丹皮酚对apoE基因敲除小鼠早期动脉粥样硬化抗氧化作用的研究

学生姓名： 李超 年级专业： 11中药（1）班 学号：11311020 指导教师： 戴敏 职称/职务： 教授 毕业论文（设计）题目：丹皮酚对ApoE基因敲除小鼠早期动脉粥样硬化抗氧化作用的研究 立题依据（课题研究的目的与意义及国内外研究现状）： 动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)已成为严重威胁人们生命安全的重大疾病。动脉粥样硬化病变形成机制复杂，其中炎症与氧化应激被认为是AS的核心发病机制，参与AS发生、发展乃至恶化的全过程。氧化应激通过氧化修饰LDL，刺激组织因子的表达，诱导平滑肌细胞和巨噬细胞增殖，激活基质金属蛋白酶和基质降解酶等多方面参与AS的进程。[1-2]SOD、MDA以及OX-LDL三个指标能从不同的方面反映氧化应激程度，SOD反映的是机体清除氧自由基的能力[3]，MDA反映的是细胞受氧自由基损伤的程度[4]，ox-LDL在参与泡沫细胞的形成，诱导平滑肌细胞增生、促进血小板粘附聚集、引起血栓形成等多个方面发挥重要的作用[5]。NO是检测血管内皮功能的重要的血清指标之一[6]。因此本研究从氧化应激的角度出发，蹄选了具有代表性的MDA、SOD、OX-LDL等作为氧化应激的研究指标,探讨丹皮酚对AS的抗氧化作用。 丹皮酚(paeonol)为毛茛科植物牡丹的根皮的活性成分之一，具有抗炎、抗氧化、心血管保护作用等药理作用，临床多用于心脑血管、炎症及免疫系统等疾病[7]。大量文献表明丹皮酚可通过调节脂质代谢、抗脂质过氧化反应、保护动脉内皮细胞等途径达到抗动脉粥样硬化作用[8-9]。丹皮酚对早期动脉粥样硬化具有一定的治疗作用，其作用可能与减轻自由基的损伤、保护血管内皮细胞有关，可增强SOD活性[10]、减少MDA及ox-LDL水平,抑制健康人血清LDL的体外氧化修饰反应[11]。而丹皮酚分子上的酚羟基也与抗氧化作用有关。 从病因学和病理学的研究所知，AS是受多种因素影响所形成的一类复杂的病理性变化，目前关于中医药治疗AS的研究成为热点。本研究拟以ApoE基因敲除小鼠为实验对象,建立动脉粥样硬化动物模型，观察早期小鼠动脉内粥样硬化发生、发展等病理生理情况,并观察丹皮酚对动脉粥样硬化抗氧化的作用。以AS的“氧化应激作用”为研究方向,观察ApoE基因敲除小鼠治疗前后血脂、脂蛋白、超氧化物歧化酶、丙二醛、氧化型低密度脂蛋白等含量的变化以及主动脉彩超检査的结果。以期通过该研究明确丹皮酚对早期AS的抗氧化作用。从抗氧化作用方面探讨丹皮酚防治AS的作用机理,同时评价其疗效。该研究对于发掘丹皮酚在防治AS方面的优势有非常重要的意义。 课题研究内容： 1、高脂饮食法复制ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化病理模型； 2、测定方法及观察指标； 2.1切片及染色方法：HE染色并光镜观察主动脉病理学改变； 2.2 指标的检测：采用黄嘌呤氧化酶法测定SOD活力，硫代巴比妥酸法(TBA)测定MDA含量，酶联免疫吸附法（ELISA)测定氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL),硝酸还原酶法测 NO 含量，具体操作按试剂盒说明书进行。 课题研究的条件（材料、主要实验仪器设备等）： 1、动物：6~8周龄ApoE 基因敲除小鼠、同种属空白鼠。 2、药物：丹皮酚。用0.5%羧甲基纤维素钠（CMC-Na）配成适当浓度的混悬液。 3、仪器：移液枪、电子分析天平、医学净化工作台、CO2培养箱、低速普通离心机、光学显微镜、冰冻切片机、高速离心机、全自动生化分析仪、紫外分光光度计 4、试剂：油红 O 染料、血清丙二醛试剂盒、超氧化物歧化酶试剂盒、胎牛血清。 研究计划与进度安排： 2015年1月- - 2月完成相关文献检索；制定实验方案，书写开题报告。 2015年2月- - 4月按照既定实验方案进行实验研究。 2015年4月-- 5月整理实验资料，撰写结题报告；完成毕业论文。 主要参考文献： [1] 徐也鲁.动脉粥样硬化—种慢性炎症过程[J].中国动脉硬化杂志,2001,9(2):93-95. [2] Libby P.Inflammation in atherosclerosis[J].Nature,2002,420:868-874. [3] 范黎.食药用真菌:天然抗氧化剂的重要来源.微生物学通报，2011,38(6):957. [4] 陈瑗,周玫.氧化应激——炎症在动脉粥样硬化发生发展中作用研究的新进展.中国动脉硬化杂志,2008,16(10):757-762. [5] 徐佳杨.氧化低密度脂蛋白与动脉粥样硬化的研究[J].安徽医药,2011:15(2)228-230. [6] 徐倩,曹凯,周晓慧等. 丹皮酚对同型半胱氨酸损伤内皮细胞eNOS表达及NO水平的影响[J].中成药,2012,34(12):2286-2301 [7] 郭齐,李贻奎,王志国等.丹皮酚药理研究进展[J].中医药信息,2009,26(1):20-24. [8] 戴敏,訾晓梅,彭代银等.丹皮酚抗鹌鹑试验性动脉粥样硬化作用[J].中国中药杂志,1999,24(8):488-90. [9] 戴敏,李后开.丹皮酚对动脉粥样硬化家兔血管平滑肌细胞增殖的影响[J].中国药理学通报,2006,22(5):587-591. [10] 王惠,骞秀芳,朱哲等.丹皮酚对动脉粥样硬化大鼠抗氧化作用研究[J]. 实用中医药杂志,2014,30(11):998-990. [11] 戴敏,刘青云,顾承刚等.丹皮酚对脂质过氧化反应及低密度脂蛋白氧化修饰的抑制作用[J].中国中药杂志,2000,25(10):625-627 指导教师意见： 指导教师签字： 年 月 日 院毕业论文（设计）答辩领导组意见： 盖章： 年 月 日