StepOne软件操作简易指南

Applied Biosystems StepOneReal-Time PCR System

简易操作指南

™

美国应用生物系统公司

StepOne™ Real-Time PCR System 简易操作指南

StepOne定量PCR仪简易设置指南

1启动电脑，打开定量PCR仪电源开关，双击桌面“StepOne Software”图标，出现Login登录界面，点击“OK”，打开软件。

2 起始界面如图所示，点击红色椭圆的三角图标，展开软件功能按钮。

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3 点击左侧“Set Up”功能选项中的“Advanced Setup”高级设置向导。

4 在打开的设置界面，左侧为导航树，选择不同的功能选项，右侧显现为不同的设置功能。默认条件下，显示为“Experiment Properties”实验属性。

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5 右侧界面，带有红色*号位置需要输入或者通过鼠标进行选择。不带*号位置为选填，可以保持空白。在途中位置输入实验名称，该名称根据需要进行填写。

6选择仪器类型、实验类型、荧光标记方法以及反应速度。

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7 左侧导航树，选择“Plate Setup”设置选项。右侧“Define Targets”选项下“Target Name”处设置检测基因的名称，如FluA，Reporter下拉菜单选择“FAM”，Quencher下拉菜单选择“None”。

8 点击“Add New Target”，并按照第7步所述进行设置。根据需要添加所需基因，如SWH1、SWFluA1和RNP。

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9 在“Define Samples”填写检测样本的名称，如果需要多个样本，通过“Add New Sample”添加多个样本。

10 鼠标点击“Assign Targets and Samples”切换设置界面。鼠标滑倒图中椭圆所处位置，变化为双向箭头，通过拖动鼠标，可以改变左右两侧窗口大小。

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11 鼠标选择样品放置的位置，如B4，鼠标勾选样品名称及所要检测的基因。根据样品孔的数量，依次进行设置。

12 鼠标拖动椭圆位置，向下拖动。在“Select the dye to use as the passive reference ”的下拉菜单处选择“None”。

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13 点击“Run Method”设置反应条件。在“Reaction Volume Per Well”处输入反应体积，如20ul或者25ul。点击温度或者时间，通过输入数值可以更改温度的大小及时间的长短。在“Number of Cycles”可以输入循环数。

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14根据试剂盒的说明书，改变反应条件。在软件上，Stage指温度阶段，有Holding Stage和 Cycling Stage两种类型。Holding Stage只有一个Step（温度步骤），Cycling Stage可以有几个Step（温度步骤），并且多次循环该温度参数。点击“Add Stage”可以选择添加Stage及类型。

15 在Cycling Stage可以添加Step（温度步骤），选中某个温度步骤，如黄色区域所指的60℃位置。点击“Add Step”，选择Before（之前）或者After（之后），即可添加温度步骤，根据需要更改温度或者时间。

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16 选择采集荧光的温度步骤。选择采集温度的步骤，点击“Data Collection”图标，使其处于激活状态，如72℃。同时，点击55℃下“Data Collection”图标采集图标，使其处于未激活状态。

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17 点击“Save”保存实验，再点击“START RUN”开始运行实验。