分析与检测两种检测食品中金黄色葡萄球菌的方法比较□ 王 胜 烟台经济技术开发区疾病预防控制中心摘 要：本文采用两种实验方法对食品中的金黄色葡萄球菌进行检测，比较两种方法的结果，以期为有关检测人员提供参考。关键词：食品；金黄色葡萄球菌；PCR检测；LAMP检测1 金黄色葡萄球菌介绍多，本文将介绍比较新型的金黄色葡萄球菌的检测方法有很检测方法以及2 检测实验材料以及方法LAMP实验检测方法PCR实验[1]。2.1 主要的试剂以及仪器SYBR Premix Ex Taq（1）试剂：DNA Marker、dNTP、以及聚合酶等。Taq DNA酶、甜菜碱及分子生物学试剂Bst DNAHPS-150（2）仪器：DYY-12电泳仪、像系统、HH-S4Eppendorf5331PCR生化培养箱、GBOX扩增仪、凝胶成高速冷冻离心机等。电热恒温水浴锅以及CT15RE2.2 样品以及菌种合市场随机采集的鸡蛋，共（1）样品：在当地市区内6个综一份样品包含6枚鸡蛋。60份，每藏中心购买的金黄色葡萄球菌。（2）菌种：于当地微生物菌种保2.3 常规的DNA配制25μLPCR的实验检测方法F3模板2μL，10μmol/L反应体系，其中Ex Taq12.5μL。均为1μL，ddH2O8.5μL，Premix 的B3以及3min实验过程为：在95℃环境中进行进行的预变性，随后在95℃环境中30s的延伸，一共进行循环的退火，在30s的变性，在72℃环境中进行55℃环境中进行72℃的环境中进行30次，最终在1min2.4 LAMP10min的延伸。DNA配制25μL实验检测方法的反应体系，聚10μmol/L合模酶大板片2μL，8U/μL的Bst DNA其中20μmol/L的段5mol/L的外1μL，ddH2O3.5μL，内引引物物均均为0.5μL，的的betaine4μL，10mmol/L为1.5μL，及dNTP4μL，10×Bst buffer2.5μL25mmol/L的MgSO44μL。以并且在实验过程为：将以上试剂混匀，65℃的环境中进行45min的温育，在反应终止。最后在80℃的环境中灭火10min，使数这是检测两种实验方法灵敏度的主要目是2×100～2×106copies/μL，中进行电泳分析。2%的琼脂糖凝胶2.5 样品处理模板。机采集的总计对在当地市区内6个综合市场随拷测，并且用μL贝经过实际实验可知，在数目是2×103～2×10Nuc6基因黄色葡萄球菌检测方法对鸡蛋样品进GB 4789.10-201060份鸡蛋样品展开检中的金测到的扩增条带比较清晰；在时，常规的PCR实验检测方法检copies/行检测。因常拷贝数目是2×102Nuc基要用在实际处理过程中，检测人员需条规的PCR检测方法copies/μL检测出的扩时，增的蛋壳，随后再用BPW50mL分别冲洗每一枚鸡蛋2×10copies/μL带很弱；在Nuc进行消毒处理，并且小心地将气室端75%的酒精对鸡蛋检测方法无法检测出扩增条带。这说时，常规的基因拷贝PCR数目实验是蛋壳除掉，将内容物倒出来，再将明常规的枚鸡蛋的内容物以及蛋壳清洗液混合6400基因拷贝数。PCR检测方法，其灵敏度是将液分别接种于25mL的鸡蛋内容物以及；使在进行LAMP锥形瓶内（225mL），对其振荡以使7.5%的NaClBPW肉汤无菌清洗μL，此方法检测出的扩增条带也十分Nuc基因拷贝数目是检测的过程中，即2×10copies/待测物混匀；将锥形瓶放置于清晰。实验结果证明，LAMP环境中培养37℃的方法的灵敏度是常规的实验检测菌液对18h，以煮沸法用1mL增方法的常规3.2 检测鸡蛋样品的结果10倍。PCR实验检测测，最终按照国家标准对细菌进行分PCRDNA实验检测以及进行提取，并且仔细进行LAMP实验检离鉴定。程中，常规的在检测60份鸡蛋蛋壳样品的过3 结果比较探讨LAMP3.1 比较常规PCR实验检测以及性金黄色葡萄球菌样本分别是实验检测方法所检测出来的阳PCR实验检测方法以及LAMP53份与11%。就检测效果而言，常规的份，二者实际的检出率为6%以及PCR菌液浓度是运用平板计数方法，算得原始的实验检测方法的灵敏度实验检测方法低于进行5.4×109CFU/mL，对菌液法，如表LAMP实验检测方进行稀释，最后获得的DNA提取，并且按照一定的比例Nuc基因拷贝测过程中，以上两种实验检测方法都1所示。在鸡蛋内容物的检没有检测到金黄色葡萄球菌。表1 鸡蛋样品检测结果样品的种类（60常规的检测方法检出数PCR实验LAMP内容物份）方法检出数实验检测鸡蛋壳030国家标准参考5054 结论适用于检测基层现场。LAMP总体而言，本文通过比较，发现参考文献PCR方法的扩增反应相对于常规的[1]董华夏,曾慧君,戴小芳.食品更加直观、便捷，因此相对而言，更方法更迅速，获得结果的方式也中金黄色葡萄球菌肠毒素分子检测方法研究进展[J].化工管理,2018(33):130.Feb. 2019 CHINA FOOD SAFETY 123
