084] 取实施例1淫羊藿提取物200g、微晶纤维素200g、交联羧甲基纤维素钠100g过80目筛混匀，加入3％羟丙甲基纤维素溶液适量制软材，过18目筛制粒，放入50℃烘箱干燥12小时，之后用16目筛整粒，加入1％硬脂酸镁，混合均匀，灌装胶囊。制成1000粒即得，每片含淫羊藿提取物200mg。[0085] 药效试验

[0086] I淫羊藿提取物对大鼠慢性非细菌性前列腺炎的作用。[0087] 1、实验动物、药物及试剂[0088] 1.1实验动物

[00] 健康雄性wistar大鼠，200±20g，雄性，购自吉林大学基础医学院实验动物中心，合格证号：SCXK(吉)2007-0003。[0090] 1.2受试药物

[0091] 实施例1所制备的淫羊藿提取物(A)、实施例3所制备的淫羊藿提取物(B)。[0092] 1.3试剂

[0093] 温肾前列胶囊：修正药业集团股份有限公司，规格：0.5g/粒，批号：081005。

[0081]

水合氯醛：中国医药集团上海化学试剂公司，批号：20040206。

[0095] 消痔灵注射液：吉林省集安益盛药业股份有限公司，规格：10ml/支，批号：0907242。

[0094]

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说 明 书

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2、实验方法

[0097] 2.1实验性非细菌性前列腺炎大鼠模型的建立

[0098] 雄性大鼠70只，10％水合氯醛(0.3mL/100g)腹腔注射麻醉，无菌操作下腹部正中切口约1cm，直达腹腔，提出膀胱及双侧精囊，暴露附属于精囊内侧的前列腺背叶，将25％消痔灵注射液注入前列腺双侧背叶各0.1mL，缝合肌肉皮肤。假手术组10只于同样部位同样方法注入生理盐水0.2mL，创口处涂布青霉素以防感染。造模后饲养14天。[0099] 2.2分组及给药

[0100] 大鼠随机分成7组，即模型组、假手术组、阳性药(温肾前列胶囊)组、A高剂量组、A低剂量组、B高剂量组、B低剂量组，每组10只。大鼠灌胃给药，剂量与途径：模型组：生理盐水灌胃，容积0.5mL/100g；假手术组：生理盐水灌胃，容积0.5mL/100g；A低剂量组：给予样品A 20mg/kg，灌胃，容积0.5mL/100g；A高剂量组：给予样品A40mg/kg，灌胃，容积0.5mL/100g；B低剂量组：给予样品B 35mg/kg，灌胃，容积0.5mL/100g；B高剂量组：给予样品B 70mg/kg，灌胃，容积0.5mL/100g；阳性药组：给与温肾前列胶囊1g/kg，灌胃，容积0.5mL/100g。

[0101] 大鼠每天给药1次，连续给药14天。末次给药后24小时，大鼠称重、处死。仔细剖取前列腺，用微量电子天平称取前列腺湿重，并计算前列腺指数(前列腺指数＝前列腺湿重mg/大鼠体重g)；用足趾容积测量仪测量前列腺体积。之后用10％甲醛固定，送病理组织学检查。[0102] 3、实验结果：

[0103] 3.1淫羊藿提取物对非细菌性前列腺炎大鼠前列腺指数及体积的影响

[0104] 两种淫羊藿总取物均能明显降低消痔灵导致的非细菌性前列腺炎大鼠前列腺指数和体积，与模型组相比有显著性差异(p＜0.05或p＜0.01)，结果见表3。[0105] 表3淫羊藿提取物对大鼠前列腺指数及体积的影响

[0106]

[0107]

与模型组比较△p＜0.05，△△p＜0.01，与假手术组比较※p＜0.05。

[0109] 3.2组织病理组织学观察

[0110] 假手术组大鼠前列腺组织腺体形状不规则，可见较多皱裂，腺上皮为单层立方或单层柱状上皮，偶见假复层柱状上皮，腺泡腔排列紧密，腔内含均质粉染分泌物，腺体周围包裹少量血管及结缔组织。模型组大鼠腺泡细胞破坏，变形、纤维化甚或消失，腺泡腔内可见大量脱落的上皮细胞及细胞碎片。间质内可见较多的炎细胞浸润，以淋巴

[0108]

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细胞为主，纤维结缔组织增生明显。两种工艺淫羊藿提取物高低剂量组对大鼠前列腺炎病变程度均有一定的改善作用，病变范围、炎细胞浸润、间质增生均有不同程度的减轻，个别大鼠前列腺组织与正常接近。将病变程度按下列标准大致分为4个等级：I级：正常或接近正常；II级：腺泡细胞形态接近正常，腺腔内无或有少量分泌物，间质无异常；III级：部分腺泡细胞破坏明显，腺腔内有较多异物，间质无异常或轻度增生；IV级：腺泡细胞破坏明显，腺腔内有大量异物，间质增生明显伴炎细胞浸润，各组结果见表4。

[0111] 表4淫羊藿提取物对大鼠前列腺炎模型组织病理学的影响

[0112]

4、结论

[0114] 两种淫羊藿提取物均可显著降低实验性前列腺炎大鼠前列腺指数、体积；组织病理学检查显示两种淫羊藿提取物对前列腺炎病变程度均有一定的改善作用。[0115] II淫羊藿提取物对大鼠慢性细菌性前列腺炎的作用[0116] 1、实验动物、试剂及仪器[0117] 1.1实验动物

[0118] 健康雄性wistar大鼠，200±20g，雄性，购自吉林大学基础医学院实验动物中心，合格证号：SCXK(吉)2007-0003。[0119] 1.2受试药物

[0120] 实施例1所制备的淫羊藿提取物(A)、实施例3所制备的淫羊藿提取物(B)。

[0113]

1.3试剂

[0122] 温肾前列胶囊：修正药业集团股份有限公司，规格：0.5g/粒，批号：081005。

[0123] 氧氟沙星片：山西千汇药业有限公司，规格0.1g/片，批号：20081202。[0124] 水合氯醛：中国医药集团上海化学试剂公司，批号：20040206。[0125] 大肠埃希菌：吉林省人民医院提供。[0126] 2、实验方法

[0127] 2.1实验性细菌性前列腺炎大鼠模型的建立

[0128] 雄性大鼠60只，10％水合氯醛(0.3mL/100g)腹腔注射麻醉，无菌操作下腹部正中切口约1cm，直达腹腔，提出膀胱及双侧精囊，暴露附属于精囊内侧的前列腺背

[0121]

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叶，将1.5×108/mL的大肠埃希菌液与冷至45℃的0.2％琼脂混合注入前列腺双侧背叶各0.1mL，缝合肌肉皮肤。假手术组10只于同样部位同样方法注入生理盐水0.2mL，创口处涂布青霉素以防感染。造模后饲养28天。[0129] 2.2分组及给药

[0130] 大鼠随机分成6组，即模型组、假手术组、阳性药(温肾前列胶囊)组、阳性药(氧氟沙星)组、A组、B组，每组10只。大鼠灌胃给药，剂量与途径：模型组：生理盐水灌胃，容积0.5mL/100g；假手术组：生理盐水灌胃，容积0.5mL/100g；A组：给予样品A40mg/kg，灌胃，容积0.5mL/100g；B组：给予样品B 70mg/kg，灌胃，容积0.5mL/100g；阳性药(温肾前列胶囊)组：给与温肾前列胶囊1g/kg，灌胃，容积0.5mL/100g；阳性药(氧氟沙星)组：10mg/kg，灌胃，容积0.5mL/100g。大鼠每天给药1次，连续给药28天。末次给药后24小时，大鼠称重、处死。立刻在无菌条件下剖取前列腺并捣碎，取50mg加入200ul白细胞稀释液和200ul生理盐水，充分混匀，记录显微镜下白细胞数，离心冲洗液，取沉淀物进行细菌鉴定。[0131] 3、实验结果：

[0132] 3.1淫羊藿提取物对大鼠慢性细菌性前列腺炎模型白细胞及菌落个数的影响两种淫羊藿提取物均能明显降低大肠埃希菌导致的细菌性前列腺炎大鼠白细胞

和菌落的个数，与模型组相比有显著性差异(p＜0.05或p＜0.01)，结果见表5。[0134] 表5淫羊藿提取物对大鼠慢性细菌性前列腺炎模型白细胞及菌落个数的影响

[0133]

[0135]

与模型组比较△p＜0.05，△△p＜0.01，与假手术组比较※p＜0.05。

[0137] III淫羊藿提取物对小鼠前列腺增生的作用[0138] 1、实验动物、试剂及仪器[0139] 1.1实验动物

[0140] 健康雄性昆明种小鼠，20±2g，雄性，购自吉林大学基础医学院实验动物中心，合格证号：SCXK(吉)2007-0003。[0141] 1.2受试药物

[0142] 实施例1所制备的淫羊藿提取物(A)、实施例3所制备的淫羊藿提取物(B)。[0143] 1.3试剂

[0144] 温肾前列胶囊：修正药业集团股份有限公司，规格：0.5g/粒，批号：081005。

[0145] 水合氯醛：中国医药集团上海化学试剂公司，批号：20040206。[0146] 丙酸睾酮注射液：上海通用药业股份有限公司，批号：080303。

[0136]

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2、实验方法

[0148] 2.1实验性小鼠前列腺增生模型的建立

[0149] 雄性小鼠70只，其中6组用丙酸睾酮每日按照5mg/kg皮下注射造模，连续21天。

[0150] 2.2分组及给药

[0151] 小鼠随机分成7组，即空白对照组、模型组、阳性药(温肾前列胶囊)组、A高剂量组、A低剂量组、B高剂量组、B低剂量组，每组10只。小鼠灌胃给药，剂量与途径：模型组：生理盐水灌胃，容积0.5mL/100g；模型组：生理盐水灌胃，容积0.5mL/100g；A低剂量组：给予样品A 20mg/kg，灌胃，容积0.5mL/100g；A高剂量组：给予样品A40mg/kg，灌胃，容积0.5mL/100g；B低剂量组：给予样品B 35mg/kg，灌胃，容积0.5mL/100g；B高剂量组：给予样品B 70mg/kg，灌胃，容积0.5mL/100g；阳性药组：给与温肾前列胶囊1g/kg，灌胃，容积0.5mL/100g。每日1次，连续3周，另1组为空白对照组。于末次给药后1h称重，然后脱颈椎处死小鼠，迅速取前列腺组织，称重。并计算前列腺指数(前列腺指数＝前列腺湿重mg/小鼠体重g)。

3、实验结果：

[0153] 3.1淫羊藿提取物对小鼠前列腺增生模型前列腺重及前列腺指数的影响

[01] 与空白对照组相比，模型组小鼠的前列腺重和前列腺指数均显著增加。与模型组相比两种淫羊藿提取物均能明显降低丙酸睾酮导致的前列腺增生小鼠前列腺重和前列腺指数，有显著性差异(p＜0.05或p＜0.01)，结果见表6。

[0155] 表6淫羊藿提取物对小鼠前列腺增生模型前列腺重及前列腺指数的影响

[0152]

[0156]

[0157] 与模型组比较△p＜0.05，△△p＜0.01，与空白对照组比较※p＜0.05。

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说 明 书 附 图

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图1

图2

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