小鼠脾细胞悬液制备

来源：爱问旅游网

小鼠脾细胞悬液制备

一.小鼠眼球取血（眼静脉取血）二.小鼠脾细胞悬液的制备：

1．小鼠颈椎脱臼处逝世,75%乙醇浸泡3分钟,掏出小鼠置于无菌纸上,左腹侧朝上;

2．在小鼠左腹侧中部剪开小口,撕开皮肤,吐露腹壁,可见红色长条状脾脏;

3．在脾脏下侧提起腹膜,剪开后上翻,吐露脾脏,用镊子提起脾脏,眼科剪分别脾脏下面的结缔组织,掏出脾脏.放入盛有5ml Hanks液的造就皿中; 4．A：梳刮法：脾脏可用镊子轻轻梳刮,防止将脾脏弄成碎片,将细胞悬液吸入离心管中,天然沉降5分钟,将悬液移至另一离心管中,弃去较大的组织块,离心沉淀细胞;

B：钢网研磨法：将脾脏放置不锈钢网（100或200目）上,用打针器针芯轻轻研压脾脏,获细胞悬液;

C：酶消化法：将脾脏用镊子夹碎,参加400 u/ml胶原酶（III型）5ml/只脾脏,37度消化20分钟,用尼龙网过滤,得到单细胞悬液.

5.脾脏研磨：轻轻研压（顺统一偏向）,用吸管汲取脾细胞悬液,放入试管中.

6.镜下细胞计数：40倍镜头,不雅察脾细胞. 7.试取胸腺

注：一般6-8周龄小鼠,依据品系不合,可得5-20×107细胞/只.

2．手术器械灭菌：术前高压灭菌外,也可将手术器械泡在95%酒精的小容器中,应用前掏出器械,在

酒精灯上烧灼去除酒精,即可包管无菌,此法较为轻便.

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