女贞子醇提物对雄激素性脱发模型小鼠毛发生长的影响

广东药科大学学报　

女贞子醇提物对雄激素性脱发模型小鼠毛发生长的影响

刘小赟１，吴小诗１，潘敬灵１，梁玉婷１，唐春萍１，沈志滨１，２，３

（１．广东药科大学中药学院，广东广州５１０００６；２．广东省局部精准药物递药制剂工程技术研究中心，广东广州５１０００６；３．广东省化妆品工程技术研究中心，广东广州５１０００６）

摘要：目的探讨女贞子醇提物对丙酸睾酮诱导产生的雄激素性脱发模型小鼠毛发生长的影响。方法采用丙酸睾酮诱导产生雄激素性脱发Ｃ５７ＢＬ／６小鼠模型，考察女贞子醇提物对毛发生长、皮肤和血清中激素水平等的影响；利用体外微量酶反应体系研究女贞子醇提物对Ⅱ型５α⁃还原酶的抑制作用。结果与模型组相比，女贞子醇提物各剂量组小鼠毛发质量、毛囊数量显著增加（Ｐ＜０．０５），皮肤组织中雄激素含量显著降低（Ｐ＜０．０５）。女贞子醇提物生药浓度为１ｍｇ／ｍＬ时，对Ⅱ型５α⁃还原酶的抑制率可达Ⅱ型５α⁃还原酶活性、降低皮肤组织中二氢睾酮含量是女贞子醇提物促毛发生长的主要机制之一。关键词：女贞子；促毛发生长；雄激素性脱发模型；Ⅱ型５α⁃还原酶ＤＯＩ：１０．１６８０９／ｊ．ｃｎｋｉ．２０９６－３６５３．２０２００２０９０１

中图分类号：Ｒ２８５．５　文献标志码：Ａ　文章编号：２０９６⁃３６５３（２０２０）０２⁃０２３６⁃０６

（８１．４９±４．０３）％。结论女贞子醇提物对雄激素性脱发模型小鼠毛发生长具有一定促进作用。通过抑制

ＥｆｆｅｃｔｏｆｅｔｈａｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｏｆＬｉｇｕｓｔｒｉＬｕｃｉｄｉＦｒｕｃｔｕｓｏｎｔｈｅｈａｉｒｇｒｏｗｔｈｏｆｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ⁃ｉｎｄｕｃｅｄａｌｏｐｅｃｉａｍｉｃｅ

ＬＩＵＸｉａｏｙｕｎ１，ＷＵＸｉａｏｓｈｉ１，ＰＡＮＪｉｎｇｌｉｎｇ１，ＬｉａｎｇＹｕｔｉｎｇ１，ＴＡＮＧＣｈｕｎｐｉｎｇ１，ＳＨＥＮＺｈｉｂｉｎ１，２，３

∗

（１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＧｕａｎｇｄｏｎｇＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０００６，Ｃｈｉｎａ；２．ＧｕａｎｇｄｏｎｇＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＣｅｎｔｅｒｏｆＴｏｐｉｃａｌＰｒｅｃｉｓｅＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙＳｙｓｔｅｍ，ＧｕａｎｇｄｏｎｇＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０００６，Ｃｈｉｎａ；３．ＧｕａｎｇｄｏｎｇＣｏｓｍｅｔｉｃｓＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ＆ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒ，ＧｕａｎｇｄｏｎｇＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０００６，Ｃｈｉｎａ）

∗

ＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒＥｍａｉｌ：ｓｚｂ８１１３＠１２６．ｃｏｍ

Ａｂｓｔｒａｃｔ ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｅｔｈａｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｏｆＬｉｇｕｓｔｒｉＬｕｃｉｄｉＦｒｕｃｔｕｓｏｎｔｈｅｈａｉｒｇｒｏｗｔｈｏｆｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ⁃ｉｎｄｕｃｅｄａｌｏｐｅｃｉａｍｉｃｅ．ＭｅｔｈｏｄｓＴｈｅＣ５７ＢＬ／６ｍｉｃｅｍｏｄｅｌｏｆａｎｄｒｏｇｅｎａｌｏｐｅｃｉａｉｎｄｕｃｅｄｂｙｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅｗａｓｕｓｅｄｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｅｔｈａｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｏｆＬｉｇｕｓｔｒｉＬｕｃｉｄｉＦｒｕｃｔｕｓｏｎｈａｉｒｇｒｏｗｔｈａｎｄｈｏｒｍｏｎｅｌｅｖｅｌｓｉｎｓｋｉｎａｎｄｓｅｒｕｍ．ＴｈｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｏｆＬｉｇｕｓｔｒｉＬｕｃｉｄｉＦｒｕｃｔｕｓａｌｃｏｈｏｌｅｘｔｒａｃｔｏｎｔｙｐｅＩＩ５α⁃ｒｅｄｕｃｔａｓｅｗａｓｍｅａｓｕｒｅｄｂｙｍｉｃｒｏｅｎｚｙｍｅｒｅａｃｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ．ＲｅｓｕｌｔｓＴｈｅｒｅｗａｓａｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎａｌｏｐｅｃｉａｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐａｎｄＬｉｇｕｓｔｒｉＬｕｃｉｄｉＦｒｕｃｔｕｓｇｒｏｕｐｉｎｔｅｒｍｓｏｆｈａｉｒｈｅｉｇｈｔ ｔｈｅＦｒｕｃｔｕｓａｌｃｏｈｏｌｅｘｔｒａｃｔｗａｓ１ｍｇ／ｍＬ ｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｒａｔｅｏｆｔｙｐｅＩＩ５α⁃ｒｅｄｕｃｔａｓｅｗａｓ ８１．４９±４．０３ ％．ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｄｉｈｙｄｒｏｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅｉｎｓｋｉｎｔｉｓｓｕｅ．

ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＴｈｅａｌｃｏｈｏｌｅｘｔｒａｃｔｏｆＬｉｇｕｓｔｒｉＬｕｃｉｄｉＦｒｕｃｔｕｓｃａｎｐｒｏｍｏｔｅｔｈｅｈａｉｒｇｒｏｗｔｈｏｆａｎｄｒｏｇｅｎｉｃｎｕｍｂｅｒｏｆｈａｉｒｆｏｌｌｉｃｌｅｓａｎｄａｎｄｒｏｇｅｎｌｅｖｅｌｉｎｓｋｉｎ Ｐ＜０．０５ ．ＷｈｅｎｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＬｉｇｕｓｔｒｉＬｕｃｉｄｉａｌｏｐｅｃｉａｍｏｄｅｌｍｉｃｅ ｗｈｉｃｈｉｓｒｅｌａｔｅｄｔｏｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｔｙｐｅＩＩ５α⁃ｒｅｄｕｃｔａｓｅａｎｄｒｅｄｕｃｔｉｏｎｏｆＫｅｙｗｏｒｄｓ ＬｉｇｕｓｔｒｉＬｕｃｉｄｉＦｒｕｃｔｕｓ ｈａｉｒｇｒｏｗｔｈ ａｌｏｐｅｃｉａｍｉｃｅ ｔｙｐｅＩＩ５α⁃ｒｅｄｕｃｔａｓｅ收稿日期：２０２０⁃０２⁃０９

基金项目：广东省科技厅应用型研发专项（２０１５Ｂ０２０２３４００９）；国家重点研发计划“中医药现代化”重点专项项目作者简介：刘小赟（１９９３—），女，２０１７级在读硕士研究生，从事中药药效物质基础及作用机制研究，Ｅｍａｉｌ：７３４９５６４６０＠ｑｑ．ｃｏｍ通信作者：沈志滨（１９６４—），女，教授，博士，主要从事中药药效物质基础及新药研发，Ｅｍａｉｌ：ｓｚｂ８１１３＠１２６．ｃｏｍ。

（２０１８ＹＦＣ１７０７１００）

第２期　刘小赟，等．女贞子醇提物对雄激素性脱发模型小鼠毛发生长的影响２３７

　　雄激素性脱发（ａｎｄｒｏｇｅｎｅｔｉｃａｌｏｐｅｃｉａ，ＡＧＡ），又称为脂溢性脱发，是一种最常见的脱发类型［１］。近年来，随着生活节奏加快与压力的增加，ＡＧＡ的患病率也逐渐升高，且向年轻化发展。非那雄胺（ｆｉｎａｓｔｅｒｉｄｅ）和米诺地尔（ｍｉｎｏｘｉｄｉｌ）是现代临床常用于治疗ＡＧＡ的药物，具有较显著的治疗效果，但与此同时具有较多的不良反应和副作用［２⁃３］。

女贞子是木犀科女贞属植物（Ｌｉｇｕｓｔｒｕｍｌｕｃｉｄｕｍ

上海阿拉丁生化科技股份有限公司，批号Ｇ１８２００４２）；非那雄胺（＞９８％，上海麦克林生化科技Ｃ１０５２６８０２）；二硫苏糖醇（ＤＴＴ，＞９８％，上海麦克林生化科技有限公司，批号Ｃ１０１８２３１７）；苯甲基磺酰氟（ＰＭＳＦ，＞９８％，上海麦克林生化科技有限公司公司，批号Ｃ１００９０９１１）；甲醇为色谱纯；其余试剂均为分析纯，水为去离子水。

＞９８％，上海麦克林生化科技有限公司，批号有限公司，批号Ｊ１８１０１１３）；还原性辅酶ＩＩ（ＮＡＤＰＨ，

Ａｉｔ．）女贞果实，性凉、味干、微苦，归肝、肾经，具有明目乌发、滋补肝肾功效，常用于治疗肝肾阴虚、眩晕耳鸣、腰膝酸软、须发早白等病证［４］外学者对女贞子的研究主要集中在抗骨质疏松。目前国内、抗癌、抗衰老、免疫调节等作用［５⁃６］雄激素所致脱发的促毛发生长作用研究还未见报，但女贞子醇提物对

道。本文通过女贞子醇提物对模型小鼠毛发生长的影响评价其促毛发生长作用，并初步探讨其作用机制，为女贞子在预防和治疗脱发药物的进一步研究提供有价值的理论参考依据。

１　材料

１．１　２０ＡＥｐｏｃｈ主要仪器

型酶标仪（美国伯腾仪器有限公司）；ＬＣ⁃

紫外分光光度计高效液相色谱仪（日本岛津公司）；ＵＶ２３０１⁃ＩＩ

ＢＡ３１０⁃Ｔ司）；ＪＪ⁃１２Ｊ型生物显微（上海天美科学仪器有限公司型脱水机（（武汉俊杰电子有限公司麦克奥迪实业集团有）；）；ＪＢ⁃限公Ｐ５病理切片机型包埋机（（上海徕卡仪器有限公司武汉俊杰电子有限公司）；ＪＢ⁃Ｌ５）；ＲＭ２０１６型冻型台（（武汉俊杰电子有限公司）；ＫＤ⁃Ｐ型组织摊片机型烤箱浙江省金华市科迪仪器设备有限公司（天津市莱玻瑞仪器设备有限公司）；ＧＦＬ⁃２３０）；ＫＨ⁃ＩⅡ型全自动研磨仪ＴＧＬ⁃１６发有限公司型高速低温离心机（武汉塞维尔生物科技有限公司）。

（湖南湘仪实验室仪器开）；１．２　女贞子主要药品与试剂（果）购买于广州同仁堂药业；二氢睾酮

ＥＬＩＳＡＬ１９０８０９５１４）；试剂盒（武汉优尔生科技股份有限公司，批号技股份有限公司雌二醇，批号ＥＬＩＳＡＬ１９０９２３２２８）；试剂盒（武汉优尔生科睾酮ＥＬＩＳＡ试剂盒Ｌ１９１０１４８８９）；（武汉优丙酸睾酮尔生科技股份有限公司，批号有限公司，批号Ｃ１０２３２９９２）；５％（９８％，上海麦克林生化科技米诺地尔酊（厦门美商医药有限公司，批号１９０７１５）；睾酮（Ｔ，＞９８％，

１．３　质量Ｃ５７ＢＬ实验动物１８～２５／６ｇ，小鼠由广东省动物中心提供６０只，雄性，６周龄，，ＳＰＦ生产许可证级，体号：ＳＣＸＫ（粤）２０１８⁃０００２。ＳＤ大鼠，３只，雄性，９周龄，ＳＰＦ级，体质量２６０～２８０ｇ，由广东省动物中心提供，生产许可证号：ＳＣＸＫ（粤）２０１８⁃０００２。

２　方法

２．１　女贞子醇提物的制备供试样品的制备

：称取女贞子干燥粉末２０ｇ，

１０、１采用９５％（φ）乙醇回流提取２次，料液比分别为１∶

减压浓缩后∶８；提取时间分别为，冷冻干燥制成冻干粉２ｈ、１．５ｈ；，得到女贞子醇提合并２次滤液，物２．０５４ｇ（提取率１０．２７％），４℃冷藏备用；本文中女贞子醇提物均为９５％乙醇提取物。

准确称取适量女贞子醇提物，采用７５％（φ）乙醇溶解，配置浓度为５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ的女贞子醇提物溶液，作为促毛发生长作用实验中女贞子低、中、高剂量组样品溶液。

准确称取适量女贞子醇提物，采用７５％的乙醇溶解，配置浓度为０．５ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ的女贞子醇提物溶液，作为Ⅱ型５α⁃还原酶抑制活性待测样品溶液。

２．２　模型毛发生长的影响

女贞子醇提物对雄激素性脱发Ｃ５７ＢＬ／６小鼠２．２．１　床常用于治疗动物分组及给药方式ＡＧＡ的外用药，　本实验采用其作为外米诺地尔是目前临用促毛发生长作用实验的阳性对照６。雄性Ｃ５７ＢＬ／用小鼠Ｅｘｃｅｌ６０软件根据体质量随机分为只，适应性饲养１周后，按体质量编号并６组，使用脱毛膏在其背部脱除约３×４ｃｍ２损，确认小鼠毛囊处于休止期，皮肤呈粉红色且无破。参考文献［７］进行动物造模，除空白组外，各组小鼠背部脱毛区皮肤皮下多点注射丙酸睾酮溶液５ｍｇ／（ｋｇ·ｄ），丙酸睾酮处

２３８广东药科大学学报　第３６卷　

理３０ｍｉｎ后，各组小鼠背部脱毛区域涂抹２００μＬ的药物溶液，每天１次，连续３５ｄ。空白组与模型组给予７５％乙醇溶液，米诺地尔组给予５％米诺地尔溶液，女贞子低、中、高剂量组给予女贞子醇提物溶液，４ｍｇ／（只·ｄ）。

小鼠给药剂量分别为１ｍｇ／（只·ｄ）、２ｍｇ／（只·ｄ）、

液，ｐＨ５．５，１ｍｍｏｌ／ＬＤＴＴ，１ｍｍｏｌ／ＬＰＭＳＦ）在玻璃匀浆器中制成１∶５匀浆液（ｇ／ｍＬ），离心后合并上清液得Ⅱ型５α⁃还原酶。以睾酮为底物，加入Ⅱ型５α⁃还原酶粗酶和还原型辅酶Ⅱ（ＮＡＤＰＨ）组成酶反应体系，体系组成见表１，３７℃孵育１ｈ后加入２．５ｍＬ二氯甲烷后终止反应，混匀，离心１５ｍｉｎ（５０００ｒ／ｍｉｎ），取有机层旋干后，加入甲醇溶解定容至１ｍＬ，用０．２２μｍ滤膜过滤，采用高效液相色谱法检测睾酮消耗量。试验重复３次，每次３个平行样品。

２．２．２　毛发生长状况观察　每天观察各组小鼠脱毛部位皮肤及毛发生长状况，并记录每只小鼠脱毛区皮肤颜色由粉红变成黑色的时间及开始长毛发的０、７、１４、２１、２８、３５时间，评价药物对小鼠毛发生长周期的影响情况评分结果。评分标准ｄ时对每组拍照并记录毛发生长。给药：０分：未生长，脱毛区皮肤呈粉色；１分：脱毛区皮肤呈灰色（小于２０％的增４０％）；３长）；２分：脱毛区皮肤呈黑色（大于２０％小于

（黑色并有部分毛发生长大于４０％分：小于脱毛区皮肤呈黑色并有少许毛发生长６０％的生长（６０％）；４～８０％分：的生长脱毛区皮肤呈）；５分：脱毛区毛发基本完全生长２．２．３　电动刮毛刀刮取每只小鼠背部脱毛区毛发质量的测定　（８０％取血后小鼠脱颈处死～１００％的生长）［８］３×４ｃｍ２面积

，用。２．２．４　的毛，用分析天平称重组织学观察，求其平均值。

脊椎处取材（度酒精脱水φ）多聚甲醛中固定，将皮肤修剪成　刮取毛后１ｃｍ，在脱毛部位平行于宽的长条状，置４％，石蜡包埋２４，修块～３６，ｈ切片后，冲去多聚甲醛，最后经ＨＥ染色，梯后，置于光学显微镜下观察对比毛囊数量和形态２．２．５　差异。

血清及皮肤组织中激素含量的测定　小鼠１５过夜禁食，眼球取血，静置后离心（３５００ｒ／ｍｉｎ，

皮肤ｍｉｎ），，称重并加入冷却的生理盐水收集上层血清；去除小鼠背部毛后（１∶１０，Ｗ／，Ｖ取背部）进行匀质，在相同条件下离心匀浆液，取上清。按相应试剂盒说明书（Ｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ，，用ＤＨＴ）以及雌二醇Ｔ）ＥＬＩＳＡ、（二法测定血清和皮肤匀浆中睾酮Ｅｓｔｒａｄｉｏｌ，Ｅ氢睾酮（Ｄｉｈｙｄｒｏｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ，２．３　女贞子醇提物对Ⅱ型５α⁃还原酶的抑制作用２）浓度。

采用体外微量酶反应体系测定其对Ⅱ型５α⁃还

原酶的抑制活性。非那雄胺为特异性Ⅱ型５α⁃还原酶抑制剂［９］病，本实验采用其作为阳性对照，临床常用于口服治疗雄激素依赖性疾。

取雄性ＳＤ大鼠３只，禁食不禁水１２ｈ后脱颈处死，取出腹侧前列腺及附睾并称质量，将组织在冰台上剪碎，用预冷的匀浆液（２０ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸缓冲

（４．６色谱条件：色谱柱（ＣＯＳＭＯＳＩＬ５Ｃ１８⁃ＭＳ⁃Ⅱ柱

甲醇⁃ｍｍ水（×７０２５０／３０，ｍｍ，５Ｖ／Ｖμｍ））；）；流速柱温为１ｍＬ／３０ｍｉｎ；℃；进流动相为２０μＬ；检测器为紫外检测器，检测波长２４２ｎｍ。样量为

通过色谱测定反应液中睾酮的含量，抑制活性的强弱用抑制率表示，公式如下：

转化率（％）＝受试药物组睾酮浓度的变化值／空白对照组睾酮浓度的变化值×１００％

－抑制率（％）＝（空白对照组睾酮浓度的变化值浓度的变化值受试药物组睾酮浓度的变化值×１００％

）／空白对照组睾酮

表１　Ⅱ型５α⁃还原酶的抑制活性研究反应体系

Ｔａｂｌｅ１　

ＲｅａｃｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｆｏｒｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｔｙｐｅⅡ５α⁃

ｒｅｄｕｃｔａｓｅＶ／μＬ

类别

空白对照组阳性对照组受试药物组

ＰＢⅡ型缓冲液５α⁃还原酶粗酶液

（ｐＨ５．５）３０００．７５００３００３００７５％ｍｍｏｌ乙醇／Ｌ睾酮５０５００５００５０

－５０

－５０女贞子醇提物－－５０

非那雄胺－

５０－１ｍｇ／ｍＬＮＡＤＰＨ１００

１００１００注：－表示该项未添加。

２．４　采用统计学方法

ｘＳＰＳＳ２３．０软件进行分析，计量资料采用

齐性用􀭰

±ｓ表示ＬＳＤ。多组间比较采用单因素方差分析法进行检验，方差不齐采用Ｔ３，法检验若方差，

Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。

３　结果

３．１　生长的影响

女贞子醇提物对雄激素性脱发模型小鼠毛发３．１．１　毛发生长情况　各组小鼠毛发生长情况及

第２期　刘小赟，等．女贞子醇提物对雄激素性脱发模型小鼠毛发生长的影响２３９

毛发质量见表２，毛发生长情况评分见图１。

与空白组相比，模型组小鼠的皮肤变色时间及长毛时间均明显延长（Ｐ＜０．０５），第３５天时毛发质量明显减少（Ｐ＜０．０５）。结果表明皮下注射丙酸睾酮对Ｃ５７ＢＬ／６小鼠的毛发生长具有明显的抑制作用。与模型组相比，米诺地尔组和女贞子醇提物各组的皮肤变色时间，长毛时间及毛发质量差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５），说明米诺地尔和女贞子醇提物均在一定程度上能缓解丙酸睾酮对Ｃ５７ＢＬ／６小已进入休止期，黑色素形成停止（图３Ａ）；模型组毛囊形态较短且稀疏，毛囊下端退化，毛乳头变细，内毛根鞘部分消失，毛发呈杆状末端（图３Ｂ）；米诺地尔组（图３Ｃ）和女贞子醇提物（图３Ｄ⁃Ｆ）各组毛囊数量较多，毛囊长而大，黑色素形成明显，由此可知，米诺地尔和女贞子醇提物均能够改善丙酸睾酮引起的毛囊微型化，维持毛囊正常形态。

鼠毛发生长的抑制作用。

表２　各组小鼠的毛发生长情况Ｔａｂｌｅ２　Ｈａｉｒｇｒｏｗｔｈｏｆｍｉｃｅｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ（ｘ􀭰

±ｓ，ｎ＝１０）组别皮肤变色皮肤长毛毛发质量／

时间／ｄ时间／ｄｍｇ空白组８．５±１．９１３．５±２．２

７９．９２±７．４１

模型组１９±２．３∗米诺地尔组１０±０．８＃１５．６±０．９２３±２．９∗＃１３．９７±５．８４∗

５１．６８±２．１２＃女贞子低剂量组

１２．４±２．４＃中剂量组１３．２±２．５＃１７．０±１．４＃＃３２．２０±５．４８＃１６．８±２．３４４．３８±３．６８＃高剂量组

１５．８±３．３＃

１９．８±３．１＃３３．７６±６．３５＃

与空白组比较：∗Ｐ＜０．０５；与模型组比较：＃Ｐ＜０．０５。

5空白组4模型组分米诺地尔组评32女贞子低剂量组女贞子中剂量组1女贞子高剂量组00714212835t/d图１　毛发生长情况评分Ｆｉｇｕｒｅ１　Ｈａｉｒｇｒｏｗｔｈｓｃｏｒｅ

３．１．２　（域的毛囊数量图２Ａ⁃Ｆ）。组织学观察在，选定区域内空白组小鼠的平均毛囊数４０倍光学显微镜下观察　皮肤横切面用于测定毛囊数６个不同区为１８２±５，模型组的为７４±９。与空白组相比，模型组毛囊数量明显降低（Ｐ＜０．０５），米诺地尔组和女贞子醇提物各组的毛囊数分别为１６２±２２、１２６±１８、１５４±２１和１４５±２２，与模型组相比有显著增加（Ｐ＜０．０５）。

从皮肤纵切面获得的毛囊形态如图３Ａ⁃Ｆ所示，空白组小鼠的毛囊数量多且形态完整，此时毛囊

Ａ．Ｅ．空白组　女贞子中剂量组；Ｂ．模型组；Ｃ．米诺地尔组；Ｄ．女贞子低剂量组；图２　女贞子醇提物对毛囊数量的影响；Ｆ．女贞子高剂量组。

（ＨＥ染色，４０×）

　Ｆｉｇｕｒｅ２　ｏｎｈａｉｒＥｆｆｅｃｔｆｏｌｌｉｃｌｅｏｆｅｔｈａｎｏｌｃｏｕｎｔｅｘｔｒａｃｔ（ＨＥｓｔａｉｎｉｎｇ，４０ｏｆＬｉｇｕｓｔｒｉ×Ｌｕｃｉｄｉ）

Ｆｒｕｃｔｕｓ

３．１．３　Ｈ。和ＤＨＴ与空白组比较血清及皮肤组织中激素含量含量均显著升高，模型组小鼠血液和皮肤组织中　结果见图４Ａ⁃（Ｐ＜０．０５），ＥＴ统计学意义（Ｐ＞０．０５），Ｔ／Ｅ２含量差异无０．０５）；２比值显著增大（Ｐ＜液和皮肤组织中实验结果表明该雄激素源性脱发模型小鼠血

Ｔ和ＤＨＴ含量升高，性激素平衡状态改变，模型建立成功。与模型组比较，女贞子醇提物低剂量组血清中Ｔ含量显著降低（Ｐ＜０．０５），Ｅ和ＤＨＴ含量差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），Ｔ／Ｅ２２比

２４０广东药科大学学报　第３６卷　

值显著降低（Ｐ＜０．０５）；皮肤组织中的Ｔ和ＤＨＴ含量均显著降低（Ｐ＜０．０５），Ｅ２含量差异无统计学意义与高剂量组血清和皮肤组织中Ｔ、ＤＨＴ含量均显著性降低（Ｐ＜０．０５），Ｅ２含量差异无统计学意义（Ｐ＞各项激素含量与模型组差异均无统计学意义（Ｐ＞３．２　女贞子醇提物对Ⅱ型５α⁃还原酶的抑制作用０．０５）。

（Ｐ＞０．０５），Ｔ／Ｅ２比值显著降低（Ｐ＜０．０５）；中剂量组

０．０５），Ｔ／Ｅ２比值显著降低（Ｐ＜０．０５）；米诺地尔组的

配制质量浓度为１．６９、３．３８、６．７６、１３．５２、２７．０４、

５４．０８、１０８．１５μｇ／ｍＬ的睾酮溶液进行液相色谱分作睾酮标准曲线。睾酮的标准曲线为Ｙ＝６９５８４Ｘ－

析，以浓度（Ｘ）为横坐标，峰面积（Ｙ）为纵坐标，制３７６９３，Ｒ２＝０．９９９９，表明睾酮在１．６９～１０８．１５μｇ／ｍＬ

范围内与峰面积具有良好的线性关系，可以用于含量测定。睾酮标准溶液的液相色谱图见图５。

样品对Ⅱ型５α⁃还原酶的抑制活性见表３。与空白对照组相比，女贞子醇提物３个剂量组的睾酮转化率差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０５），当体外剂量大于１ｍｇ／ｍＬ时，可极显著降低睾酮转化率（Ｐ＜０．０１），还原酶活性。

抑制率可达（８１．４９±４．０３）％，具有明显抑制Ⅱ型５α⁃

Ａ．空白组；Ｂ．模型组；Ｃ．米诺地尔组；Ｄ．女贞子低剂量组；Ｅ．女贞子中剂量组；Ｆ．女贞子高剂量组。　Ｆｉｇｕｒｅ３　

　图３　女贞子醇提物对毛囊状态的影响（ＨＥ染色，４０×）

ｏｎｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｏｆｈａｉｒｆｏｌｌｉｃｌｅ（ＨＥｓｔａｉｎｉｎｇ，４０×）

E2

200150100500252010

5000

0

123456

123456

50

123456

2000

123456403020100600400

ＥｆｆｅｃｔｏｆｅｔｈａｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｏｆＬｉｇｕｓｔｒｉＬｕｃｉｄｉＦｒｕｃｔｕｓ

DHT

60

-1ρ/(μg?mL)T

25002000

T/E2

4020040

血清1500100050001500010000

-1ρ/(μg?mL)3020100

皮肤１．空白组；２．模型组；３．米诺地尔组；４．女贞子低剂量组；５．女贞子中剂量组；６．女贞子高剂量组。与空白组比较：∗Ｐ＜０．０５；与模型组比较：＃Ｐ＜０．０５。　Ｆｉｇｕｒｅ４　

　图４　女贞子醇提物对血清和皮肤中激素水平的影响

ＥｆｆｅｃｔｏｆｅｔｈａｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｏｆＬｉｇｕｓｔｒｉＬｕｃｉｄｉＦｒｕｃｔｕｓｏｎａｎｄｒｏｇｅｎｌｅｖｅｌｓｉｎｓｅｒｕｍａｎｄｓｋｉｎ（ｎ＝１０）

第２期　

50mAU2500

5

刘小赟，等．女贞子醇提物对雄激素性脱发模型小鼠毛发生长的影响２４１

还原酶的抑制率可达（８１．４９±４．０３）％。由此可见，

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15

20

%在丙酸睾酮诱导产生雄激素性脱发模型小鼠的过程中，Ⅱ型５α⁃还原酶的活性增高起到至关重要的影响，而Ｐ４５０芳香酶无明显的影响作用。

泌ＶＥＧＦ和ＨＧＦ增加从而促进毛囊生长［１４］，结合本研究结果，女贞子在促毛发生长过程中不仅影响重要的细胞因子，还可以降低雄激素水平，从而起到促进毛发生长，维持毛囊形态的作用，在治疗雄激素性脱发中具有一定的优势，其对头皮微循环的影响仍有研究表明女贞子可使小鼠触须毛囊毛乳头分

　图５　睾酮标准溶液的液相色谱图　Ｆｉｇｕｒｅ５　

ＨＰＬＣｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｏｆｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅｓｔａｎｄａｒｄ

ｓｏｌｕｔｉｏｎ

表３　女贞子醇提物对Ⅱ型５α⁃还原酶的抑制活性Ｔａｂｌｅ３　

ＩｎｈｉｂｉｔｏｒｙａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｅｔｈａｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｏｆＬｉｇｕｓｔｒｉＬｕｃｉｄｉ

ＦｒｕｃｔｕｓｏｎｔｙｐｅＩＩ５α⁃ｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ｘ􀭰

±ｓ，ｎ＝３）组别剂量／（ｍｇ·ｍＬ－１）

转化率／％抑制率／％

空白组－２９．８２±１．６２－阳性对照组１μｍｏｌ／Ｌ４．８３±１．７１∗∗女贞子低剂量组

０．５１６．２９±０．７１

∗

８４．００±３．８９中剂量组１５．３５±１．７３∗∗３８．９３±２．６７

高剂量组

２

５．１４±１．５６∗∗８１．４９±４．０３∗Ｐ＜０．０５，∗∗Ｐ＜０．０１。

８０．７２±３．１３

与空白组比较：４　讨论

期及评估促毛发生长活性Ｃ５７ＢＬ／６小鼠动物模型常用于研究毛发生长周

，通过对毛发生长周期和皮肤组织切片的观察，女贞子醇提物各剂量组小鼠毛发质量、毛囊数量显著增加（Ｐ＜０．０５），证实了女贞子醇提物对雄激素性脱发模型小鼠具有明显的促毛发生长作用。雄激素性脱发与多种因素有关，其中雄激素及Ⅱ型５α⁃还原酶在毛发生长中起主要的调节作用［１０］酶将雄激素转化为雌激素，此外头发毛囊外根鞘中的Ｅ长［１１］。通对血清和皮肤组织中各激素水平的检测２，也会抑制毛发的生Ｐ４５０芳香结果表明女贞子醇提物能明显降低血清和皮肤组织，

中雄激素水平（Ｐ＜０．０５），尤其是皮肤组织中的ＤＨＴ水平，有效改善雄激素引起的毛发减少和生长缓慢的现象；而米诺地尔对睾酮引起的雄激素水平升高没有显著影响，与文献报道［１２］一致，其主要育发作用机制包括扩张头皮血管，改善微循环和促进毛乳头细胞中的ＶＥＧＦ和ＦＧＦ⁃７的分泌等。各实验组小鼠血清和皮肤组织中Ｅ２含量不具有显著性差异，当女贞子醇提物生药浓度为１ｍｇ／ｍＬ时，对Ⅱ型５α⁃在进一步研究中。本研究为女贞子醇提物在预防和治疗雄激素性脱发药物的进一步研发提供了重要的参考价值。

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（责任编辑：幸建华）