血培养阳性标本直接鉴定和药敏试验不同方法对比性研究

Modem Practical Medicine, November 2016, Vol. 28, No. 11

血培养阳性标本直接鉴定和药敏试验不同方法 对比性研究

段达荣，张虹，蔡莎莎，喻长法

【摘要】目的比较血培养阳性标本用不同方法进行直接细菌鉴定和药敏的可行性。方法选取607例Bact/Alert 3D全自动血培养仪中阳性报警血培养标本，抽取培养液，利用不同转速离心，用VITEK2 Compact全自动鉴定药 敏仪直接做鉴定和药敏试验，同时用K-B法、E-test法、MIC法进行药敏试验,用标准API法鉴定和标准MIC法 对药敏对结果进行评估。结果607例标本中革兰阴性杆菌342株，革兰阳性球菌265株，鉴定符合率分别为 97.1%、91.3%,总符合率为94.6%。仪器法、K-B法、E-test法、MIC法与标准MIC法比较，革兰阴性菌符合率分别 为96.6%、91.3%、92.8%、93.0%,革兰阳性菌符合率分别为93.5%、90.3%、91.6%、95.1%。结论血培养阳性标本 进行不同转速离心处理后直接用VITEK 2 Compact做鉴定是切实可行的。仪器法、K-B法、E-test法、MIC法各 有优势，联合使用不同的药敏检测方法才能得到相对准确的结果。【关键词】阳性血培养;直接法;细菌鉴定;药敏试验

doi: 10.3969/j .issn.1671-0800.2016.11.049

【中图分类号】R446.5【文献标志码】A

【文章编号】1671-0800(2016)1

1504-03

沉淀细菌用0.45%无菌盐水调菌悬液0.5

血培养是诊断血流感染的重要方 菌感染不作为研究范畴。

3D血培养 〜0.63麦氏浊度(MCF),革兰阳性菌用 法，阳性率大多在10%左右[1],对这些阳 1.2仪器及材料Bact/Alert

SN、PF血培养瓶、VITEK 移液器吸280 (il刹3.0 ml 0.45%无菌盐 性标本的病原菌进行及时、有效鉴定和 仪及配套FA、Compact全自动鉴定药敏仪及配套GP 药敏试验就显得尤为重要。通常血培养 2

7jC试管中做药敏，分别在两试管放GP卡

GP67药敏卡、GN鉴定卡、GN16 和GP67卡；革兰阴性杆菌用移液器吸 标本从送检到鉴定和药敏试验结果反馈 鉴定卡、

到临床，最快要48〜72 h,显然不能满 药敏卡、E-test法试纸条及API板条均为 145 (il到3.0 ml 0.45%无菌盐水试管中 分别在两试管放GN卡和GN16 购自杭州怡丹生 做药敏，足抗感染治疗的需要。为了使临床尽快 法国梅里埃公司产品，

K-B法药敏纸片及微 卡，放入VITEK 2 Compact全自动鉴定 得到有效、正确的鉴定和药敏结果，更好 物技术有限公司；h后记录 药敏仪进行充液和上机,6〜8 地临床诊断和治疗，有效地控制院内发 量肉汤稀释法用抗生素为OXOID产品，

生感染的概率，防止经验用药，笔者收集 购自杭州威最生物公司;血平板、MH平板 仪器检测结果。

Bact/Alert 3D血培养仪检测到阳性标本 及巧克力平麵自杭州戯生物公司。曰 1.3.3 K-B法直接药敏试验在0.9%

607例,用不同转速离心处理，直接使用 本三洋二*化碳■号:MCXW75)，趟

无菌盐水的试管内加入离心处理好的待

调至0.5 MCF,用棉签均匀涂抹在 VITEK 2 Compact进行鉴定和药敏，同 一麵減亘(型号:GHP^05QN)。 测菌，时用K-B法、E-test法和MIC法进行直 1.3方法

MH平板上，贴上待测药敏纸片，35 °C

接药敏试验，并用标准MIC法进行准确 1.3.1阳性标本处理将临床采集的血 24 h,根据最新版CLSI (美国临床和实验 性评估,现报道如下。

1

培养瓶放入Bact/Alert 3D血培养仪，系 室标准化协会)要求进行药敏结果判读。

材料与方法

test法直接药敏试验在0.9% 统自动孵育和检测，当阳性报警时取出 1.3.4 E-血培养瓶，用75%酒精消毒血培养瓶口， 无菌盐水的试管内加入离心处理好的待

ml移 测菌，调至0.5 MCF,用棉签均匀涂抹在 1.1标本收集浙江省台州市第一人 用注射器抽取阳性瓶内培养液0.5

接CLSI要求用E-test纸片 民医院2014年1月至2015年2月临床 种血平板进行传统次代培养，同时对阳 MH平板上，

待35°C 血培养阳性标本607例，其中革兰阴性 性培养液进行涂片和革兰染色。如果染 法检测菌株药敏试验的敏感性，杆菌342株，革兰阳性球菌265株。真 色是单一革兰阳性球菌或革兰阴性杆菌, 24h得出E-test法直接药敏试验结果。菌、专性厌氧菌、革兰阳性杆菌及多重细

符合本试验要求，进行如下操作:抽取培 1.3.5 MIC法直接药敏试验在0.9% 养瓶内5〜7ml培养液于无菌试管内进 无菌盐水的试管内加入离心处理好的待

基金项目：台州市黄岩区科技局项目 行不同转速离心处理（先进行150 r/min 测菌，调至0.5 MCF,再稀释200倍，按

(2013059-2)

离心5 min,收集上清液，再1 525 r/min CLSI要求对待测药物进行浓度稀释，并 离心15 min，沉淀用0.9%氯化钠注射液 每管加稀释好的菌悬液50 nl，35 -C培养 洗涤离心2次)，离心收集菌的细胞，作 12〜18 h观察结果，并记录。为直接法鉴定和药敏的待测菌。1.3.2仪器法直接鉴定和药敏试验将

1.3.6标准API法鉴定取移种血平板 或巧克力平板培养18〜24 h后的纯菌

作者单位：318020浙江省台州，台州市第一人民医院

通信作者：段达荣，Email:

tzddr@163.com

现代实用医学2016年11月第28卷第11期

• 1505 •

表1 VITEK 2 Compact仪器直接法和标准API法鉴定结果的对比

VITEK 2 Compact仪器直接法符合率(％)总株数

正确

错误

0 0 2 3 0 0 1 1 0 0 2

6

落，按API板条鉴定说明书进行操作，并 以此结果作为鉴定标准结果。

1.3.7标准MIC法药敏试验血培养 阳性报警时移种血平板上，置5% C02, 35 'C培养18〜24 h,生长出来的菌落, 根据革兰染色情况，在0.9%无菌氯化钠 溶液的试管内调至0.5 MCF的菌悬液, 再稀释200倍，按CLSI要求对待测药物 进行浓度稀释，并每管加稀释好的菌悬 液5〇nl,35°C培养12〜18h观察结果， 并以此结果作为药敏标准结果。1.4判断标准实验材料、操作严格按 照CLSI《抗生素药敏试验执行标准》及 《需氧菌稀释法抗生素药敏试验标准方 法》规则进行执行和判断，符合率为实验 方法与参照方法的结果一致性。质控菌 株:大肠埃希氏菌ATCC25922,铜绿假单 胞菌ATCC27853,金黄色葡萄球菌

细菌

不能

001100010001111119

100.0100.092.785.7100.0100.083.333.3100.0100.094.176.794.486.793.358.316.794.6

革兰阴性菌大肠埃希氏菌肺炎克雷伯菌鲍曼不动杆菌铜绿假单胞菌阴沟肠杆菌沙门氏菌其他肠杆科细菌其他非发酵菌革兰阳性菌金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌溶血葡萄球菌人葡萄球菌粪肠球菌屎肠球菌肺炎链球菌其他葡萄球菌其他链球菌合计抗生素

72633430181515126607

7263322317131471574

15683412817863

15683382417851

0 1 0 4 4 24

ATCC29213,金黄色葡萄球菌 ATCC25923,肺炎克雷伯菌 ATCC700603。

2

结果

表2 342株革兰阴性菌直接法和标准MIC法药敏结果

K-B法E-test 法药敏总数仪器法

直接药敏

3423423423423423423423423423423 420

338(98.8)329(96.2)331(96.8)336(98.2)331(96.7)338(98.8)319(93.3)331(96.7)334(97.7)318(93.0)3 305(96.6)

株(％)

MIC法

2.1鉴定结果以标准API法鉴定结

果作为鉴定标准结果，342株革兰阴性 亚胺培南杆菌和265株革兰阳性球菌，鉴定符合 阿米卡星

率分别为97.1%、91.3%,总符合率为 头孢吡肟94.6%,见表 1。

2.2药敏结果用标准MIC法药敏试 验结果作为标准结果，革兰阴性菌仪器

左氧氟沙星阿莫西林/克拉维酸头孢西丁

哌拉西林/他唑巴坦

直接药敏

318(93.0)308(90.1)338(98.8)294(86.0)299(87.4)2(84.5)332(97.1)310(90.6)332(97.1)301(88.0)3 121(91.3)

直接药敏

322(94.2)335(97.9)317(92.7)301(88.0)299(87.4)328(95.9)305(.2)317(92.7)330(96.5)320(93.6)

直接药敏

329(96.2)312(91.2)325(95.0)338(98.8)312(91.2)309(90.4)318(93.)302(88.3)328(95.9)309(90.4)

法、K-B法、E-test法、MIC法直接药敏试 氨曲南

验符合率分别为96.6%、91.3%、92.8%、 头孢曲松93.0%，革兰阳性菌符合率分别为 替加环素93.5%、90.3%、91.6%、95.1%，见表 2、3。3

讨论

传统方法对血培养阳性标本进行细 菌鉴定及药敏实验通常需要2〜3 d。

合计

3 174(92.8)3 182(93.0)

染均有重要的临床意义气这些细菌对培养环境要求较高，在鉴定

对阳性标 本研究显示，血培养阳性标本总符 卡中生长缓慢或不充分有关。合率94.6%(574/607)，革兰阴性杆菌和 本进行药敏试验,用标准MIC法药敏作 用仪器法、K-B法、E-test 革兰阳性球菌的符合率分别为97.1% 为参考方法，

MIC法直接药敏试验与之比较，革兰 血流感染病原菌鉴定报告时间每延迟1 h， (332/342)、91.3% (242/265),均高于 法、

51对革兰阴性菌 阴性菌符合率分别为96.6%、91.3%、患者存活率降低7.6%,因此对血培养阳 Quesada等w和Ling等1

性标本进行及时、准确的鉴定和药敏就 显得尤为重要'用血培养阳性标本进 行离心后获得的纯菌，根据革兰染色情

93.0%,革兰阳性菌符合率分别 直接鉴定符合率82%〜90%,也高于1^1- 92.8%、

90.3%、91.6%、95.1%,仪器法 petti等M和Cherardi等[7!对革兰阳性菌 为 93.5%、直接鉴定符合率75%〜88%。可能是本 直接药敏符合率要高于K-B法、E-test

这是由于K-B法和E-test法是根据 多次洗涤，去 法，况直接进行鉴定和药敏，在阳性报警次 研究采用了不同转速离心，

日便可将直接鉴定和药敏结果报告给临 除血培养液中微量的血液细胞和纤维成抑菌环直径或抗生素抑菌浓度的负相关 而设计的试验，难免会有许多，同时 床医生，有助于临床医生合理使用抗菌药 分等对细菌的生化反应的影响。此外,

物及制定治疗方案，避免了经验用药，对 仪器直接法对非发酵菌和其他链球菌的 也存在人为主观判读的误差'革兰阴 减少并发症、提尚治愈率，控制医院内感

鉴定符合率相对较低，其中原因是由于

性菌仪器法直接药敏符合率高于MIC

• 1506 •

法直接药敏，而革兰阳性菌恰好相反，说 明对于不同的细菌，仪器法与MIC法直 抗生素接药敏试验各有不同的优势。

本研究也存在一定的局限性，直接

青霉素G苯唑西林

药敏总数

265201

Modem Practical Medicine, November 2016, Vol. 28, No. 11

表3 265株革兰阳性菌直接法和标准MIC法药敏结果

株(％)

MIC法

仪器法 直接药敏

243(91.7)190(94.5)253(95.5)242(91.3)192(95.5)169(94.1)

K-B法E-test 法

直接药敏

230(86.7)188(93.5)246(92.8)235(88.7)186(92.5)180(.6)245(92.5)233(87.9)30(90.9)31(93.3)11(73.3)1 815(90.3)

直接药敏

235(88.7)183(91.0)243(91.7)239(90.1)1(94.0)1(94.0)245(92.5)244(92.1)31(93.9)29(87.9)14(93.3)1 841(91.6)

直接药敏

260(98.1)201(100.0)255(96.2)245(92.5)188(93.5)180(.6)255(96.2)248(93.6)31(93.9)32(97.0)15(100.0)1 910(95.1)

法只能应用于葡萄球菌、肠杆菌科等生 喹奴普汀/达福普汀265长速度比较快的细菌,不太适合真菌、专 左氧氟沙星265性厌氧菌、革兰阳性杆菌等特殊培养要 复方新诺明求的细菌。如果患者是多重细菌感染， 庆大霉素

201201

265262(98.9)阳性瓶中如果生长不是单一菌株，也不 万古霉素

265253(95.5)环丙沙星

适合直接法进行鉴定及药敏试验[9]。除

3330(90.9)氨苄西林

此之外，由于革兰染色镜检具有主观性，

3330(90.9)庆大霉素高浓度

要求技术人员应具有丰富的细菌形态学

14(93.3)15头孢噻肟

知识及形态工作经验，同时要加强实验 2 0091 878(93.5)合计室革兰染色的质量管理，提高临床诊断 tilication and susceptibility testing of Gram-

fication and antibiotic susceptibility testing

directly from blood cultures of Gram-nega­tive and Gram-positive isolate [J]. Diagn Microbiol Infect Dis,2012,72(1):20-31.[8]

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收稿日期:2016-05-20(本文编辑:孙海儿)

聚合酶链反应检验法在阴道炎患者阴道细菌

检查中的应用价值

鲍盛杰，李海雁

【摘要】目的探究聚合酶链反应(PCR)检验法在阴道炎患者阴道细菌检查中的价值。方法将200例细菌性阴 道炎患者分成两组，各100例。观察组给予PCR法进行检查，对照组采用细菌培养法进行检查。结果细菌培 养法检出加特纳菌47例,PCR检验法检出加特纳菌72例，两者差异有统计学意义(P < 0.05);但两种检测方法 所检测®球菌和棒状杆菌例数差异均无统计学意义（均P> 0.05)。细菌培养法的特异性为85.2%,灵敏度为 84.5%;低于PCR检验法(94.4%、98.3%,均户< 0.05)。PCR检验法阳性检出率髙于细菌培养法(P< 0.05)。结 论

PCR检验法检测阴道炎感染菌种的阳性检出率、检测灵敏度和特异性均优于细菌培养法。

阴道病，细菌性;聚合酶链反应;细菌培养法

【关键词】

doi:10.3969/j.issn,1671-0800.2016.11.050

【中图分类号】R711.31;R446【文献标志码】A

【文章编号】1671-0800(2016)11-1506-03

作者单位：313000浙江省湖州,湖州市第一人民医院(鲍盛杰);湖州市妇幼保健院(李海雁）通信作者：鲍盛杰，Email:21870707@qq.com