中国肿瘤生物治疗杂志ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｔｈｅｒ．ｏｒｇ ・Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｔｈｅｒ，Ｊｕｎ．２０１０，Ｖｏ１．１７，Ｎｏ．３ ３２７・ ＤＯＩ：１０．３８７２／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７－３８５Ｘ．２０１０．０３．０１６ ・基础研究・ 细胞因子诱导的杀伤细胞对宫颈癌细胞的体内外杀伤效应 胡必成 ，姜祥兵 ，马 威 ，崔天盆’（１．武汉市第一医院检验科，湖北武汉４３００２２；２．武汉市第一医院妇产 科，湖北武汉４３００２２） ［摘要］ 目的：探讨细胞因子诱导的杀伤细胞（ｃｙｔｏｋｉｎｅ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌｓ，ＣＩＫｓ）对宫颈癌ＣａｓＫｉ和Ｈｅｌａ细胞的体内外杀 伤效应。方法：从宫颈癌患者的外周血分离单个核细胞，以改良方法（不加ＩＦＮ一 ，只加ＩＬ一２和ａｎｔｉ—ＣＤ３抗体）刺激扩增得到 ＣＩＫｓ，用流式细胞仪分析ＣＩＫｓ表型。ＥＬＩＳＡ法检测ＣＩＫｓ培养上清中ＩＦＮ一 、ＩＬ一２和ＴＮＦ— 的分泌水平。ＬＤＨ释放法检测 ＣＩＫｓ对ＣａｓＫｉ和ＨｅＬａ细胞的杀伤作用。建立荷ＣａｓＫｉ或Ｈｅｌａ细胞小鼠模型，以１×１０。或１×１０ 个Ｃ１Ｋｓ小鼠静脉注射治 疗，每周１次，连续治疗３周，检测小鼠移植瘤的体积和重量。结果：在抗ＣＤ３抗体和ＩＬ一２的刺激下，宫颈癌患者外周血单个 核细胞被诱导培养成ＣＩＫｓ，其中ＣＤ３ ＣＤ５６ 细胞得到大量扩增。ＰＨＡ激活后，ＣＩＫｓ产生大量的ＩＦＮ一 和ＴＮＦ— ，而ＩＩ 一２的分 泌量较少。被激活的ＣＩＫｓ可显著地杀伤宫颈癌ＣａｓＫｉ细胞和ＨｅＬａ细胞，最大杀伤率分别达（４３．２±１．８）％和（４６．２± １．５）％，且呈剂量依赖性。体内抗肿瘤实验结果显示，ＣＩＫｓ能显著抑制小鼠皮下宫颈癌移植瘤的生长（Ｐ＜０．０１）。结论：本 实验的改良方法能有效制备ＣＩＫｓ，该ＣＩＫｓ在体内外对宫颈癌ＣａｓＫｉ和Ｈｅｌａ细胞有明显的杀伤效应。 ［关键词］ 宫颈肿瘤；ＣａｓＫｉ细胞；ＨｅＬａ细胞；细胞因子诱导杀伤细胞 ［中图分类号］ Ｒ７３７．３３；Ｒ７３０．５１ ［文献标志码］ Ａ ［文章编号］ １００７—３８５Ｘ（２０１０）０３－０３２７－０６ Ａｎｔｉ・－ｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅ－－ｉｎｄｕｃｅｄ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌｓ ａｇａｉｎｓｔ ｃｅｒｖｉｃａｌ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＨＵ Ｂｉ—ｃｈｅｎｇ ，ＪＩＡＮＧ Ｘｉａｎｇ—ｂｉｎｇ ，ＭＡ Ｗｅｉ ，ＣＵＩ Ｔｉａｎ—ｐｅｎ （１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｗｕｈａｎ Ｆｉｒｓｔ Ｈｏｓ． ｐｉｔａｌ，Ｗｕｈａｎ ４３００２２，Ｈｕｂｅｉ，Ｃｈｉｎａ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ ａｎｄ Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ，Ｗｕｈａｎ Ｆｉｒｓｔ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｗｕｈａｎ ４３００２２，Ｈｕｂｅｉ，Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ａｎｔｉ—ｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌｓ（ＣＩＫｓ）ａｇａｉｎｓｔ ｃｅｒｖｉｃａｌ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ．ＣａｓＫｉ ａｎｄ ＨｅＬａ ｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ．ｎｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ ＣＩＫｓ ｗｅｒｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｆｒｏｍ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｎｌｏｎｏｎｕ— ｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ（ＰＢＭＣｓ）ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｅｒｖｉｃａｌ ｃａｎｃｅｒ ｕｓｉｎｇ ａｎ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｍｅｔｈｏｄ，ｗｈｉｃｈ ｏｎｌｙ ｕｓｅｄ ＩＬ一２ ａｎｄ ａｎｔｉ—ＣＤ３ ａｎｔｉ— ｂｏｄｙ，ｗｉｔｈｏｕｔ ＩＦＮ一－ｙ；ＣＩＫｓ ｗｅｒｅ ｓｏ￣ｅｄ ｕｓｉｎｇ ＦＡＣＳ．Ｔｈｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＩＦＮ一 ，ＩＬ一２ ａｎｄ ＴＮＦ一 ｉｎ ｃｕｌｔｕｒｅ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔｓ ｏｆ ＣＩＫｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ＥＬｌＳＡ．Ｔｈｅ ａｎｔｉ—ｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ＣＩＫｓ ａｇａｉｎｓｔ ＣａｓＫｉ ａｎｄ ＨｅＬａ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ＬＤＨ ａｓｓａｙ．Ｔｈｅ ｎｕｄｅ ｍｏｕｓｅ ｘｅｎｏｇｒａｆｌ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ｃｅｒｖｉｃａｌ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｌｉｎｅｓ，ＣａｓＫｉ ｏｒ ＨｅＬａ ｃｅｌｌｓ，ｗｅｒｅ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．ａｎｄ ｌ ｘ １ ０。 ｏｒ １×ｌ ０ ＣＩＫｓ ｗｅｒｅ ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓｌｙ ｏｎｃｅ ａ ｗｅｅｋ ｆｏｒ ｔｈｒｅｅ ｗｅｅｋｓ．ｔｈｅｎ ｔｈｅ ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅｓ ａｎｄ ｗｅｉｇｈｔｓ ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ．ＲｅｓｕｌＩｓ：ＣＩＫｓ ｗｅｒｅ Ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ｉｎｄｕｃｅｄ ｆｒｏｍ ＰＢＭＣｓ ｏｆ ｃｅｒｖｉｃａｌ ｃａｎｃｅｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｂｙ ＩＬ一２ ａｎｄ ａｎｔｉ—ＣＤ３ ａｎｔｉ— ｂｏｄｙ．ｗｉｔｈ ＣＤ３ ＣＤ５６ ｃｅｌｌｓ ｇｒｅａｔｌｙ ｅｘｐａｎｄｅｄ．ＣＩＫｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ａｍｏｕｎｔｓ ｏｆ ＩＦＮ一－ｙ ａｎｄ ＴＮＦ— ，ｂｕｔ ｆｅｗ ＩＬ一２， ａｆｔｅｒ ＰＨＡ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ．ＣＩＫｓ ｄｏｓｅ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ ｋｉｌｌｅｄ ＣａｓＫｉ ａｎｄ Ｈｅｌａ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ａ ｍａｘｉｎｌｕｍ ｋｉｌｌｉｎｇ ｒａｔｅ ｒｅａｃｈｉｎｇ ４３％ａｎｄ ４６％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｉｎ ａｄｄｉｔｉｏｎ，ｔｈｅ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｎｔｉ ｔｕｍｏｒ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ ｔｈａｔ ＣＩＫｓ ｒｅｍａｒｋａｂｌｙ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｔｕｍｏｒｓ ｉｎ ｎｕｄｅ ｍｉｃｅ（Ｐ＜０．０ １）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ＣＩＫｓ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｕｓｅｄ ｉｎ ｏｕｒ ｓｔｕｄｙ ｉｓ ｆｅａｓｉｂｌｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔａｎｔ ＣＩＫｓ ｈａｖｅ ｒｅｍａｒｋａｂｌｅ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｇａｉｎｓｔ Ｃａｓｋｉ ａｎｄ ＨｅＬａ ｃｅｌｌｓ ｂｏｔｈ ｎ ｖｉｖｏ ａｎｄ ｎ ｖｉｔｒｏ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］ ｃｅｒｖｉｃａｌ ｎｅｏｐｌａｓｍｓ；ＣａｓＫｉ ｃｅｌｌ；ＨｅＬａ ｃｅｌｌ；ｃｙｔｏｋｉｎｅ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌ 『Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｔｈｅｒ，２０ｌ０，１７（３）：３２７—３３２ ｌ ［基金项目］武汉市创新人才开发基金资助项目（武人社函［２００９］９７号）。 ｅｎｔｓ ｏｆ Ｗｕｈａｎｄ（Ｎｏ．２００９—９７） ［作者简介］胡必成（１９７２一），男，湖北省蕲春县人，硕士，主管技师，主要从事Ｉ临床免疫学方面的研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｕｂｉｃｈｅｎ ｇ２ｌｌ＠ｓｉｎａ．ｅｃｒｕ ［通信作者］崔天盆（ＣＵＩ Ｔｉａｎ—ｐｅｎ，ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ），Ｅ－ｍａｉｌ：ｔｉａｎｐｅｎｃｕｉ＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｔｏｍ 中国肿瘤生物治疗杂志，２０１０年６月，１７（３） 宫颈癌在全球妇女中的发病率仅次于乳腺癌， 世界上每年约有５０万的宫颈癌新发病例，占所有癌 症新发病例的５％，其中８０％的病例来自发展中国 细胞培养上清到细胞培养体系中，其中含自分泌的 ＩＦＮ— 和ＴＮＦ．ｏｌ。细胞活体记数仪观察ＣＩＫｓ的活 性，ＣＩＫｓ的活性通常在８５％～９５％。 １．３流式细胞术检测ＣＩＫｓ的表型 家＿１］。我国宫颈癌每年新发病例超过１３万，占世界 新发病例的２８．８％［２１，且其发病呈年轻化倾向 。 Ｚｕｒ等 首先提出人乳头状瘤病毒（ｈｕｍａｎ ｐａｐｉｌｌｏ— ｍａ ｖｉｒｕｓ，ＨＰＶ）可能与宫颈癌发生有关。１９９５年国 取１ Ｘ １０。个ＣＩＫｓ，用含１％ＢＳＡ的ＰＢＳ洗１ 次，再重悬到１００ ｔｘｌ ＰＢＳ／ＢＳＡ的缓冲液中。加入 ａｎｔｉ—ＣＤ３一ＦＩＴＣ、ａｎｔｉ－ＣＩＭ．ＦＩＴＣ、ａｎｔｉ—ＣＤ８－ＰＥ、ａｎｔｉ— 际癌症研究署专题讨论会将ＨＰＶ感染为宫颈癌的 主要病因，明确宫颈癌是一种感染性疾病 。目前 ＣＤ５６．ＡＰＣ或ａｎｔｉ—ＣＤ５６一ＰＥ，４℃孵育２０ ｍｉｎ，然后 加入４００ ｌ ＰＢＳ，洗涤后用流式细胞仪检测。 宫颈癌的治疗以手术切除、化疗和放疗为主，但治疗 效果有限，且易复发。已上市的宫颈癌预防性疫苗 不能治疗宫颈癌和乳头瘤病毒感染者。因此，宫颈 癌的生物治疗具有诱人的前景。研究者尝试用不同 方法，包括蛋白、多肽、细胞因子、病毒对宫颈癌进行 生物治疗，一些研究已进入临床前试验 。 免疫细胞疗法治疗肿瘤主要是通过体外扩增和 激活免疫细胞，然后回输到体内杀伤肿瘤细胞。细 胞因子诱导杀伤细胞（ｃｙｔｏｋｉｎｅ．ｉｎｄｕｃｅｄ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌｓ， ＣＩＫｓ）表达ＣＤ３和ＣＤ５６分子，有很强的肿瘤细胞杀 伤活性¨。’…，且无ＭＨＣ性¨ 。本课题旨在研 究ＣＩＫｓ对宫颈癌ＣａｓＫｉ细胞和ＨｅＬａ细胞的体内外 杀伤作用，为临床治疗宫颈癌提供实验依据。 １材料与方法 １．１主要材料 宫颈癌ＣａｓＫｉ细胞（整合了ＨＰＶ１６基因组的上 皮肿瘤细胞）和ＨｅＬａ细胞（含ＨＰＶ１８基因组的上 皮肿瘤细胞）购自武汉大学菌种保存中心，用 ＭＥＤＭ培养基（含１０％的胎牛血清、１００ Ｕ／ｍｌ青霉 素和１００￣ｇ／ｍｌ链霉素）按常规细胞培养方法进行 培养。Ｌｙｍｐｈｏｍｅｄｉａ培养基购自日本Ｌｙｍｐｈｏｔｅｃｈ公 司，抗ＣＤ３抗体购自达科为生物技术有限公司，血 凝素（ＰＨＡ）购自Ｓｉｇｍａ公司，ＮＰ－４０购自Ｓｉｇｍａ公 司。ＥＬＩＳＡ试剂盒购自ＲＤ公司，活细胞记数仪购 自莱卡公司，流式细胞仪购自ＢＤ公司。 １．２ ＣＩＫｓ的诱导 宫颈癌患者来自武汉市第一医院妇产科（患者 签署知情同意书，所有实验均遵守武汉市第一医院 伦理道德委员会制定的伦理条例）。取宫颈癌患者 外周血单个核细胞，然后用淋巴细胞分层液分离， ＰＢＳ洗涤３次，用含１０％胎牛血清的Ｌｙｍｐｈｏｍｅｄｉａ 培养基调整密度至１×１０ ／ｍｌ。加入抗ＣＤ３抗体和 重组人ＩＬ－２培养５ ｄ，然后更换为含ＩＬ一２的Ｌｙｍｐｈｏ— ｍｅｄｉａ培养基，继续培养９ ｄ，即获得ＣＩＫｓ，期间细胞 的密度维持在１×１０。／ｍｌ。细胞培养时需补充旧的 １．４ ＥＬＩＳＡ检测细胞因子的产生 体外诱导的ＣＩＫｓ用１～１０ ｇ／ｍｌ的血凝素 （ＰＨＡ）刺激２４ ｈ，收集上清，用ＥＬＩＳＡ试剂盒检测 上清中ＩＬ．２、ＴＮＦ．ｏ【和ＩＦＮ． 的分泌水平。具体方 法参照ＥＬＩＳＡ试剂盒说明书。 １．５ ＬＤＨ释放法检测ＣＩＫｓ对肿瘤细胞的杀伤 ２ ｘ １０。个ＣＩＫｓ用ＰＢＳ洗３次，再悬浮在ｌ０ ＩＩ】１含 １０％胎牛血清的ＲＰＭＩ培养基中。以１ Ｘ １０４细Ｊ￣ＶｌＯＯ 加入９６孔圆底板中，每组３复孔。按照效应细胞 （ＣＩＫｓ）：靶细胞（肿瘤细胞）即效：靶比为１：１、３：１、１０：１ 和３０：１加入肿瘤靶细胞，３７ ｏＣ、５％ＣＯ 孵育２４ ｈ。将 ９６孔板２００×ｇ离心５ ｍｉｎ，收集每孑Ｌ培养上清液１００ 。上清液中ＬＤＨ的活性用Ｂｅｃｋｍａｎ生化分析仪进 行检测，自发释放孔中只加入靶细胞，无效应细胞；最 大释放孔中也只有靶细胞，没有效应细胞，但加入２％ ＮＰ－４０。杀伤率（％）：［（ＬＤＨ￣－ＬＤＨ自发释放）／ （ＬＤＨ最大释放一ＬＤＨ自发释放）］×１００％。 １．６ ＣＩＫｓ对小鼠移植瘤的杀伤疗效检测 ＢＡＬＢ／ｃ裸鼠（６～８周）购自湖北省疾病控制 中心，实验动物合格证号为ＳＣＸＫ（鄂）一２００８４）００５。 按实验要求随机分为６组，每组５只，在无病原体的 条件下饲养。为除去ＮＫ细胞，小鼠在第１天用２００ Ｇｙ全身照射。在第０天，将６×１０ 个ＨｅＬａ细胞或 ＣａｓＫｉ细胞经皮下接种到已被照射的小鼠，接着以 １ Ｘ １０。～１×１０ 个ＣＩＫｓ每周（在０、７、１４、２１ ｄ）静脉 注射１次。然后测量移植肿瘤的体积。计算公式： 长（ｍｍ）×宽（ｍｍ）ｘ高（ｍｍ）／２。在第２８天处死 小鼠，检测小鼠和肿瘤的质量。 １．７统计学处理 数据以ｚ±ｓ表示，采用ＡＮＯＶＡ（Ｐｒｉｓｉｍ，Ｇｒａｐｈ— Ｐａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，ＵＳＡ）统计软件进行处理，使用ｔ检验， Ｐ＜０．０５表示差异有统计学意义。 ２结果 ２．１ ＣＩＫｓ的鉴定 人外周血中ＣＤ３ ＣＤ５６ 杀伤细胞稀少，但是 ・３３０・ 中国肿瘤生物治疗杂志，２０１０年６月，１７（３） ２．３ ＣＩＫｓ剂量依赖性地杀伤ＣａｓＫｉ和ＨｅＬａ细胞 期结果一致，新鲜的ＰＢＭＣ不能杀伤ＣａｓＫｉ靶细胞， 但被激活的ＣＩＫｓ可显著地杀伤ＣａｓＫｉ和ＨｅＬａ靶细 胞，最大杀伤率分别达（４３．２±１．８）％和（４６．２± ５ ４ ４ ３ ３ ２ ２ ∞∞∞∞∞如∞∞∞如ｏ ＣＩＫｓ以ＭＨＣ非依赖的方式发挥细胞毒作用。 用ＬＤＨ释放实验检测健康志愿者外周血的ＰＢＭＣ 和ＣＩＫｓ对ＨｅＬａ和ＣａｓＫｉ细胞的细胞毒作用，同预 １．５）％，且呈剂量依赖性（图３）。 ．譬 ＝ ０ 譬 Ｅ：Ｔ Ｅ：Ｔ 图３ ＣＩＫｓ剂量依赖性地杀伤ＣａｓＫｉ细胞和ＨｅＬａ细胞 Ｆｉｇ．３ ＣＩＫｓ ｋｉｌｌｅｄ ＣａｓＫｉ ａｎｄ ＨｅＬａ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ａ ｄｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍａｎｎｅｒ Ａ：ＰＢＭＣｓ ａｎｄ ＣＩＫｓ ａｇａｉｎｓｔ ＣａｓＫｉ ｃｅｌｌｓ；Ｂ：ＣＩＫｓ ａｇａｉｎｓｔ ＣａｓＫｉ ａｎｄ ＨｅＬａ ｃｅｌｌｓ ∞∞∞∞６ ４ ２ ０ ８ ６ ４ ２ ∞∞∞∞０ ２．４ ＣＩＫｓ在体内的抗肿瘤效应 ＣＩＫｓ以每周１×１０。或１×１０ 个细胞给予小鼠静脉注 照射除去裸鼠内源性ＮＫ细胞，６×１０ 个ＣａｓＫｉ 射，结果显示，体内肿瘤分别被抑制（６ｏ．７±５．７）％ 或ＨｅＬａ细胞皮下接种小鼠，移植后第２７天肿瘤分别 和（６６．６±５．３）％（图４，Ｐ＜０．０１）。５一氟尿嘧啶（１０ 长￣１］（４３０±１１．３７）ｍｍ 和（４１０±７．１５）ｍｍ （图４）。 ｍｇ／ｋｇ）能抑制肿瘤的生长，作为阳性对照。 看 ‘ ｂ＝ｌ －， １ ３ ６ ９ １２ １５ １８ ２１ ２４ ２７ Ｔｉｍｅ ａｆｔｅｒ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ（ｔ／ｄ） 图４ ＣＩＫｓ在裸鼠体内的抗肿瘤效应 Ｆｉｇ．４ Ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＣＩＫｓ ａｇａｉｎｓｔ ＣａｓＫｉ ａｎｄ ＨｅＬａ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｎｕｄｅ ｍｏｕｓｅ ｘｅｎｏｇｒａｆｌ ｍｏｄｅｌｓ 尸＜０．０１ ＶＳ ＣａｓＫｉ＋ＰＢＳ ｏｒ ＨｅＬａ＋ＰＢＳ ３讨论 的ＮＫＧ２ＤＬ介导对肿瘤细胞的杀伤¨ ” ，因此， ＣＩＫｓ对肿瘤的杀伤不依赖肿瘤相关抗原。传统的 肿瘤的免疫细胞治疗策略依赖于肿瘤相关抗原 方法诱导ＣＩＫｓ，以人ＰＢＭＣ在含ＩＦＮ一 的培养基中 的鉴定，但肿瘤相关抗原仅在一小部分的肿瘤细胞 孵育ｌ ｄ，然后加入抗ＣＤ３抗体、ＩＬ．２和ＩＬ－１Ｂ继续 中表达。ＣＩＫｓ是人外周血细胞和小鼠脾细胞在体 培养２０ ｄ。其中抗ＣＤ３抗体能启动Ｔ细胞增殖； 外用ＩＦＮ－ ＣＤ３特异性抗体和ＩＬ－２刺激后扩增的 ＩＦＮ一 、ＩＬ一１ ｐ和ＴＮＦ一仅则可增加ＣＩＫｓ的细胞毒作 细胞。ＣＩＫｓ具有ＮＫ细胞和Ｔ细胞的表型，表达 用；作为诱导ＣＩＫｓ的关键细胞因子，ＩＬ－２能增加 ＮＫ细胞受体ＮＫＧ２Ｄ，通过识别肿瘤细胞表面表达 ＣＩＫｓ的数量和细胞毒作用。需指出的是，需在加入 胡必成，等．细胞因子诱导的杀伤细胞对宫颈癌细胞的体内外杀伤效应 ・３３１・ ＩＬ一２前加入ＩＦＮ一 ，反之则导致ＣＩＫｓ细胞毒减弱， 这表明ＩＦＮ 可能诱导ＰＢＭＣ表达ＩＬ一２受体。 ＣＤ３ ＣＤ５６ 细胞在尚未扩增前占细胞总数的５％， 扩增后可达到３０％左右；ＣＤ３ ＣＤ５６ 细胞数量经 细胞因子诱导后在３０ ｄ内能扩增大约１ ０００倍。 本研究简化ＣＩＫｓ培养方法，首先用７００ Ｕ／ｍｌ 的ＩＬ一２和抗．ＣＤ３抗体培养５ ｄ，再继续用ＩＬ ２诱导 ９ ｄ。结果显示，增殖所得由不同种类的效应细胞组 成的群体即为ＣＩＫｓ，其中表型为ＣＤ３ ＣＤ５６ 的细 胞具有抗肿瘤效应，第１４天的数量占总数的３５％ （图１），其绝对数扩增１ ０００～１ ５００倍，表明此方法 可以产生足够数量的ＣＩＫｓ，本实验数据证明其在体 外亦能够保持较高的细胞毒活性（图３）。本研究所 采用的方法不需要加ＩＦＮ一 ，主要由于用含ＩＬ－２的 新鲜培养基直接加到原有的培养上清中，原培养上 清中有细胞白分泌的细胞因子，主要是ＩＦＮ一 和 ＴＮＦ－Ｏｔ，并可调节ＣＩＫｓ的细胞毒活性。因此，用这 种方法培养ＣＩＫｓ，比较经济，具有临床推广的价值。 本研究在动物模型上证明了ＣＩＫｓ治疗宫颈癌 的可行性。在ＨＰＶ引起的宫颈癌中，ＨＰＶ１６和 ＨＰＶ１８感染占到６５％～７０％ 』。用ＣＩＫｓ治疗荷 瘤小鼠，小鼠的体重变化不明显，这可能与ＣＩＫｓ产 生ＩＦＮ－ 有关，这与Ｋｉｍ等 研究显示的ＣＤ３ ＣＤ５６ 细胞比ＣＤ３ ＣＤ５６一细胞产生更多ＩＦＮ一 的 结果相吻合。因为ＩＦＮ一－，／能减弱移植物抗宿主病 （ＧＶＨＤ）的反应。同种动物的脾细胞和骨髓细胞联 合使用，能诱导受体小鼠的ＧＶＨＤ，其特征为体重减 轻并在移植后９ ｄ内死亡 。但是ＣＩＫｓ不易诱导 ＧＶＨＤ，甚至在用１０倍于对照脾细胞量的ＣＩＫｓ治 疗时亦未发现明显的ＧＶＨＤ，ＧＶＨＤ反应的减轻可 能与ＣＩＫｓ释放ＩＦＮ一 有关。用不能产生ＩＦＮ一 的 ＩＦＮ一 基因敲除的ＣＩＫｓ治疗时可引起急性致死的 ＧＶＨＤ，而用可释放ＩＦＮ一 的ＩＦＮ一 的ＣＩＫｓ时则 不易引起ＧＶＨＤ¨ 。ＩＦＮ． 还可诱导原发性慢性淋 巴细胞白血病细胞表达ＣＤ５４（ＩＣＡＭ一】），同时使 ＣＩＫｓ增加，而ＣＩＫｓ又可分泌ＩＦＮ一＾ｙ，ＣＤ５４与ＣＤ１８ （ＬＦＡ一１）结合，介导ＣＩＫｓ与慢性淋巴细胞白血病细 胞接触，促使慢性淋巴细胞白血病细胞凋亡 。 ＣＩＫｓ还可通过ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ的结合，逆转肿瘤细胞 对Ｆａｓ介导的凋亡途径的抗性而介导其凋亡 。 免疫细胞如ＮＫ、ＬＡＫ、ＣＴＬ和ＤＣ治疗肿瘤，各 有其局限性：ＮＫ和ＬＡＫ细胞抗肿瘤活性较低 ； ＣＴＬ杀伤作用有ＭＨＣ性，含肿瘤相关性抗原和 肿瘤特异性抗原的ＣＴＬ体外不易扩增＿２ ；异体Ｄｃ 细胞不易激活效应Ｔ细胞，等等。相比较而言，ＣＩＫｓ 有以下几个优势：容易从肿瘤患者的ＰＢＭＣ诱导产 生较多数量的ＣＩＫｓ；ＣＩＫｓ较ＮＫ／ＬＡＫ细胞具有更 强的抗肿瘤活性；ＣＩＫｓ杀伤作用无ＭＨＣ性； ＣＩＫｓ是终末效应细胞，能够直接杀伤肿瘤细胞； ＣＩＫｓ不易诱导ＧＶＨＤ 。尽管ＣＩＫｓ具有上述优 势，但ＣＩＫｓ仍不能完全使肿瘤消退，需要与其他方 法联合使用，包括融瘤病毒 、树突状细胞共培 养 、用基因工程的方法对ＣＩＫｓ进一步修饰 竺 ２６］ 寸 Ｏ 总之，本研究显示改良培养法有效制备ＣＩＫｓ， ＣＩＫｓ可在体内和体外有效地杀死宫颈癌细胞模型 （整合ＨＰＶ１６基因组的ＣａｓＫｉ细胞或整合ＨＰＶ１８ 基因组的ＨｅＬａ细胞），ＣＩＫｓ是宫颈癌细胞免疫疗法 有前途的候选细胞。 ［参考文献］ （１］ Ｖａｌｄｅｓｐｉｎｏ ＶＭ，Ｖａｌｄｅｓｐｉｎｏ ＶＥ．Ｃｅｒｖｉｃａｌ ｃａｎｃｅｒ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ：Ｓｔａｔｅ ｏｆｔｈｅ ａｒｔ［Ｊ］．Ｃｌｉｆ Ｏｐｉｎ Ｏｂｓｔｅｔ Ｇｙｎｅｃｏｌ，２００６，ｌ８（１）：３５４０． ［２］Ｐａｒｋｉｎ ＤＭ，Ｂｒａｙ Ｆ，Ｆｅｒｌａｙ Ｊ，Ｐｉｓａｎｉ Ｐ Ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｗｏｒｌｄ ｃａｎｃｅｒ ｂｕｒｄｅｎ：Ｇｌｏｂｏｃａｎ ２０００［Ｊ］．Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ，２００１，９４（２）： １５３．１５６． ［３］ 乔友林，章文华，李凌，潘秦镜，杨玲，吴令英，等．子 宫颈癌基因筛查方法的横断面比较研究［Ｊ］．中国医学科学 院学报，２００２，２４（１）：５０－５３． ［４］Ｚｕｒ Ｈａｕｓｅｎ Ｈ＿Ｐａｐｉｌｌｉｍ ａｖｉｍｓｅｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ Ｃａｌｒｌｅｅｒ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ， １９８７，５９（１０）：１６９２—１６９６． ［５］ Ｗａｌｂｏｏｍｅｒｓ ＪＭ，Ｊａｃｏｂｓ ＭＶ，Ｍｏｎａｓ ＭＭ，Ｂｏｓｃｈ ＦＸ，Ｋｕｍｍｅｒ ＪＡ，Ｓｈａｈ ＫＶ，ｅｔ ａ１．Ｈｕｍａｎ ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ ｉｓ ａ ｎｅｃｅｓｓａｒｙ ｃａｕｓｅ ｏｆ ｉｎｖａｓｉｖｅ ｃｅｒｖｉｃａｌ ｃａｎｃｅｒ ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ［Ｊ］．Ｊ Ｐａｔｈｏｌ，１９９９，１８９（１）： １２．１９． ［６］ 郎景和．迎接子宫颈癌预防的全球挑战与机遇［Ｊ］．中华妇 产科杂志，２００２，３７（３）：１２９—１３１． ［７］ 杨峥蝾，马原栋，万 骏，郑 义，王海峰，赵 洁，等． ＨＰＶＩ６，１８，５８ｍＥ６７重组腺病毒的构建及克隆表达［Ｊ］．免 疫学杂志，２００８，２４（４）：４５９４６３． ［８］Ｚｈｅｎｇ Ｙ，Ｚｈａｎｇ ＹＪ，Ｍａ ＹＤ，Ｗａｎ Ｊ，Ｓｂｉ ＣＦ，Ｈｕａｎｇ ＥＱ．Ｅｎ— ｂａｎｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ｉｎｕｎｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｅｆｌｈｅｔｓ ｏｆ ＨＰＶＩ６Ｅ７ ｏｎ ｃｅｒｖｉｃａｌ ｃａｎｃｅｒ ｂｙ ｆｕｓｉｏｎ ｗｉｔｈ ＣＴＬＡ４ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｒｅｇｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００８，４６（６）：７２８－７３６． ［９］Ｐｓｙ Ａ，ＤｉＭａｉｏ Ｄ．Ｈｕｍａｎ ｐａｐｉｌｌｏｎｍｖｉｍｓ ｉｎ ｃｅｒｖｉｃａｌ ａｎｄ ｈｅａｄ－ ａｎｄ—ｎｅｃｋ ｃｍｍｅｒ［Ｊ］．Ｎａｔ Ｃｌｉｎ Ｐｒａｃｔ Ｏｎｃｏｌ，２００８，５（１）：２４－３１． ［１０］Ｂａｋｅｒ Ｊ，Ｖｅｒｎｅｒｉｓ ＭＲ，Ｉｔｏ Ｍ，Ｓｈｉｚｕｒｕ ＪＡ，Ｎｅ ｎ ＲＳ．Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ｏｆ ｅｙｔｏｌｙｔｉｅ ＣＯ８（＋）ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ Ｔ ｃｅｉｌｓ ｗｉｔｈ ｌｉｍｉｔｅｄ ｃａｐａｃｉｔｙ ｆｏｒ ｇｒａｆｔ—ｖｅｒｓｕｓ—ｈｏｓｔ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｄｕｅ ｔｏ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｇａｍｍａ ｐｒｏｄｕｃ— ｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｂｌｏｏｄ，２００１，９７（１０）：２９２３－２９３１． ［１ １］Ｌｕ ＰＨ，Ｎｅｇｒｉｎ ＲＳ．Ａ ｎｏｖｅｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｘｐａｎｄｅｄ ｈｕｍａｎ ＣＤ３ ＣＤ５６ ｃｅｌｌｓ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ｐｏｔｅｎｔ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ａｃ— ｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｍｉｃｅ ｗｉｔｈ ｓｅｖｅｒｅ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｉｍｍｕｎ０ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ［Ｊ］．Ｊ Ｉｍ— ｍｕｎｏｌ，１９９４，１５３（４）：１６８７－１６９６． ［１２］Ｌｅｅｍｈｕｉｓ Ｔ，Ｗｅｌｌｓ Ｓ，Ｓｃｈｅｆｆｏｌｄ Ｃ，Ｅｄｉｎｇｅｒ Ｍ，Ｎｅｇｒｉｎ ＲＳ．Ａ ・３３２・ 中国肿瘤生物治疗杂志，２０１０年６月，１７（３） ｐｈａｓｅ Ｉ ｔｒｉａｌ ｏｆ ａｕｔｏｆｏｇｏｕｓ ｅｙｔｏｋｉｎｅ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔ— ｋｉｎｅ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ［Ｊ］．Ｊ ｍｅｎｔ ｏｆ ｒｅｌａｐｓｅｄ Ｈｏｄｇｋｉｎ ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ ｎｏｎ—Ｈｏｄｇｋｉｎ ｌｙｍｐｈｏｍａ Ｅｘｐ Ｍｅｄ，１９９１，１７４（１）：１３９－１４９． ［Ｊ］．Ｂｉｏｌ Ｂｌｏｏｄ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２００５，１ｌ（３）：１８１－１８７． ［２１］Ｇｒａｂｅｒｔ ＲＣ，Ｃｏｕｓｅｎｓ ＬＰ，Ｓｍｉｔｈ ＪＡ，Ｏｌｓｏｎ Ｓ，Ｇａｌｌ Ｊ，ＹｏｕｎｇＷＢ， ［１３］Ｖｅｒｎｅｆｉｓ ＭＲ，Ｋａｒａｍｉ Ｍ，Ｂａｋｅｒ Ｊ，Ｊａｙａｓｗａｌ Ａ，Ｎｅ ｇｒｉｎ ＲＳ．Ｒｏｌｅ ｅｔ ａ１．Ｈｕｍａｎ Ｔ ｃｅｌｌｓ ａｒｍｅｄ ｗｉｔｈ Ｈｅｒ２／ｎｅｕ ｂｉｓｐｅｃｉｉｆｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｏｆ ＮＫＧ２Ｄ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｔｈｅ ｃｙｔｏｔｏｘｉｅｉｔｙ ｏｆ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ａｎｄ ｅｘｐａｎｄｅｄ ｄｉｖｉｄｅ，ａｒｅ ｅｙｔｏｔｏｘｉｅ，ａｎｄ ｓｅｃｒｅｔｅ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｗｉｔｈ ｒｅｐｅａｔｅｄ ｓｔｉｍｕｌａ－ ＣＤ８ Ｔ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｂｌｏｏｄ，２００４，１０３（８）：３０６５－３０７２ ｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２００６，１２（２）：５６９－５７６． ［１４］黄文荣，张伯龙．细胞因子诱导的杀伤（ＣＩＫ）细胞的研究现状 ［２２］Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ Ｒ，Ｂａｋｅｒ Ｊ，Ｂｅｉｌｈａｃｋ Ａ，Ｚｅｉｓｅｒ Ｒ，Ｏｌｓｏｎ ＪＡ，Ｓｅｇａ ＥＩ， ［Ｊ］．肿瘤防治研究，２０００，２７（２）：１５７—１５９． ｅｔ ａ１．／ｎ ｖｉｖｏ ｔｒａｆｉｆｃｋｉｎｇ ａｎｄ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｋｉｌｌｅｒ ［１５］Ｓａｎｋａｒａｎａｒａｙａｎａｎ Ｒ．ＨＰＶ ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ：Ｔｈｅ ｐｒｏｍｉｓｅ＆ｐｒｏｂｌｅｍｓ ｃｅｌｌｓ ｒｅｓｕｌｔｉｎｇ ｉｎ ｎｆｉｎｉｍａｌ ＧＶＨＤ ｗｉｔｈ ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ｎａｔｉｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ［Ｊ］．Ｉｎｄｉａｎ Ｊ Ｍｅｄ Ｒｅｓ，２００９，１３０（３）：３２２－３２６． ［Ｊ］．Ｂｌｏｏｄ，２００８，１１２（６）：２５６３－２５７４． ［１６］ＫｉｍＨＭ，Ｌｉｍ Ｊ，Ｙｏｏｎ ＹＤ，Ａｈｎ ＪＭ，Ｋａｎｇ ＪＳ，Ｌｅｅ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ａｎ— ［２３］Ｓａｎｇｉｏｌｏ Ｄ，Ｍａｒｔｉｎｕｚｚｉ Ｅ，Ｔｏｄｏｒｏｖｉｅ Ｍ，Ｖｉｔａｇｇｉｏ Ｋ，Ｖａｌｌａｒｉｏ Ａ， ｔｉ・－ｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｅｇｇ ｖｉｖｏ ｅｘｐａｎｄｅｄ ｅｙｔｏｋｉｎｅ・－ｉｎｄｕｃｅｄ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌｓ ａ－－ Ｊｏｒｄａｎｅｙ Ｎ，ｅｌ ａ１．Ａｌｌｏｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｓｅｇｒｅｇａｔｅ ｇａｉｎｓｔ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．Ｉｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａ— ｗｉｔｈｉｎ ｔｗｏ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｓｕｂｓｅｔｓ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅ・ｉｎｄｕｃｅｄ ｋｉｌｌｅｒ（ＣＩＫｓ）ｃｅｌｌｓ： ｃｏｌ，２００７，７（１３）：１７９３－１８０１． Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅｉｒ ｉｎｆｕｓｉｏｎ ａｃｒｏｓｓ ｍａｊｏｒ ＨＬＡ ｂａｒｒｉｅｒｓ［Ｊ］．Ｉｎｔ ［１７］Ｈａｒｔ ＳＢ，Ｌｅｅ ＣＷ，Ｙｏｏｎ ＹＤ，Ｋａｎｇ ＪＳ，Ｌｅｅ ＫＨ，Ｙｏｏｎ ＷＫ，ｅｔ ｈｎｍｕｎｏｌ，２００８，２０（７）：８４１－８４８． １ａ．Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ｌｅｔｈａｌ ａｃｕｔｅ ｇｒ＇，ｆｔ—ｖｅｒｓｕｓ・ｈｏｓｔ ｄｉｓｅａｓｅ ｂｙ ［２４］Ｔｈｏｒｎｅ ＳＨ，Ｎｅ ｎ ＲＳ，Ｃｏｎｔａｇ ＣＨ．Ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｅ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｅｆｆｅｃｔｓ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｗｉｔｈ ｐｒｏｄｉｇｉｏｓｉｎ ａｎｄ ｃｙｃｌｏｓ— ｏｆ ｉｍｍｕｎｅ ｃｅｌｌ－ｖｉｒａｌ ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ［ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００６，３１１（５７６８）： ｐｏｒｉｎｅ Ａ［Ｊ］．Ｂｉｏｅｈｅｍ Ｐｈａｒｍａｅｏｌ，２００５，７０（１０）：１５１８－１５２６． １７８０．１７８４． ［１８］Ｋｏｍａｃｋｅｒ Ｍ，Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ Ｇ，Ｈｅｒｂｓｔ Ｍ，Ｗｅｉｌｇｕｎｉ Ｅ，Ｔｉｔａ－Ｎｗａ ［２５］李世俊，张连生，柴晔，张玉芬，张彦明，曾鹏云，等．树突 Ｆ，Ｈａｌｔｅｒ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌｓ ａｇａｉｎｓｔ ａｕｔｏｆｏｇｏｕｓ 状细胞与细胞因子诱导的杀伤细胞共培养对多药耐药肿瘤细胞 ＣＬＬ：Ｄｉｒｅｃｔ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ｅｆｆｅｃｔｓ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｔｋｍ ｏｆ ｉｎＴｎｌｕｎｅ ａｅｃｅｓｓｍｙ 系的杀伤活性［Ｊ］．中华肿瘤杂志，２００７，２９（１０）：７３３－７３７． ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｂｙ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－ｇａｍｍａ［Ｊ］．Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ，２００６，ｌ ｌ９ ［２６］Ｗａｎｇ Ｋ，ＧａｏＸ，Ｐａｎｇ Ｊ，ＬｉｕＸ，Ｃａｉ Ｙ，ＺｈａｎｇＹ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｎｄｒｉｔ— （６）：１３７７—１３８２． ｉｃ ｃｅｌｌｓ ｔｒａｎｓｄｕｃｅｄ ｗｉｔｈ ａ ＰＳＭＡ・・ｅｎｃｏｄｉｎｇ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ ａｎｄ ｃｏｃｕｌ・－ ［１９］Ｙｕ Ｊ，Ｚｈａｎｇ Ｗ，Ｊｉａｎｇ Ｈ，Ｌｉ Ｈ，Ｃａｏ Ｓ，Ｒｅｎ Ｘ．ＣＤ４ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｕｒｅｄ ｗｉｔｈ ａｕｔｏｌｏｇｏａｓ ｅｙｔｏｋｉｎｅ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｉｎｄｕｃｅ ａ ｓｐｅ－ ＣＩＫｓ（ＣＤ４ ＣＩＫｓ）ｒｅｖｅｒｓｅｄ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｆａｓ—ｍｅｄｉａｔｅｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｅｉｉｆｃ ａｎｄ ｓｔｒｏｎｇ ｉｎｌｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ａｇａｉｎｓｔ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］． ｔｈｒｏｕｇｈ ＣＩＭＯ／ＣＩＭＯＬ ｌｉｇａｔｉｏｎ ｒａｔｈｅｒ ｔｈａｎ ＩＦＮ—ｇａｍｍａ ｓｔｉｎｍｌａｔｉｏｎ Ｕｒｏｌ Ｏｎｃｏｌ，２００９，２７（１）：２６—３２． ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｔｈｅｒ Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ，２００８，２３（３）：３４２—３５４． ［２０］Ｓｃｈｍｉｄｔ—Ｗｏｌｆ ＩＧ，Ｎｅ ｎ ＲＳ，Ｋｉｅｍ ＨＰ，Ｂｌｕｍｅ ＫＧ，Ｗｅｉｓｓｎｍｎ ［收稿日期］２０１０—０２—１５ ［修回１３期］２０１０—０４—０６ ＩＬ．Ｕｓｅ ｏｆ ａ ＳＣＩＤ ｍｏｕｓｅ／ｈｕｍａｎ ｌｙｍｐｈｏｎｍ ｍｏｄｅｌ ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｃｙｔｏ－ ［本文编辑］王莹 ・科技动态・ ＵＳＰＩＯ通过去泛素化Ｐ５３Ｐ５３的定位和稳定性 Ｐ５３作为一种重要的肿瘤抑制因子，在肿瘤细胞的生长、凋亡、细胞周期和衰老等过程中发挥着重要作用。Ｐ５３表达 和定位决定其生物学功能的发挥。Ｐ５３的表达主要受翻译后，如磷酸化、甲基化和泛素化等，其中Ｅ３泛素连接酶Ｍｄｍ２ 在Ｐ５３的表达和定位中起重要作用，Ｍｄｍ２通过泛素化１９５３，导致Ｐ５３的出核，在胞质内发生蛋白酶体依赖的降解。蛋白 在去泛素化的同时还可被细胞内的去泛素化酶去泛素化。目前，关于Ｐ５３去泛素化的研究较少，到目前为止，只发现一种去 泛素化酶Ｈａｕｓｐ可在核内去泛素化稳定Ｐ５３的表达。但进入胞质内的泛素化Ｐ５３的命运如何，是否可被去泛素化，再次人核 发挥生物学效应有待证实。 梅奥医院肿瘤研究和病理研究部的科学家们发现了一种泛素特异性蛋白酶ＵＳＰ１０可直接结合并去泛素化胞质内的Ｐ５３， 稳定Ｐ５３表达，并诱导其再次人核，Ｐ５３介导的功能，逆转了Ｍｄｍ２诱导的Ｐ５３转运和降解过程。Ｐ５３是ＤＮＡ损伤的重 要反应元件。作者发现在ＤＮＡ损伤后，ＵＳＰ１０和Ｐ５３表达明显上调，但当干扰ＵＳＰ１０表达后，ＤＮＡ损伤不影响Ｐ５３的表达， 这提示在ＤＮＡ损伤情况下，ＵＳＰ１０同样可以稳定Ｐ５３的表达。ＤＮＡ损伤介导的信号主要发生在细胞核内，而ＵＳＰ１０定位在胞 质中，ＵＳＰＩＯ是怎样参与Ｐ５３７作者在实验中观察到ＤＮＡ损伤时，ＵＳＰ１０由胞质向胞核移位，并且该ＵＳＰ１０表达的上调和 核转位受ＡＴＭ介导的磷酸化。他们还发现，ＵＳＰＩＯ在肾肿瘤细胞和肿瘤组织中的表达明显低于正常肾细胞和组织，提示 ＵＳＰＩＯ可能抑制肾癌的发生；作者利用克隆形成实验证实，ＵＳＰ１０可抑制野生型Ｐ５３肾透明细胞癌的生长。因此，作者提出了 ＵＳＰＩＯ可作为一种肾肿瘤抑制因子的概念。综上所述，作者发现ＵＳＰ１０可去泛素化Ｐ５３，从而稳定Ｐ５３及其定位，其介导 的生物学活性。因此，ＵＳＰ１０是一种新的Ｐ５３因子。 （王春梅，李楠审阅．Ｙｕａｎ Ｊ，Ｌｕｏ Ｋ，Ｚｈａｎｇ ＬＺ．Ｃｈｅｖｉｌｌｅ ＪＣ．Ｌｏｕ ＺＫ，ｅｔ ａ１．Ｃｅｌｌ，２０１０，１４０（３），３８４－３９６）
