第八章 基因重组与基因工程

一、选择题 A型题

1、 由病毒携带、将宿主DNA片段从一个细胞转移至另一个细胞的现象或机制称为

A、接合 B、转化 C、转导 D、转染 E、转座 2、 依赖整合酶、在两个DNA序列的特异位点间发生的整合称为

A、位点特异性重组 B、非位点特异性重组 C、同源重组 D、随机重组 E、人工重组 3、 基因工程的特点是

A、在分子水平上操作，在分子水平上表达

B、在分子水平上操作，在细胞水平上表达 C、在细胞水平上操作，在分子水平上表达 D、在细胞水平上操作，在细胞水平上表达 E、在细胞水平上操作，在整体水平上表达

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4、 EcoR I的酶切位点为GAATTC，切割后产生的末端突出部分含

A、1个核苷酸 B、2个核苷酸 C、3个核苷酸 D、4个核苷酸 E、5个核苷酸

5、 在下列双链DNA序列中不属于完全回文结构的是

A、AGAATTCT B、TGAATTCA C、CGTTGC D、GGAATTCC E、AGATATCT 6、 “配伍末端”是指

A、 同一性核酸内切酶识别相同的DNA序列，酶切产生的相同类型粘性末端 B、 不同性核酸内切酶识别相同的DNA序列，酶切产生的相同类型钝性末端 C、 同一性核酸内切酶识别不同的DNA序列，酶切产生的不同类型粘性末端 D、 不同性核酸内切酶识别不同的DNA序列，酶切产生的不同类型钝性末端 E、 不同性核酸内切酶识别不同的DNA序列，酶切产生的相同类型粘性末端 7、 cDNA是指

A、 细胞或生物体整套遗传信息(染色体和线粒体)的所有DNA序列 B、 细胞或生物体染色体的整套遗传信息所有DNA序列 C、 细胞或生物体线粒体的整套遗传信息所有DNA序列 D、 与细胞或生物体内rRNA互补的单链或双链DNA E、 细胞或生物体整套mRNA互补的单链或双链DNA

8、 用“蓝白选择”筛选、鉴定重组体，所用的半乳糖苷酶的底物是

A、X-gal B、IPTG C、PEG D、Dextran E、Glycerol 9、 原核细胞表达系统表达产物形成包涵体的主要原因是 A、表达产物可溶 B、表达产物不溶 C、表达产物为融合蛋白 D、表达产物不能被糖基化 E、表达产物不能形成特定的空间结构

10、若真核细胞表达载体含有编码的新霉素磷酸转移酶(neor)基因，其稳定转染筛选过程所

用筛选物为 A、X-gal B、IPTG C、ampenicillin D、G418 E、Hypromycin X型题

1、 自然界的基因转移和重组方式主要有

A、接合作用 B、转化作用 C、转导作用 D、转座 E、连接 2、 可用于基因工程的载体为 A、质粒DNA B噬菌体DNA C、病毒DNA D、真核细胞染色体DNA E、酵母人工染色体

3、 在原核生物表达实验中，载体应具备 A、可选择的多克隆位点 B、3’-端的加尾信号 C、适当的启动子 D、抗生素抗性基因 E、终止信号 4、 能催化合成探针的工具酶有 A、性内切酶 B、DNA连接酶 C、DNA聚合酶I D、反转录酶 E、多聚核苷酸激酶

5、 常用于真核细胞转染的方法有 A、磷酸钙转染 B、脂质体转染 C、电穿孔 D、显微注射 E、DEAE葡聚糖介导转染

二、名词解释

1、转化和转导作用 (transformation and transduction) 2、质粒 (plasmid)

3、目的基因(target DNA)

4、基因组DNA文库和cDNA文库 (genomic DNA library and cDNA library ) 5、多克隆位点(multiple cloning sites) 6、感受态细胞 (competent cell)

7、性核酸内切酶(restriction endonuclease)

三、问答题

1、什么是基因克隆？简述基因工程的基本过程。 2、重组体筛选的主要方法及其原理。

[参及答案要点]

一、选择题 A型题 1、C 2、A 3、B 4、D 5、C 6、E 7、E 8、A 9、B 10、D X型题

1、ABCD 2、ABCE 3、ACDE 4、CDE 5、ABCDE 二、名词解释

1、 转化和转导作用：通过自动获取或人为地提供外源DNA，使细胞或培养的受体细胞获

得新的遗传表型称为转化作用。当病毒从被感染的(供体)细胞释放出来、再次感染另一(受体)细胞时，发生在供体细胞与受体细胞之间的DNA转移及基因重组即为转导作用。 2、 质粒：存在于细菌染色体外的小型环状双链DNA分子，其本身含有复制功能的遗传结

构，能在宿主细胞自主地进行复制，并在细胞时保持恒定地传给子代细胞。 作为基因工程载体的质粒应具备的结构特点：应含有复制起始点(ori)和表达功能、选择性标志基因(如抗生素抗性基因等)、多克隆位点等。

3、 目的基因：将在分子生物学研究中感兴趣的基因或DNA序列称为目的基因，又称目的 DNA。其分为cDNA和基因组DNA两大类型。可来源于化学合成、基因组DNA、cDNA

和聚合酶链反应(PCR)等。

4、 基因组DNA文库和cDNA文库：用性核酸内切酶将染色体DNA切割成基因水平 的许多片段，再将它们与适当的克隆载体拼接成重组DNA分子，继而转化入受体菌扩增，使每个细菌内都携带一种重组DNA分子的多个拷贝。这种存在于转化细菌内，由克隆载体所携带的所有基因组DNA的集合称为基因组DNA文库。以mRNA为模板，用反转录酶合成与mRNA互补的DNA，再复制成双链cDNA片段，与适当载体连接后转入受体菌扩增，这种存在于转化细菌内，由克隆载体所携带的包含某一细胞表达的各种mRNA信息，也含有感兴趣的编码cDNA的集合称为cDNA文库。

5、 多克隆位点：在构建载体中，含有多个单一性核酸内切酶酶切位点的序列称为多

克隆位点。用于构建目的基因的连接部位。 6、 感受态细胞：在基因工程中所选用的酶和重组酶缺陷型的大肠杆菌，经特殊方法(如 氯化钙等)处理后，具有接收外源DNA能力的受体菌称为感受态细胞。

7、 性核酸内切酶：性核酸内切酶是指能识别双链DNA的特异序列，并在识别位

点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。其存在于细菌体内，与相伴存在的甲基化酶共同构成细菌的—修饰体系，外源性DNA、保护自身DNA，对细菌遗传性状的稳定遗传具有重要意义, 在基因工程中作为工具酶。其在双链DNA上的切口有粘性末端和钝性末端。

三、问答题(要点)

1、基因克隆的概念：将目的基因连接于载体DNA中并导入受体细胞的过程。

基因克隆的基本过程：包括目的基因的获取、载体的选择、载体DNA和目的基因的性内切酶酶切、载体和目的基因的连接、重组DNA分子导入受体细胞、筛选并体外无性扩增含重组DNA分子的受体细胞。 2、重组体筛选的主要方法及其原理。 （1）直接筛选法

1)抗生素抗性基因筛选：利用载体携带的抗生素抗性基因地表达产物可水解培养基中的

抗生素而使宿主细胞生存。

2)标志补救筛选：如营养突变株的筛选、互补筛选等。

3)分子杂交：如Southern blotting、原位杂交(in situ hybridization)等。 （2）非直接筛选法：如免疫学方法(酶免检测分析)等。