经验交流高效液相色谱法分析色酒中有机酸的研究王玉君李烈英孙永乐＊杨温夫（中国科学院海洋研究所，青岛，２６６０７１）（化工部劳动保护研究所，青岛，２６６０７１）酒中有机酸的种类、含量和构成不同，形成酒的各种风味和品质［１］。适量的有机酸能促进食欲、助消化，益于健康。因而酒中有机酸的分析对酒的品评很有意义。国外有把酿酒过程中有机酸的变化做为发酵管理过程中的主要指标［２］。酒中有机酸的分析多采用比色法和气相色谱法，但须做成衍生物再分析，手续繁杂。近年来采用高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）直接分析，简便、准确，不断有文献报道［３，４］。但色酒尤其是黄酒中有机酸品种较多，仍给分析带来很多困难，全分析数据一直未见报道。在这方面，我们开展了研究工作。实验部分（一）仪器设备Ｗａｔｅｒｓ液相色谱仪，主要包括：Ｍ４５泵，４４１紫外检测器，７３０数据处理机等。（二）试剂有机酸标准均为分析纯或化学纯试剂，而焦谷氨酸为谷氨酸在ｐＨ２．４条件下脱水３小时制得。色谱柱皆为径向加压柱，Ｗａｔｅｒｓ公司产。洒样：市售花雕酒（绍兴）、加饭酒（绍兴）、即墨老酒、葡萄酒（青岛）、白兰地酒（烟台）等。注射前先经Ｓｅｐ－ＰａｋＣ１８柱预处理。（三）实验步骤：分别在反相Ｃ１８柱和阴离子交换柱上用ＫＨ２ＰＯ４缓冲液做流动相，观察ｐＨ值变化、ＫＨ２ＰＯ４浓度、流动相流速对有机酸分离的影响；选定最佳分离条件，测定烁各种有机酸的保留参数和在２１４ｎｍ和２５４ｎｍ时紫外吸收波长的校正因子。全过程均用外标法。结果与讨论经实验筛选，得到酒中常见十四种有机酸在Ｃ１８柱上的最佳分离条件为０．２ｍｏｌ／Ｌ ＫＨ２ＰＯ４（Ｈ３ＰＯ４）缓冲液，ｐＨ２．３７，ｌｍｌ／ｍｉｎ；在阴离子交换柱上最好分离条件为０．０２ｍｏｌ／Ｌ ＫＨ２ＰＯ４（Ｈ３ＰＯ４），ｐＨ２．４，ｌｍｌ／ｍｉｎ。表１列出十四种有机酸电离常数ｐＫ１值与容量因子ｋ＇及校正因子ＦＲ的关系。由表１可见：１４种有机酸在两种柱上均能良好分离。用Ｃ１８柱分离，在２１４ｎｍ波长检测均有吸收，在２５４ｎｍ波长下多数有机酸无吸收。分析时在２１４ｎｍ波长检测为好，在２５４ｎｍ波长下谱图能起辅助定性作用。各有机酸本身的特性决定了在一定条件下的色谱保留值ｋ＇。我们研究了电离常数与ｋ＇的关系，结果如图１、２，可见对于判断分离效果有一定指导作用。用该法分别对即墨老酒、花雕酒、葡萄酒等色酒进行了分离分析，如图３、４为即墨老酒和花雕酒的分离谱图，分离效果良好。总之分离以Ｃｌ８柱为主，以阴离子柱为辅；检测以２１４ｎｍ波长为主，以２５４ｎｍ为辅助定性。此法分＊通讯联系人析饮料中有机酸直接检出每毫升饮料的最低含量分别为：富马酸２０ｎｇ，草酸、丙酮酸、抗坏血柠檬酸、丙二酸、苹果酸：４μｇ，葡萄糖酸、谷氨酸、琥酸、乳酸：１μ。低于上鲜述浓度就需先浓缩富集后，再进样分析。酸：５００ｎｇ，焦谷氨酸１μｇ，酒石酸２μｇ，乙酸、表１十四种有机酸ｐ１值与ｋ＇、ＦＲ的关系Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ａｃｉｄｓ ｉｎ ＲｉｃｅＷｉｎｅ ｂｙ Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ ＣｈｒｏｍａｔｏｇｒｏｐｈｙＷａｎｇ ＹｕｊｕｎＬｉ ＬｉｅｙｉｎｇＩｎｓｔｉｕｔｅ ｏｆ Ｏｃｅａｎｏｌｏｇｙ，Ａｃａｄｅｍｉａ ＳｉｎｉｃａＱｉｎｇｄａｏ２６６０７１；Ｓｕｎ Ｙｏｎｇｌｅ ａｎｄ ＹａｎｇＷｅｎｆｕＯｃｃｕｐａｔｉｏｎａｌ Ｓａｆｅｔｙ ａｎｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉ－ｔｕｔｅ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ ＩｎｄｕｓｔｒｙＱｉｎｇｄａｏ２６６０７１Ａ ＨＰＬＣ ｓｙｓｔｅｍ ｔｈａｔ ｍａｋｅｓ ｉｔ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｔｏ ａｃｃｕｒａｔｅｌｙａｎｄ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｃｏｕｓｌｙ ｑｕａｎｔｉｔａｔｅ ｌ４ ｓｅｖｅｒａｌ ｃｏｍｍｏｎｏｒｇａｎｉｃ ａｃｉｄｓ ｉｎ ｒｉｃｅ ｗｉｎｅＡｍｏｎｇ ｔｈｅ ｃｏｌｕｍｎｓ ｔｈａｔ ｗａｓｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔＣ１８ｃｏｌｕｍｎ ｗａｓ ｔｈｅ ｂｅｓｔＯｎｌｙ参考文献ａｆｔｅｒ ａ ｓｉｎｇｌｅ Ｓｅｐ－Ｐａｋ Ｃ１８ｐｒｅ－ｃｏｌｕｍｎ ｔｒｅａｔｍａｎｔｔｈｅｓａｍｐｌｅｓ ｃａｎ ｔｈｅｎ ｂｅ ａｎａｌｙｓｅｄＢｙ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ＵＶ ２１４ｎｍ．ａｌｌ ｔｈｅ ｏｒｇａｎｉｃ ａｃｉｄｓ ｈａｖｅ ｈｉｇｈｅｒ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎｓｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎ－ｔｒａｔｉｏｎ ｒａｎｇｅ ｔｈａｔ ｕｓｉｎｇ ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｄｉｒｅｃｔｙ［１］ 赵光鳌等，江苏食品与发酵，（２），１８（１９８２）。［２］卢杏芬等，贵州酿酒、（２），４１（１９８１）。［３］ Ｃ．Ｄｒｏｇ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｈｗｅｉｚ ＺＯｂｓｔｗｅｉｎｂａｕ１１８（１５），４３４（１９８２）．［４］ ＣＧＢａｒｒｏｓｏ ｅｔ ａｌ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉａ１７（１５），２４９（１９８３）．ｔｈｅ ｏｒｇａｎｉｃ ａｃｉｄｓ ｉｎ ｂｅｖｅｒａｇｅｓ ｉｓ ２０ ｎｇ／ｍｌ－４μｇ／ｍｌ（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｏｒｇａｎｉｃ ａｃｉｄｓ）．离子色谱法同时测定地质样品中的氟和氯蒋仁依（北京矿产地质研究所，１０００１２）张洪波（寿王坟铜矿，河北承德）徐建平（南京大学，２１０００８）离子色谱法（ＩＣ）测定地质样品中氟和氯，已有过报道［１－。我们用水蒸汽快速蒸馏分离氟
