中国肿瘤生物治疗杂志http://www.biother.org ・Chin J Cancer Biother,Jun.2010,Vo1.17,No.3 327・ DOI:10.3872/j.issn.1007-385X.2010.03.016 ・基础研究・ 细胞因子诱导的杀伤细胞对宫颈癌细胞的体内外杀伤效应 胡必成 ,姜祥兵 ,马 威 ,崔天盆’(1.武汉市第一医院检验科,湖北武汉430022;2.武汉市第一医院妇产 科,湖北武汉430022) [摘要] 目的:探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine—induced killer cells,CIKs)对宫颈癌CasKi和Hela细胞的体内外杀 伤效应。方法:从宫颈癌患者的外周血分离单个核细胞,以改良方法(不加IFN一 ,只加IL一2和anti—CD3抗体)刺激扩增得到 CIKs,用流式细胞仪分析CIKs表型。ELISA法检测CIKs培养上清中IFN一 、IL一2和TNF— 的分泌水平。LDH释放法检测 CIKs对CasKi和HeLa细胞的杀伤作用。建立荷CasKi或Hela细胞小鼠模型,以1×10。或1×10 个C1Ks小鼠静脉注射治 疗,每周1次,连续治疗3周,检测小鼠移植瘤的体积和重量。结果:在抗CD3抗体和IL一2的刺激下,宫颈癌患者外周血单个 核细胞被诱导培养成CIKs,其中CD3 CD56 细胞得到大量扩增。PHA激活后,CIKs产生大量的IFN一 和TNF— ,而II 一2的分 泌量较少。被激活的CIKs可显著地杀伤宫颈癌CasKi细胞和HeLa细胞,最大杀伤率分别达(43.2±1.8)%和(46.2± 1.5)%,且呈剂量依赖性。体内抗肿瘤实验结果显示,CIKs能显著抑制小鼠皮下宫颈癌移植瘤的生长(P<0.01)。结论:本 实验的改良方法能有效制备CIKs,该CIKs在体内外对宫颈癌CasKi和Hela细胞有明显的杀伤效应。 [关键词] 宫颈肿瘤;CasKi细胞;HeLa细胞;细胞因子诱导杀伤细胞 [中图分类号] R737.33;R730.51 [文献标志码] A [文章编号] 1007—385X(2010)03-0327-06 Anti・-tumor activity of cytokine--induced killer cells against cervical cancer cells in vivo and in vitro HU Bi—cheng ,JIANG Xiang—bing ,MA Wei ,CUI Tian—pen (1.Department of Clinical Laboratory,Wuhan First Hos. pital,Wuhan 430022,Hubei,China;2.Department of Obstetrics and Gynecology,Wuhan First Hospital,Wuhan 430022,Hubei,China) [Abstract] Objective:To investigate the anti—tumor activity of cytokine—induced killer cells(CIKs)against cervical cancer cell lines.CasKi and HeLa n vitro and in vivo.nethods:The CIKs were induced from peripheral blood nlononu— clear cells(PBMCs)of patients with cervical cancer using an improved method,which only used IL一2 and anti—CD3 anti— body,without IFN一-y;CIKs were so ̄ed using FACS.The levels of IFN一 ,IL一2 and TNF一 in culture supernatants of CIKs were determined by ELlSA.The anti—tumor activities of CIKs against CasKi and HeLa cells were determined by LDH assay.The nude mouse xenografl models of cervical cancer celllines,CasKi or HeLa cells,were established.and l x 1 0。 or 1×l 0 CIKs were administered intravenously once a week for three weeks.then the tumor volumes and weights were measured.ResulIs:CIKs were Successfully induced from PBMCs of cervical cancer patients by IL一2 and anti—CD3 anti— body.with CD3 CD56 cells greatly expanded.CIKs produced significant amounts of IFN一-y and TNF— ,but few IL一2, after PHA stimulation.CIKs dose—dependently killed CasKi and Hela cells with a maxinlum killing rate reaching 43%and 46%,respectively.In addition,the in vivo anti tumor experiments demonstrated that CIKs remarkably inhibited the growth of subcutaneous tumors in nude mice(P<0.0 1).Conclusion:The improved CIKs expansion method used in our study is feasible and the resultant CIKs have remarkable cytotoxicity against Caski and HeLa cells both n vivo and n vitro. [Key words] cervical neoplasms;CasKi cell;HeLa cell;cytokine—induced killer cell 『Chin J Cancer Biother,20l0,17(3):327—332 l [基金项目]武汉市创新人才开发基金资助项目(武人社函[2009]97号)。 ents of Wuhand(No.2009—97) [作者简介]胡必成(1972一),男,湖北省蕲春县人,硕士,主管技师,主要从事I临床免疫学方面的研究。E-mail:hubichen g2ll@sina.ecru [通信作者]崔天盆(CUI Tian—pen,corresponding author),E-mail:tianpencui@hotmail.tom 中国肿瘤生物治疗杂志,2010年6月,17(3) 宫颈癌在全球妇女中的发病率仅次于乳腺癌, 世界上每年约有50万的宫颈癌新发病例,占所有癌 症新发病例的5%,其中80%的病例来自发展中国 细胞培养上清到细胞培养体系中,其中含自分泌的 IFN— 和TNF.ol。细胞活体记数仪观察CIKs的活 性,CIKs的活性通常在85%~95%。 1.3流式细胞术检测CIKs的表型 家_1]。我国宫颈癌每年新发病例超过13万,占世界 新发病例的28.8%[21,且其发病呈年轻化倾向 。 Zur等 首先提出人乳头状瘤病毒(human papillo— ma virus,HPV)可能与宫颈癌发生有关。1995年国 取1 X 10。个CIKs,用含1%BSA的PBS洗1 次,再重悬到100 txl PBS/BSA的缓冲液中。加入 anti—CD3一FITC、anti-CIM.FITC、anti—CD8-PE、anti— 际癌症研究署专题讨论会将HPV感染为宫颈癌的 主要病因,明确宫颈癌是一种感染性疾病 。目前 CD56.APC或anti—CD56一PE,4℃孵育20 min,然后 加入400 l PBS,洗涤后用流式细胞仪检测。 宫颈癌的治疗以手术切除、化疗和放疗为主,但治疗 效果有限,且易复发。已上市的宫颈癌预防性疫苗 不能治疗宫颈癌和乳头瘤病毒感染者。因此,宫颈 癌的生物治疗具有诱人的前景。研究者尝试用不同 方法,包括蛋白、多肽、细胞因子、病毒对宫颈癌进行 生物治疗,一些研究已进入临床前试验 。 免疫细胞疗法治疗肿瘤主要是通过体外扩增和 激活免疫细胞,然后回输到体内杀伤肿瘤细胞。细 胞因子诱导杀伤细胞(cytokine.induced killer cells, CIKs)表达CD3和CD56分子,有很强的肿瘤细胞杀 伤活性¨。’…,且无MHC性¨ 。本课题旨在研 究CIKs对宫颈癌CasKi细胞和HeLa细胞的体内外 杀伤作用,为临床治疗宫颈癌提供实验依据。 1材料与方法 1.1主要材料 宫颈癌CasKi细胞(整合了HPV16基因组的上 皮肿瘤细胞)和HeLa细胞(含HPV18基因组的上 皮肿瘤细胞)购自武汉大学菌种保存中心,用 MEDM培养基(含10%的胎牛血清、100 U/ml青霉 素和100 ̄g/ml链霉素)按常规细胞培养方法进行 培养。Lymphomedia培养基购自日本Lymphotech公 司,抗CD3抗体购自达科为生物技术有限公司,血 凝素(PHA)购自Sigma公司,NP-40购自Sigma公 司。ELISA试剂盒购自RD公司,活细胞记数仪购 自莱卡公司,流式细胞仪购自BD公司。 1.2 CIKs的诱导 宫颈癌患者来自武汉市第一医院妇产科(患者 签署知情同意书,所有实验均遵守武汉市第一医院 伦理道德委员会制定的伦理条例)。取宫颈癌患者 外周血单个核细胞,然后用淋巴细胞分层液分离, PBS洗涤3次,用含10%胎牛血清的Lymphomedia 培养基调整密度至1×10 /ml。加入抗CD3抗体和 重组人IL-2培养5 d,然后更换为含IL一2的Lympho— media培养基,继续培养9 d,即获得CIKs,期间细胞 的密度维持在1×10。/ml。细胞培养时需补充旧的 1.4 ELISA检测细胞因子的产生 体外诱导的CIKs用1~10 g/ml的血凝素 (PHA)刺激24 h,收集上清,用ELISA试剂盒检测 上清中IL.2、TNF.o【和IFN. 的分泌水平。具体方 法参照ELISA试剂盒说明书。 1.5 LDH释放法检测CIKs对肿瘤细胞的杀伤 2 x 10。个CIKs用PBS洗3次,再悬浮在l0 II】1含 10%胎牛血清的RPMI培养基中。以1 X 104细J ̄VlOO 加入96孔圆底板中,每组3复孔。按照效应细胞 (CIKs):靶细胞(肿瘤细胞)即效:靶比为1:1、3:1、10:1 和30:1加入肿瘤靶细胞,37 oC、5%CO 孵育24 h。将 96孔板200×g离心5 min,收集每孑L培养上清液100 。上清液中LDH的活性用Beckman生化分析仪进 行检测,自发释放孔中只加入靶细胞,无效应细胞;最 大释放孔中也只有靶细胞,没有效应细胞,但加入2% NP-40。杀伤率(%):[(LDH ̄-LDH自发释放)/ (LDH最大释放一LDH自发释放)]×100%。 1.6 CIKs对小鼠移植瘤的杀伤疗效检测 BALB/c裸鼠(6~8周)购自湖北省疾病控制 中心,实验动物合格证号为SCXK(鄂)一20084)005。 按实验要求随机分为6组,每组5只,在无病原体的 条件下饲养。为除去NK细胞,小鼠在第1天用200 Gy全身照射。在第0天,将6×10 个HeLa细胞或 CasKi细胞经皮下接种到已被照射的小鼠,接着以 1 X 10。~1×10 个CIKs每周(在0、7、14、21 d)静脉 注射1次。然后测量移植肿瘤的体积。计算公式: 长(mm)×宽(mm)x高(mm)/2。在第28天处死 小鼠,检测小鼠和肿瘤的质量。 1.7统计学处理 数据以z±s表示,采用ANOVA(Prisim,Graph— Pad Software,USA)统计软件进行处理,使用t检验, P<0.05表示差异有统计学意义。 2结果 2.1 CIKs的鉴定 人外周血中CD3 CD56 杀伤细胞稀少,但是 ・330・ 中国肿瘤生物治疗杂志,2010年6月,17(3) 2.3 CIKs剂量依赖性地杀伤CasKi和HeLa细胞 期结果一致,新鲜的PBMC不能杀伤CasKi靶细胞, 但被激活的CIKs可显著地杀伤CasKi和HeLa靶细 胞,最大杀伤率分别达(43.2±1.8)%和(46.2± 5 4 4 3 3 2 2 ∞∞∞∞∞如∞∞∞如o CIKs以MHC非依赖的方式发挥细胞毒作用。 用LDH释放实验检测健康志愿者外周血的PBMC 和CIKs对HeLa和CasKi细胞的细胞毒作用,同预 1.5)%,且呈剂量依赖性(图3)。 .譬 = 0 譬 E:T E:T 图3 CIKs剂量依赖性地杀伤CasKi细胞和HeLa细胞 Fig.3 CIKs killed CasKi and HeLa cells in a dose-dependent manner A:PBMCs and CIKs against CasKi cells;B:CIKs against CasKi and HeLa cells ∞∞∞∞6 4 2 0 8 6 4 2 ∞∞∞∞0 2.4 CIKs在体内的抗肿瘤效应 CIKs以每周1×10。或1×10 个细胞给予小鼠静脉注 照射除去裸鼠内源性NK细胞,6×10 个CasKi 射,结果显示,体内肿瘤分别被抑制(6o.7±5.7)% 或HeLa细胞皮下接种小鼠,移植后第27天肿瘤分别 和(66.6±5.3)%(图4,P<0.01)。5一氟尿嘧啶(10 长 ̄1](430±11.37)mm 和(410±7.15)mm (图4)。 mg/kg)能抑制肿瘤的生长,作为阳性对照。 看 ‘ b=l -, 1 3 6 9 12 15 18 21 24 27 Time after transplantation(t/d) 图4 CIKs在裸鼠体内的抗肿瘤效应 Fig.4 Anti-tumor activity of CIKs against CasKi and HeLa cells in nude mouse xenografl models 尸<0.01 VS CasKi+PBS or HeLa+PBS 3讨论 的NKG2DL介导对肿瘤细胞的杀伤¨ ” ,因此, CIKs对肿瘤的杀伤不依赖肿瘤相关抗原。传统的 肿瘤的免疫细胞治疗策略依赖于肿瘤相关抗原 方法诱导CIKs,以人PBMC在含IFN一 的培养基中 的鉴定,但肿瘤相关抗原仅在一小部分的肿瘤细胞 孵育l d,然后加入抗CD3抗体、IL.2和IL-1B继续 中表达。CIKs是人外周血细胞和小鼠脾细胞在体 培养20 d。其中抗CD3抗体能启动T细胞增殖; 外用IFN- CD3特异性抗体和IL-2刺激后扩增的 IFN一 、IL一1 p和TNF一仅则可增加CIKs的细胞毒作 细胞。CIKs具有NK细胞和T细胞的表型,表达 用;作为诱导CIKs的关键细胞因子,IL-2能增加 NK细胞受体NKG2D,通过识别肿瘤细胞表面表达 CIKs的数量和细胞毒作用。需指出的是,需在加入 胡必成,等.细胞因子诱导的杀伤细胞对宫颈癌细胞的体内外杀伤效应 ・331・ IL一2前加入IFN一 ,反之则导致CIKs细胞毒减弱, 这表明IFN 可能诱导PBMC表达IL一2受体。 CD3 CD56 细胞在尚未扩增前占细胞总数的5%, 扩增后可达到30%左右;CD3 CD56 细胞数量经 细胞因子诱导后在30 d内能扩增大约1 000倍。 本研究简化CIKs培养方法,首先用700 U/ml 的IL一2和抗.CD3抗体培养5 d,再继续用IL 2诱导 9 d。结果显示,增殖所得由不同种类的效应细胞组 成的群体即为CIKs,其中表型为CD3 CD56 的细 胞具有抗肿瘤效应,第14天的数量占总数的35% (图1),其绝对数扩增1 000~1 500倍,表明此方法 可以产生足够数量的CIKs,本实验数据证明其在体 外亦能够保持较高的细胞毒活性(图3)。本研究所 采用的方法不需要加IFN一 ,主要由于用含IL-2的 新鲜培养基直接加到原有的培养上清中,原培养上 清中有细胞白分泌的细胞因子,主要是IFN一 和 TNF-Ot,并可调节CIKs的细胞毒活性。因此,用这 种方法培养CIKs,比较经济,具有临床推广的价值。 本研究在动物模型上证明了CIKs治疗宫颈癌 的可行性。在HPV引起的宫颈癌中,HPV16和 HPV18感染占到65%~70% 』。用CIKs治疗荷 瘤小鼠,小鼠的体重变化不明显,这可能与CIKs产 生IFN- 有关,这与Kim等 研究显示的CD3 CD56 细胞比CD3 CD56一细胞产生更多IFN一 的 结果相吻合。因为IFN一-,/能减弱移植物抗宿主病 (GVHD)的反应。同种动物的脾细胞和骨髓细胞联 合使用,能诱导受体小鼠的GVHD,其特征为体重减 轻并在移植后9 d内死亡 。但是CIKs不易诱导 GVHD,甚至在用10倍于对照脾细胞量的CIKs治 疗时亦未发现明显的GVHD,GVHD反应的减轻可 能与CIKs释放IFN一 有关。用不能产生IFN一 的 IFN一 基因敲除的CIKs治疗时可引起急性致死的 GVHD,而用可释放IFN一 的IFN一 的CIKs时则 不易引起GVHD¨ 。IFN. 还可诱导原发性慢性淋 巴细胞白血病细胞表达CD54(ICAM一】),同时使 CIKs增加,而CIKs又可分泌IFN一^y,CD54与CD18 (LFA一1)结合,介导CIKs与慢性淋巴细胞白血病细 胞接触,促使慢性淋巴细胞白血病细胞凋亡 。 CIKs还可通过CD40/CD40L的结合,逆转肿瘤细胞 对Fas介导的凋亡途径的抗性而介导其凋亡 。 免疫细胞如NK、LAK、CTL和DC治疗肿瘤,各 有其局限性:NK和LAK细胞抗肿瘤活性较低 ; CTL杀伤作用有MHC性,含肿瘤相关性抗原和 肿瘤特异性抗原的CTL体外不易扩增_2 ;异体Dc 细胞不易激活效应T细胞,等等。相比较而言,CIKs 有以下几个优势:容易从肿瘤患者的PBMC诱导产 生较多数量的CIKs;CIKs较NK/LAK细胞具有更 强的抗肿瘤活性;CIKs杀伤作用无MHC性; CIKs是终末效应细胞,能够直接杀伤肿瘤细胞; CIKs不易诱导GVHD 。尽管CIKs具有上述优 势,但CIKs仍不能完全使肿瘤消退,需要与其他方 法联合使用,包括融瘤病毒 、树突状细胞共培 养 、用基因工程的方法对CIKs进一步修饰 竺 26] 寸 O 总之,本研究显示改良培养法有效制备CIKs, CIKs可在体内和体外有效地杀死宫颈癌细胞模型 (整合HPV16基因组的CasKi细胞或整合HPV18 基因组的HeLa细胞),CIKs是宫颈癌细胞免疫疗法 有前途的候选细胞。 [参考文献] (1] Valdespino VM,Valdespino VE.Cervical cancer screening:State ofthe art[J].Clif Opin Obstet Gynecol,2006,l8(1):3540. [2]Parkin DM,Bray F,Ferlay J,Pisani P Estimating the world cancer burden:Globocan 2000[J].Int J Cancer,2001,94(2): 153.156. [3] 乔友林,章文华,李凌,潘秦镜,杨玲,吴令英,等.子 宫颈癌基因筛查方法的横断面比较研究[J].中国医学科学 院学报,2002,24(1):50-53. [4]Zur Hausen H_Papillim avimses in human Calrleer[J].Cancer, 1987,59(10):1692—1696. [5] Walboomers JM,Jacobs MV,Monas MM,Bosch FX,Kummer JA,Shah KV,et a1.Human papillomavirus is a necessary cause of invasive cervical cancer worldwide[J].J Pathol,1999,189(1): 12.19. [6] 郎景和.迎接子宫颈癌预防的全球挑战与机遇[J].中华妇 产科杂志,2002,37(3):129—131. [7] 杨峥蝾,马原栋,万 骏,郑 义,王海峰,赵 洁,等. HPVI6,18,58mE67重组腺病毒的构建及克隆表达[J].免 疫学杂志,2008,24(4):459463. [8]Zheng Y,Zhang YJ,Ma YD,Wan J,Sbi CF,Huang EQ.En— bancement of inununotherapeutic eflhets of HPVI6E7 on cervical cancer by fusion with CTLA4 extracellular region[J].J Microbiol,2008,46(6):728-736. [9]Psy A,DiMaio D.Human papillonmvims in cervical and head- and—neck cmmer[J].Nat Clin Pract Oncol,2008,5(1):24-31. [10]Baker J,Verneris MR,Ito M,Shizuru JA,Ne n RS.Expansion of eytolytie CO8(+)natural killer T ceils with limited capacity for graft—versus—host disease induction due to interferon gamma produc— tion[J].Blood,2001,97(10):2923-2931. [1 1]Lu PH,Negrin RS.A novel population of expanded human CD3 CD56 cells derived from T cells with potent in vivo antitumor ac— tivity in mice with severe combined immun0deficiency[J].J Im— munol,1994,153(4):1687-1696. [12]Leemhuis T,Wells S,Scheffold C,Edinger M,Negrin RS.A ・332・ 中国肿瘤生物治疗杂志,2010年6月,17(3) phase I trial of autofogous eytokine—induced killer cells for the treat— kine—induced killer cells with potent antitumor cell activity[J].J ment of relapsed Hodgkin disease and non—Hodgkin lymphoma Exp Med,1991,174(1):139-149. [J].Biol Blood Marrow Transplant.2005,1l(3):181-187. [21]Grabert RC,Cousens LP,Smith JA,Olson S,Gall J,YoungWB, [13]Vernefis MR,Karami M,Baker J,Jayaswal A,Ne grin RS.Role et a1.Human T cells armed with Her2/neu bispeciifc antibodies of NKG2D signaling in the cytotoxieity of activated and expanded divide,are eytotoxie,and secrete cytokines with repeated stimula- CD8 T cells[J].Blood,2004,103(8):3065-3072 tion[J].Clin Cancer Res,2006,12(2):569-576. [14]黄文荣,张伯龙.细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞的研究现状 [22]Nishimura R,Baker J,Beilhack A,Zeiser R,Olson JA,Sega EI, [J].肿瘤防治研究,2000,27(2):157—159. et a1./n vivo trafifcking and survival of cytokine-induced killer [15]Sankaranarayanan R.HPV vaccination:The promise&problems cells resulting in nfinimal GVHD with retention of natitumor activity [J].Indian J Med Res,2009,130(3):322-326. [J].Blood,2008,112(6):2563-2574. [16]KimHM,Lim J,Yoon YD,Ahn JM,Kang JS,Lee K,et a1.An— [23]Sangiolo D,Martinuzzi E,Todorovie M,Vitaggio K,Vallario A, ti・-tumor activity of egg vivo expanded eytokine・-induced killer cells a-- Jordaney N,el a1.Alloreactivity and anti-tumor activity segregate gainst human hepatocellular carcinoma[J].Int Immunopharma— within two distinct subsets of cytokine・induced killer(CIKs)cells: col,2007,7(13):1793-1801. Implications for their infusion across major HLA barriers[J].Int [17]Hart SB,Lee CW,Yoon YD,Kang JS,Lee KH,Yoon WK,et hnmunol,2008,20(7):841-848. 1a.Effective prevention of lethal acute gr',ft—versus・host disease by [24]Thorne SH,Ne n RS,Contag CH.Synergistie antitumor effects combined immunosuppressive therapy with prodigiosin and cyclos— of immune cell-viral biotherapy[j].Science,2006,311(5768): porine A[J].Bioehem Pharmaeol,2005,70(10):1518-1526. 1780.1784. [18]Komacker M,Moldenhauer G,Herbst M,Weilguni E,Tita-Nwa [25]李世俊,张连生,柴晔,张玉芬,张彦明,曾鹏云,等.树突 F,Halter C,et a1.Cytokine—induced killer cells against autofogous 状细胞与细胞因子诱导的杀伤细胞共培养对多药耐药肿瘤细胞 CLL:Direct cytotoxic effects and inductkm of inTnlune aecessmy 系的杀伤活性[J].中华肿瘤杂志,2007,29(10):733-737. molecules by interferon-gamma[J].Int J Cancer,2006,l l9 [26]Wang K,GaoX,Pang J,LiuX,Cai Y,ZhangY,et a1.Dendrit— (6):1377—1382. ic cells transduced with a PSMA・・encoding adenovirus and cocul・- [19]Yu J,Zhang W,Jiang H,Li H,Cao S,Ren X.CD4 T cells in tured with autologoas eytokine—induced lymphocytes induce a spe- CIKs(CD4 CIKs)reversed resistance to fas—mediated apoptosis eiifc and strong inlmune response against prostate cancer cells[J]. through CIMO/CIMOL ligation rather than IFN—gamma stinmlation Urol Oncol,2009,27(1):26—32. [J].Cancer Biother Radiopharm,2008,23(3):342—354. [20]Schmidt—Wolf IG,Ne n RS,Kiem HP,Blume KG,Weissnmn [收稿日期]2010—02—15 [修回13期]2010—04—06 IL.Use of a SCID mouse/human lymphonm model to evaluate cyto- [本文编辑]王莹 ・科技动态・ USPIO通过去泛素化P53P53的定位和稳定性 P53作为一种重要的肿瘤抑制因子,在肿瘤细胞的生长、凋亡、细胞周期和衰老等过程中发挥着重要作用。P53表达 和定位决定其生物学功能的发挥。P53的表达主要受翻译后,如磷酸化、甲基化和泛素化等,其中E3泛素连接酶Mdm2 在P53的表达和定位中起重要作用,Mdm2通过泛素化1953,导致P53的出核,在胞质内发生蛋白酶体依赖的降解。蛋白 在去泛素化的同时还可被细胞内的去泛素化酶去泛素化。目前,关于P53去泛素化的研究较少,到目前为止,只发现一种去 泛素化酶Hausp可在核内去泛素化稳定P53的表达。但进入胞质内的泛素化P53的命运如何,是否可被去泛素化,再次人核 发挥生物学效应有待证实。 梅奥医院肿瘤研究和病理研究部的科学家们发现了一种泛素特异性蛋白酶USP10可直接结合并去泛素化胞质内的P53, 稳定P53表达,并诱导其再次人核,P53介导的功能,逆转了Mdm2诱导的P53转运和降解过程。P53是DNA损伤的重 要反应元件。作者发现在DNA损伤后,USP10和P53表达明显上调,但当干扰USP10表达后,DNA损伤不影响P53的表达, 这提示在DNA损伤情况下,USP10同样可以稳定P53的表达。DNA损伤介导的信号主要发生在细胞核内,而USP10定位在胞 质中,USPIO是怎样参与P537作者在实验中观察到DNA损伤时,USP10由胞质向胞核移位,并且该USP10表达的上调和 核转位受ATM介导的磷酸化。他们还发现,USPIO在肾肿瘤细胞和肿瘤组织中的表达明显低于正常肾细胞和组织,提示 USPIO可能抑制肾癌的发生;作者利用克隆形成实验证实,USP10可抑制野生型P53肾透明细胞癌的生长。因此,作者提出了 USPIO可作为一种肾肿瘤抑制因子的概念。综上所述,作者发现USP10可去泛素化P53,从而稳定P53及其定位,其介导 的生物学活性。因此,USP10是一种新的P53因子。 (王春梅,李楠审阅.Yuan J,Luo K,Zhang LZ.Cheville JC.Lou ZK,et a1.Cell,2010,140(3),384-396)