北方药学２０１４年第１１卷第ｌ２期 比较几种炮制方法对葛根总黄酮含量的影响 钟丽云 陈筱霞（广东省中医院药学部广州Ｉ ５１０１２０） 摘要：目的：比较葛根炮制前后其总黄酮含量的差异以及各种炮制方法对葛根总黄酮含量的影响，证明中药炮制工艺对药材有效 成分的良性影响，并从实验的几种炮制方法中优选出最能使葛根总黄酮含量提高的方法，对比当今葛根被广泛应用的炮制品，尝 试用科学实验手段为传统理论找出依据。方法：通过参考文献，可发现葛根煨制的方法有多种，可以用不同的材料进行，本文采用 的煨制材料有米汤、滑石粉、麦麸三种，其中用米汤和滑石粉作为煨制材料的样品是采用传统的炮制工艺制作，而以麦麸作为煨制 材料的样品分别采用传统的炮制工艺制作和现代机器——烘箱制作的烘制法作为炮制手段，除此以外，本文还采用两种常用的中 药炮制方法炮制葛根，分别是醋制法和炒制法。生品经过六种炮制方法制作后，与之分别标记为一到七号样品。将七个样品分别进 行打粉、过筛，用乙醇作为溶剂进行提取，取得样品溶液。本文采用的是购自广东省药物检验所的芦丁对照品，并利用实验室提供 的紫外分光光度计进行含量测定。结论：实验结果表明各样品中总黄酮百分含量大小关系为醋制品＞炒制品＞米汤煨制品＞滑石粉 煨制品＞麦麸煨制品＞麦麸烘制品＞生品。 关键词：葛根炮制方法总黄酮含量测定 中图分类号：Ｒ２８３．１ １实验材料 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７２—８３５１（２０１４）１２—００１１—０２ 待达到温度后，将方盘放入，关好门，进行烘制。４０ｒａｉｎ后，取出 １．１仪器：紫外分光光度计（ＦＺｕｖ一２１００，尤尼可上海仪器有限公 放凉。司）电炒锅，ＤＦＹ一２００型打粉机，ＫＱ２２００Ｂ型超声清洗仪，ＤＨＧ一 ２．３．２成品性状：炮制后，饮片表面呈黄色，边上略带焦黄色，气 ９０７６Ａ型干燥箱，Ｓａ￣ｏｆｉｕｓ ＢＰ２１ １Ｄ型十万分之一分析天平，电 微香，有麦麸香味。 ２．４滑石粉煨制品（４号样品） 炉，电烘箱。 １．２药品：葛根（５００ｇ）购自广州市药材公司旗下的采之林连锁药 店，并经鉴定为豆科多年生落叶藤本植物野葛Ｐｕｅｒａｆｉａ ｌｏｂａｔａ （Ｗｉｌｌｄ．）Ｏｈｗｉ的根制作成的中药饮片。 １．３试剂：麦麸３０ｇ、滑石粉１５ｇ、米１５ｇ、醋１５ｇ，购自广东省药物 ２．４．１炮制方法：取１５ｇ滑石粉于电炒锅中，将电炒锅温度调节 旋钮调至中间档，将滑石粉用铲子堆至炒锅中间，稍作翻动，使 之均匀受热，然后静置受热，待用手离锅十厘米测试感到有烫热 感时，投入葛根饮片５０ｇ，使受了热的滑石粉均匀包裹好葛根饮 检验所的芦丁对照品（中国药品生物制品鉴定所），购自某试剂 片，放于炒锅中间，保持一定温度。观察滑石粉颜色稍微加深且 公司９５％乙醇溶液５００ｍｌ四瓶（均为分析纯）。 葛根饮片表面呈黄色时，取出。筛去滑石粉，放凉。 ２炮制工艺川 ２．４．２成品性状：炮制后，饮片表面呈灰黄色，略沾有少量滑石粉 ２．１生品（１号样品） ２．１．１炮制方法：直接取购买的中药葛根饮片５０ｇ。 于表面，气微香。 ２．５米汤煨制品（５号样品） ２．１．２成品性状：饮片为不规则厚片，富粉性，表面类白色，质较 ２．５．１炮制方法：将大米１５ｇ，加水至大米之上２ｃｍ处左右，置于 硬，无臭。 压力锅中。用电炉加热至压力锅有气流喷出，１０ｒａｉｎ后，关闭电 ２．２麦麸煨制品（２号样品） 炉。静置放凉之后，隔去米渣，剩下米汤。取葛根饮片５０ｇ，放入 ２．２．１炮制方法：取１５ｇ麦麸置于电炒锅中，将电炒锅温度调节 米汤中拌浸，直至吸润为度。将电炒锅温度调节旋钮调至中间 旋钮调至中间档，将麦麸堆于炒锅中间，稍作翻动，让其受热均 档，放人剩余米汤和已经闷润好的葛根饮片，适当拌抄至米汤吸 匀，然后静置受热，待用手离锅十厘米感到有烫热感时，投入葛 干，饮片变硬，颜色加深至黄褐色为度。取出，放凉。 根饮片５０ｇ，用麦麸将全部葛根饮片覆盖好且不让饮片直接接 ２．５．２成品性状：炮制后，饮片表面呈黄褐色，气微香，具有米汤 触炒锅，并保持一定温度。观察麦麸颜色稍微加深而葛根饮片 香味。成焦黄色时，取出。筛去麦麸，放凉。 ２．６醋制品（６号样品） ２．２．２成品性状：炮制后，饮片表面呈焦黄色，气微香，略带麦麸 ２．６．１炮制方法：量取米酷１５ｇ，倒人已放有５０ｇ葛根饮片的饭 香味。 盒，拌匀，盖好盖，闷润。待米醋吸干后，将电炒锅温度调节旋钮 ２．３麦麸烘制品（３号样品） 凋至中间档，放人电炒锅，适当拌炒。当米醋吸干，饮片变硬，颜 ２．３．１炮制方法：取１５ｇ麦麸于方盘中，均匀铺好，将５０ｇ葛根饮 色加深至褐色时，取出，放凉。 片放入，使之上下各覆盖一层麦麸。将烘箱温度调节为１６５℃， ２．６．２成品性状：炮制后，饮片表面呈褐色，散发醋香味。 当然，在盐酸氨溴索的生产过程中，要加强防腐剂和香精的 『３】范国荣．盐酸氨溴索口服溶液的相对生物利用度研究ｆＪ１．中国 专项检测，加强包材相容性研究并升级，尽量避免其成分迁移， 现代应用药学杂志，２００１，１８（２）：１０５—１０８． 质量标准中，考虑到糖尿病等慢性疾病患者人数逐渐增多，含糖 『４Ｉ孙亚欣，肇丽梅，邱枫，等．ＲＰ—ＨＰＬｃ法测定人血浆中盐酸氨 与无糖型产品的ｐＨ值和密度标准规定范围值得探讨，力争保 溴索的浓度ｌＪ］．实用药物与临床，２００９，１２（３）：１９９—２００． ５］黄淑霞，刘金玲，查文清，等．高效液相色谱法测定盐酸氨溴索 证安全性，而这一切均要求我们提高药物生产处方和工艺水平。 ［参考文献 注射液的含量『Ｊ】．中国医院药学杂志，２００５，２５（１１）：１０９４—１０９５． ［１］王曦，何海霞．２种盐酸氨溴索制剂的人体生物等效性研究［Ｊ】． ［６】国家药典委员会－中华人民共和国药典『Ｓ１．二部，２０１０年版，北 京：中国医药科技出版社，２０１０：７６６． 中国药房，２０１１，２２（６）：５１６． 【２１－￣斌，李仲苇，．钟明康，等．盐酸氨溴索注射剂质量考察［Ｊ］．药物 【７】陈文利，赵军军，潘思敬，等．盐酸氨溴索含量的ＨＰＬＣ法测定 分析杂志，２００６，２６（１０）：１４４８． 方法研究ｆＪ１．应用化工，２００６，３５（１１）：８９３—８９６． １２ 北方药学２０１４年第１１卷第１２期 ２．７炒制品（７号样品） ２．７．１炮制方法：将电炒锅温度调节旋钮调至中间档，投入葛根 饮片５０ｇ，拌炒至呈黄色，略带焦斑，取出，放凉。 ２．７．２成品性状：炮制后，饮片表面呈黄色，略带焦斑，气焦香。 ３样品液的制备 ３．１打粉：取１～７号样品，分别放入打粉机。 具体步骤：拧开旋钮，打开打粉机上盖，用镊子夹取酒精棉 擦拭内壁，确保清洗干净，不含明显杂质。将样品投入打粉机， 尽量排放均匀，拧紧旋钮，确保打粉机处于密封状态。接好电源， 打开开关。待机内声音变得均匀统一的时候，关闭开关，断开电 ７．３各炮制品的总黄酮含量方差分析：比较各种炮制方法，对七 源，静置一段时间让粉末完全沉淀。打开上盖，用刷子将黏在打 组样品总黄酮含量的数据进行方差分析，七组数据三个样本均 粉机上面的粉末清扫出来，用保鲜袋装好放到密封的干燥器中。 数的两两比较，结果显示，各个样本间均有 （Ｐ＜０．０１），说明比 重复操作，将七个样品打成粉末。 较结果各数据间有显著差异，具有统计学意义。 ３．２过筛：取４０目筛，将干燥好的１～７号粉末，分别倒人筛中， ８精密度试验 轻轻摇晃，筛去纤维，取得较细粉末。 精密吸取已配好的芦丁对照品乙醇溶液０．３ｍｌ于ｌＯｍｌ量 ３．３制备样品液嘲：精密称取已过筛的１—７号粉末１．００ｇ，移人 瓶中，加蒸馏水定容至刻度，取少量分成５份，编号分别为ａ、ｂ、 ｌＯ０ｍｌ具塞三角锥形瓶。并分别向已装有样品的七个１００ｍｌ具塞 ｃ…ｄ ｅ精密吸取１．０ｍ１９５％乙醇１．０ｍｌ，置于１０ｍｌ量瓶中，再加 三角锥形瓶加入９５％乙醇２０ｍｌ，将瓶盖用纸包好，塞紧。用超声 蒸馏水至刻度线定容，作为空白对照。在２６０ｎｍ处测定吸光度， 波提取有效成分１ｈ。提取后静置１５ｍｉｎ，用胶头滴管吸取上层清 根据公式可求得，ＲＳＤ％＝０．５２，采用本方法，精密度良好。 液，移入１００ｍｌ量瓶，再加９５％乙醇至刻度定容，即得样品液。 ９稳定性考察 ４对照品溶液的制备 取少量３号样品，分成Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ五份。每隔２ｈ在 ４．１对照品的购买：对照品购于广东省药物检验所，为中国药品 ２６０ｎｍ处测定吸光度，根据公式可求得，ＲＳＤ％＝０．４７，表示本实 生物制品检定所检定的芦丁对照品，规格为１００ｍｇ，其外包装写 验所取样品稳定性良好。 明使用前无需干燥，可直接使用。 １０重现性实验 ４．２制备对照品溶液＿３】：利用十万分之一分析天平（Ｓａｎｏｆｉｕｓ 精密称取ｌ号样品１．０００ｇ，平衡操作５次，分别记为Ｆ、Ｇ、 ＢＰ２１ １Ｄ型）精密称取购得的芦丁对照品２５ｒａｇ置５０ｍｌ量瓶中， Ｈ、Ｉ、Ｊ，在２６０ｎｍ处测定吸光度，所得实际数据根据公式可求 加９５％乙醇适量至溶解，放冷。用乙醇稀释至刻度定容，摇匀。 得，ＲＳＤ％＝Ｏ．２１，表明实验具有良好的重现 。 精密量取２０ｍｌ，置５０ｍｌ量瓶中。用９５％乙醇稀释到刻度定容， １１结果与讨论 即得。对照品溶液浓度为０．２ｍｇ／ｍｌ。 通过测得的吸光度求得各对照品总黄酮的百分含量，生品、 ５测定波长选择 麦麸煨制品、麦麸烘制品、滑石粉煨制品、米汤煨制品、醋制品及 利用紫外分光光度计进行最大吸收波长测试，选择该实验 炒制品的三个数据总黄酮含量平均值分别为：１５．１ｌ％、２９．８０％、 测定波长为２６０ｎｍ。 ２８．１１％、３０．１９％、３０．３２％、３８．２９％、３５．７２％。由于吸光度和总黄酮 ６标准曲线绘制 的百分含量成正比，所以可以看出，各组总黄酮的百分含量大小 ６．１标准溶液的配制 ：分别精密吸取已配好的芦丁对照品乙醇 关系为：６号样品＞７号样品＞５号样品＞４号样品＞２号样品＞３号 溶液０．２、０．４、０．６、０．８、１．０ｍｌ，于ｌＯｍｌ量瓶中，加９５％乙醇至 样品＞１号样品。此次实验结果看出，各样品总黄酮百分含量大 １．０ｍｌ，再加蒸馏水至刻度线定容。 小关系为：醋制品＞炒制品＞米汤煨制品＞滑石粉煨制品＞麦麸煨 ６．２空白溶液的配制：精密吸取１．０ｍ１９５％乙醇１．０ｍｌ，置于１０ｍｌ 制品＞麦麸烘制品＞生品。实验结果表明，生品中总黄酮的百分 量瓶中，再加蒸馏水至刻度线定容，作为空白对照。 含量远低于其他炮制品。总黄酮作为葛根治疗疾病的有效成分， ６．３绘制标准曲线：在２６０ｎｍ处用紫外分光光度计测定吸光度， 采用各种炮制方法处理后，其含量远比葛根生品多。可以说明 可计算得回归方程为ｙ＝０ ８３６５ｘ一０．０５６３在０．６２～０．７８ｍ￣ｍｌ的 传统中药炮制方法的确可以增加药材葛根有效成分，对药材葛 范围内，线性最好，Ｒ２＝１。 根起效应用有良性影响。 ７实验结果数据 参考文献 ７．１测得的吸光度数据：在２６Ｏｎｔｏ处用紫外分光光度计测定七 【１】龚千锋．中药炮制学【Ｍ】．第２版，中国中医药出版社，２００７： 种样品的吸光度，每个样品平行做三份，数据如下表所示。 ３４０－３４２． 【２］黄泰康．中成药学【Ｍ］．中国医药科技出版社，１９９６：８０５—８２５． ［３１王言才，段金廒，华永庆，宿树兰．不同品种葛根中葛根素及总 黄酮含量的测定『Ｊ］．时珍国医国药，２００８（０１）． ［４］于少君，王粤敏，李绍华，等．葛根前后化学成分的对比Ⅲ．中国 中药杂志，１９９２，１７（９）：５３４． ｆ５１刘文山，杨梓懿．不同炮制方法对葛根中总异黄酮含量的影响 ｆＪ】．中国现代药物应用，２００８，１，２（１）：４０． 【６】张蕾，朱蓉贞，潘扬，马国祥．不同品种及产地的葛根中葛根素 含量的比较『Ｊ１＿中国中药杂志，１９９５（０７）． ７．２百分含量计算：根据测得的吸光度，根据标准曲线方程，可求 【７降云鹏，黄芸，魏春娥，等．紫外分光光度法测定黄芩中总黄酮 得总黄酮的百分含量，如下表所示。 含量ＩＪ１．河北中医药学报，２００７，２２（１）：３６．
