Applied Biosystems StepOneReal-Time PCR System
简易操作指南
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美国应用生物系统公司
StepOne™ Real-Time PCR System 简易操作指南
StepOne定量PCR仪简易设置指南
1启动电脑,打开定量PCR仪电源开关,双击桌面“StepOne Software”图标,出现Login登录界面,点击“OK”,打开软件。
2 起始界面如图所示,点击红色椭圆的三角图标,展开软件功能按钮。
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3 点击左侧“Set Up”功能选项中的“Advanced Setup”高级设置向导。
4 在打开的设置界面,左侧为导航树,选择不同的功能选项,右侧显现为不同的设置功能。默认条件下,显示为“Experiment Properties”实验属性。
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5 右侧界面,带有红色*号位置需要输入或者通过鼠标进行选择。不带*号位置为选填,可以保持空白。在途中位置输入实验名称,该名称根据需要进行填写。
6选择仪器类型、实验类型、荧光标记方法以及反应速度。
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7 左侧导航树,选择“Plate Setup”设置选项。右侧“Define Targets”选项下“Target Name”处设置检测基因的名称,如FluA,Reporter下拉菜单选择“FAM”,Quencher下拉菜单选择“None”。
8 点击“Add New Target”,并按照第7步所述进行设置。根据需要添加所需基因,如SWH1、SWFluA1和RNP。
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9 在“Define Samples”填写检测样本的名称,如果需要多个样本,通过“Add New Sample”添加多个样本。
10 鼠标点击“Assign Targets and Samples”切换设置界面。鼠标滑倒图中椭圆所处位置,变化为双向箭头,通过拖动鼠标,可以改变左右两侧窗口大小。
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11 鼠标选择样品放置的位置,如B4,鼠标勾选样品名称及所要检测的基因。根据样品孔的数量,依次进行设置。
12 鼠标拖动椭圆位置,向下拖动。在“Select the dye to use as the passive reference ”的下拉菜单处选择“None”。
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13 点击“Run Method”设置反应条件。在“Reaction Volume Per Well”处输入反应体积,如20ul或者25ul。点击温度或者时间,通过输入数值可以更改温度的大小及时间的长短。在“Number of Cycles”可以输入循环数。
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14根据试剂盒的说明书,改变反应条件。在软件上,Stage指温度阶段,有Holding Stage和 Cycling Stage两种类型。Holding Stage只有一个Step(温度步骤),Cycling Stage可以有几个Step(温度步骤),并且多次循环该温度参数。点击“Add Stage”可以选择添加Stage及类型。
15 在Cycling Stage可以添加Step(温度步骤),选中某个温度步骤,如黄色区域所指的60℃位置。点击“Add Step”,选择Before(之前)或者After(之后),即可添加温度步骤,根据需要更改温度或者时间。
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16 选择采集荧光的温度步骤。选择采集温度的步骤,点击“Data Collection”图标,使其处于激活状态,如72℃。同时,点击55℃下“Data Collection”图标采集图标,使其处于未激活状态。
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17 点击“Save”保存实验,再点击“START RUN”开始运行实验。
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