・１１８８・ 遁酉医药２０１４年１１月第４９卷第１１期Ｊｉａｎ ｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｍａ１．Ｎ０ｖｅｍｂｅｒ ２０１４．Ｖ０１ ４９．Ｎ０１１ ．实验研究． 冬虫夏草对大鼠糖尿病肾病的保护作用机制研究 张莉，鄢艳，胡秀华，何艳 喃昌大学第一附属医院肾内科，南昌３４１０００） 摘要：目的观察人工冬虫夏草制剂对链尿佐菌素（ＳＴＺ）诱导的糖尿病肾病（ＤＮ）大鼠肾组织转化生长因子（ＴＧＦ—Ｂｌ１和 结缔组织生长因子（ＣＴＧＦ）表达的影响，探讨虫草制剂对糖尿病肾病的肾保护和抗纤维化机制。方法将３６只Ｗｉｓｔａｒ雄性大 鼠，随机分为对照组（１２只），２４只成模组随机分为ＤＮ模型组，虫草组，虫草组予４００ｍ￣（ｋｇ・ｄ）灌胃给药，分别于第２、４、８周 处死大鼠（每组４只）分别检测血糖值、体重、２４ｈ尿微量蛋白、肌酐（Ｓｃｒ）含量、肾脏的病理变化，免疫组化法检测肾脏中 ＴＧＦ一１３１和ＣＴＧＦ的表达。结果ＤＮ模型组大鼠尿微量白蛋白排泄率显著增加（Ｐ＜Ｏ．０１）现高表达。虫草治疗组与ＤＮ模型组 比较，虫草治疗组尿微量蛋白排泄率显著减少（Ｐ＜Ｏ．Ｏ１）Ｓｃｒ水平降低（Ｐ＜０．０１１，肾组织病理改变减轻，肾组织内ＴＧＦ一１３１和 ＣＴＧＦ表达下调（Ｐ＜Ｏ．０５或Ｐ＜Ｏ．Ｏ１）。结论虫草制剂对ＤＮ具有肾脏保护作用，其机制可能是通过使ＴＧＦ一１３１／ＣＴＧＦ的表达下 调而实现的 关键词：糖尿病肾病；肾纤维化；转化生长因子：结缔组织生长因子；冬虫夏草 中图分类号：Ｒ５８７．１０５ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００６—２２３８（２０１４）１１－１１８８—０５ ＤＯＩ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１００６－２２３８．２０１４．１１．０２３ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ ｏｎ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ ｉｎ ａ ｒａｔ ｍｏｄｅｌ ＺＡ ＨＮＧ Ｌｉ，ＹＡ Ｎ Ｙａｈ，ＨＵ Ｘｉｕｈｕａ，ｅｔ ．Ｄｅ— ｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＮｅｐｈｒｏｌｏｇｙ，Ｆｉｒｓｔ Ａｆｉｌｆｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｎａｎｃｈａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｃｈａｎｇ，３３０００６，Ｃｈｉｎ￣ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａｒｔｉｉｆｃｉａｌ Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ ｏｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ＴＧＦ—Ｂ １ ａｎｄ ＣＴＧＦ ｉｎ ｒａｔｓ ｍｏｄｅｌ ｗｉｔｈ ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｅｉｎ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ．Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ａｎｔｉ—ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｎ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｏｔａｌｌｙ ３６ ｍａｌｅ ａｄｕｌｔ ｗｉｓｔａｒ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｇｒｏｕｐｅｄ ａｓ ｃｏｎｔｒｏｌ，ＤＮ ａｎｄ ＤＮ ｗｉｔｈ Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｒａｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ＤＮ ｗｉｔｈ Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｅｒｅ ｉｎｔｒａｇａｓｔｒｉｃａｌｌｙ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ ｐｏｗｄｅｒ ａｔ ｔｈｅ ｄｏｓａｇｅ ｏｆ ５．Ｏｇ／（ｋｇ。ｄ）．１２ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｓａｃｒｉｉｆｃｅｄ ｉｎ ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ ａｔ ｔｈｅ ２ｎｄ，４ｔｈ ａｎｄ ｔｈｅ ８ｔｈ ｗｅｅｋ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｇｌｕｃｏｓｅ，ｗｅｉｇｈｔ，ｕｒｉｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗｉｔｈｉｎ ２４ｈｒｓ ａｎｄ ｓｅｒｕｍ ｃｒｅａｔｉｎｉｎｅ ａｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ．Ｋｉｄｎｅｙ ｔｉｓｓｕｅｓ ｗｅｒｅ ｅｘａｍｉｎｅｄ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ，ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ＴＧＦ一１３ １ ａｎｄ ＣＴＧＦ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ａｔ ｔＩｌｅ ｉｍｍｕｎｏｈｉｔｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｌｅｖｅ１．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｃｏｍｐａｒｉｎｇ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ， Ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｃｒｅｔｉｏｎ ｒａｔｉｏ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ＴＧＦ一１３１ ａｎｄ ＣＴＧＦ ｗｅｒｅ ａｌｌ ｄｒａｍａｔｉｃａｌｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜Ｏ．Ｏ１），ｍｅａｎｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｌｏｇ— ｉｃａｌ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｋｉｄｎｅｙ ｔｉｓｓｕｅｓ ｗｅｒｅ ａｌｓｏ ｓｅｖｅｒｅｒ ｉｎ ＤＮ ｇｒｏｕｐ．Ｃｏｍｐａｒｉｎｇ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ＤＮ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ＤＮ ｗｉｔｈ Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ ｔｒｅａｔ— ｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐ ｒｅｓｕｉｔｓ ｉｎ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜Ｏ．Ｏ１）ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｃｒｅｔｉｏｎ ｒａｔｉｏ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｅｒｕｍ ｃｒｅａｔｉｎｉｎｅ，ｌｏｗｅｒ（Ｐ＜０．０５）ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＴＧＦ一 １３ １ ａｎｄ ＣＴＧＦ ａｎｄ ｆｅｗｅｒ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｋｉｄｎｅｙ ｔｉｓｓｕｅｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ ｐａｌｙ ａ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｒｏｌｅ ｏｎ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ ｉｎ ｒａｔ，ａｎｄ ｐｏｓｓｉｂｌｙ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｔｈｅ ＴＧＦ一１３ １ ａｎｄ ＣＴＧＦ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｄｉａｂｅｔｉｃ ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ；Ｒｅｎａｌ ｉｆｂｒｏｓｉｓ；ＴＧＦ一１３１ ａｎｄ ＣＴＧＦ；Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ 随着中国人口老龄化．２型糖尿病在人群中的 发病率越来越高．随着２型糖尿病的病程的延长， 糖尿病肾病（Ｄｉａｂｅｔｉｃ Ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ，ＤＮ）在我国的 发病率逐年上升．已成为导致终末期肾病的主要 原因之一 ＤＮ主要的肾脏病理改变为足细胞损伤 脏保护、防治纤维化等作用。临床有研究报道，冬 虫夏草能够有效缓解ＤＮ的发展进程。但其阻碍 ＤＮ的发展、使肾脏纤维化发展延缓的具体机制尚 不明确 ＴＧＦ—Ｂ１和ＣＴＧＦ是重要的致肾脏纤维化 因子．冬虫夏草是否能通过影响ＴＧＦ一１３１和ＣＴＧＦ 的表达．达到延缓ＤＮ的纤维化不得而知。本研究 和系膜细胞增生的肾小球的硬化及成纤维细胞活 化和肾小管上皮细胞转分化的肾小管间质纤维化 ［１－３］ 随着人们对糖尿病肾病的认识增加．发现转化 生长因子一１３１（ＴＧＦ～１３１）和结缔组织生长因子（ＣＴ— ＧＦ）在ＤＮ发病进程中发挥着重要的作用 近年 拟通过虫草对ＤＮ大鼠进行干预性治疗，观察其对 糖尿病大鼠２４ｈ微量蛋白尿排泄量．内生肌酐清除 率，及ＴＧＦ—Ｂ１及ＣＴＧＦ表达的影响，探讨虫草对 糖尿病大鼠肾脏的保护作用及可能的机制。 的研究表明．我国的传统中药冬虫夏草对组织纤 维化可能有预防及治疗作用 随着对对冬虫夏草 的药理学认识深入．发现虫草具有调节免疫力、。肾 通信作者：鄢艳 １材料和方法 １．１材料链尿佐菌素（ＳＴＺ１（Ｓｉｇｍａ公司产品，上海 士锋生物有限公司分装）。人工ＣＳ粉剂（金水宝） 江西济民公司提供 山羊抗大鼠ＣＴＧＦ多克隆抗体 江西医药２０１４年１１月第４９卷第—ｌｌ Ｊｉａｎｇｘｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２０１４，Ｖｏｌ ４９，Ｎｏ１１ ・１ｌ８９・ ｆ武汉博士德生物工程有限公司产品１。兔抗大鼠 ＴＧＦ—Ｂｌ（上海瑞齐生物科技有限公司产品）。ＳＰ山 羊抗试剂盒ｆ上海瑞齐生物科技有限公司产品）。 Ｍａ ｉｓｉｏｎＴＭ试剂盒（福州迈新生物技术开发有限 公司产品）异氟烷（上海玉研科学仪器有限公司）。 １．２饲养和分组 １．２．１饲养和成模雄性Ｗｉｓｔａｒ大￣（２２０—３００ｇ）３６ 只．饲养于清洁级动物室，饮用水为双蒸水，室温 ２２—２６℃．光照和黑暗时间为交替１２ｈ。喂养两周 后。将大鼠随机分为两组：对照组１２只（Ｎ组）和 ＤＮ组（２４只）．ＤＮ组大鼠禁食１０ｈ，使用ＳＴＺ按 ５５ｍｇ／ｋｇ的剂量腹腔注射，测随机血糖在１６． ７ｒａｍｏｌ／Ｌ以上．尿常规示尿糖＋＋＋至＋＋＋＋视为大鼠 糖尿病模型成功 ４周后测量２４ｈ尿蛋白定量，在 ３０ｍｇ／２４ｈ以上者．视为ＤＮ造模成功 ＤＮ造模成 功后．每天检测随机血糖两次．在整个实验期间， 不使用胰岛素干预。 １．２．２分组及干预２４只ＤＮ大鼠随机分为ＤＮ模 型非治疗组ｆＤ组）１２只，ＣＳ治疗组ｆＣ组）１２只。治 疗组以金水宝ｆＣＳ）粉５ｇ／ｋｇ／ｄ的剂量灌胃，余两组 分别以等量生理盐水灌胃。干预后的第２、４、８周 处死Ｎ组、Ｄ组及Ｃ组大鼠各４只．处死前三天收 集大鼠２４ｈ尿液．尿标本使用甲醛防腐．检测尿微 量白蛋白排泄量（ＥＬＩＳＡ法），测定２４ｈ尿蛋白量， 同时测定Ｎ组、Ｄ组、Ｃ组大鼠随机血糖。用异氟烷 和脂肪乳麻醉大鼠．解剖暴露腹腔．在髂动脉处取 血３ｍｌ，留待行血肌酐及血糖检测。将肾组织放入 装有１０％中性的容器中固定．脱水、包 埋，制成４１ｘｍ切片．行苏木素一伊红染色，观察肾小 球及肾小管的改变．用免疫组化法对肾组织中的 ＴＧＦ—Ｂ１和ＣＴＧＦ进行测定，了解其在肾组织中的 表达。 １．３方法 １．３．１大鼠日常指标监测在腹腔给予ＳＴＺ前．称 量大鼠的体重．观察每个时期实验大鼠的体重、毛 色、活动度和尿量。 １．３．２大鼠血糖及肌酐检测大鼠２４ｈ尿微量白蛋 白采用ＥＬＩＳＡ法测定，血肌酐（ＳＣｒ）采用肌酐酶法 测定．使用德国罗氏血糖仪测定血糖 １－３．３酶免疫组化取材、固定、脱水、透明、浸蜡、 包埋、组织切片、脱蜡、水化、抗原修复、正常羊血 清工作液封闭、滴加一抗ｆ兔抗大鼠ＴＧＦ一［３１，山羊 抗大鼠ＣＴＧＦ多克隆抗体）、滴加生物标记二抗、 ＤＡＢ／Ｈ２０２反应染色．自来水冲洗，复染，烘干、封 片。 １．３－４结果判断阳性反应为细胞浆或胞膜出现棕 黄色颗粒．随机选取１Ｏ个肾小球视野，分别计数 视野所见阳性细胞．对每个阳性细胞测量，取平均 值．与对照组比较．随机选取５个视野。计算肾小 管阳性细胞数，对每个阳性细胞测量，取平均值， 与对照组比较 １．３．５统计学分析数据均使用ＳＰＳＳ １７．０软件包 进行处理．两两比较组间差异．采用单因素方差分 析，显示有统计学意义。后再用组间ｔ检验，以ＯＬ＝０． ０５为检验标准，Ｐ＜０．０５示有统计学意义。 ２结果 ２．１大鼠一般情况比较实验中发现．在成模前。 各组大鼠（模型组、对照组）在饮食、活动、毛色均 并无差异性。在成模后的２周左右，模型组大鼠垫 料潮湿，有多饮、多食、消瘦的表现，４周后将成模 的大鼠随机分组．２周后观察Ｄ组大鼠出现“三 多”、体重明显下降．毛色灰暗，活动减少，Ｃ组大鼠 可见大鼠出现“三多”、体重下降、毛色变灰、活动 减少．但较Ｄ组一般情况好 ２．２各组大鼠２４ｈ尿蛋白排泄量检测结果在用 药后第２、４、８周检测Ｎ组、Ｄ组、Ｃ组的２４ｈ尿蛋 白排泄量。结果如图表１所示．Ｎ组２４ｈ尿微量蛋 白排泄量正常．Ｄ组和Ｃ组２４ｈ尿蛋白排泄量均 显著增加。其中Ｄ组２４ｈ尿微量蛋白排泄量比Ｎ 组显著增加ｆＰ＜０．０１１，Ｃ组２４ｈ尿蛋白排泄量比Ｎ 组显著增加ｆＰ＜０．０１１，Ｃ组２４ｈ尿蛋白排泄量 Ｄ 组显著下降，两者有显著性差异ｆＰ＜０．０１） ２．３各组大鼠血肌酐水平测定在本研究中．检测 用药后第２、４、８周Ｎ组、Ｄ组、Ｃ组血肌酐水平，具 体结果如表２。Ｎ组血肌酐在第２、４与８周时均正 常，而Ｄ组和Ｃ组血肌酐在第２、４与８周时均显 著增高．为进行性升高．其中Ｄ组在第８周最高为 （２２６．６３＋１２．０９）ｐ￣ｍｏｌ／１．Ｃ组在第８周时最高为 （１５８．５７＿＋１２．６９）Ｉｘｍｏｌ／１。统计结果显示三组间在第 ２、４、８周血肌酐水平差别具有统计学意义ｆＰ＜Ｏ． 表１ ３组２４ｈ尿微量蛋白排泄量比较（；±ｓ。ｍｇ／２４ｈ） 注：与Ｎ组比较， Ｐ＜０．０５， Ｐ≮０．Ｏ１；与Ｄ组比较， ＩＰｌ＜Ｏ．０５， 尸＜Ｏ．０ｌ。 ・ｌ１９０・ 两医药２０１４年１１月第４９卷第１１期Ｊｉａｎ ｉ Ｍｅｄｉｃａ１ Ｊｏｕｍａ１．ＮＯＶｅｍｂｅｒ ２０１４．Ｖｏ１ ４９．Ｎｏ１１ 表２ ３组血肌酐测定比较ｌ；±ｓ。ｕｍｏｌ／Ｌ） 注：与Ｎ组比较，｝Ｐ＜０．０５， Ｐ（０．Ｏ１；与Ｄ组比较， Ｐ（０．０５， Ｐ＜Ｏ Ｏ１。 ｏ５）。进一步比较发现，在给药后第２、４、８周，Ｄ组 ２４ｈ血肌酐比Ｎ组明显增加（Ｐ＜０．０１１；Ｃ组２４ｈ血 肌酐比Ｎ组明显增２Ｈ（Ｐ＜０．０１１．Ｃ组血肌酐比Ｄ组 显著下降，二者有显著性差异ｆＰ＜Ｏ．ｏ１）。 ２．４各组大鼠血糖测定在用药后第２、４、８周检 测Ｎ组、Ｄ组、Ｃ组血糖的水平 具体结果见表３。 其中Ｎ组血糖水平在第２、４及第８周均为正常， 而实验组Ｄ组与Ｃ组血糖水平明显升高 Ｄ组２４ｈ 血糖在不『西】时间点均比Ｎ组血糖明显增加ｆＰ＜０． ０１１．Ｃ组２４ｈ血糖水平在不同时间点比Ｎ组明显 增加（Ｐ＜０．０１１ 然而Ｃ组血糖与Ｄ组比较无明显差 异ｆ ，０．ｏｓ）。 表３ ３组血糖水平比较（；±ｓ。ｍｍｏｌ／Ｌ） 注： ０．０５，｝ Ｐ＜０．０１，和Ｎ组比较；Ａｐ＞０．０５，和Ｄ组比较。 ２．５大鼠肾脏病理观察用正常大鼠的肾组织作 为参照．观察Ｄ组和Ｃ组的肾小球、’肾间质及肾小 管病理变化 光镜下观察Ｄ组大鼠的肾组织，发现 肾小球体积增大．肾小球系膜增宽．基质明显增 加．基底膜增厚 近曲小管上皮细胞可见刷状缘消 失．大量小管上皮细胞空泡变性，。肾间质可见大量 炎症细胞浸润． Ｃ组大鼠的肾组织可见肾小球体 积稍增大．肾小球系膜稍有增宽。基质部分增多， 基底膜稍有增厚．近曲小管上皮细胞部分刷状缘 消失．部分小管细胞空泡变性．。肾间质少量炎性细 胞浸润，较Ｄ组有所改善ｆ见图１）。 ＿ｌ■ 图１不同组肾脏病理典型表现（ＨＥ×４００） ２．６不同组肾脏组织中ＴＧＦ—Ｂ１表达水平使用 免疫组化法，在４００倍时，观察大鼠肾组织ＣＴＧＦ 及ＴＧＦ—Ｂｌ的表达，如图２所示，ＴＧＦ—Ｂ１主要表 达于近曲肾小管上皮细胞及间质．其次表达于肾 小球，进一步比较发现，与Ｎ组相比，Ｄ组ＴＧＦ—Ｂｌ 表达显著升高 ＜０．０１１，Ｃ组与Ｎ组比较，Ｃ组 ＴＧＦ—Ｂ１表达显著升高ｆＰ＜０．０１），然后Ｃ组与Ｄ组 比较，Ｃ组ＴＧＦ—Ｂ１的表达显著下降ｆＰ＜０．０５）。 ２．７肾组织中ＣＴＧＦ表达的变化使用免疫组化 法．在４００倍时观察实验大鼠肾组织ＣＴＧＦ的表达 情况．如图２所示．ＣＴＧＦ在大鼠肾组织的肾小球 明显表达．其次在肾小管上皮细胞及。肾间质表达 对三组ＣＴＧＦ的表达进行Ｆ检验．根据统计结果表 明三组间ＣＴＧＦ表达差别具有统计学意义 ＜０． ０５１，两两相比较结果发现。Ｄ组与Ｎ组比较，Ｄ组 ＣＴＧＦ表达显著升高ｆ尸＜Ｏ．０１１．ｃ组与Ｎ组比较，ｃ 组的ＣＴＧＦ表达显著升高ｆ尸＜０．０１），Ｃ组与Ｄ组比 较．Ｃ组ＣＴＧＦ的表达显著下降ｆＰ＜０．０５１。 图２ ＴＧＦ—Ｂ １在各组肾脏组织中的表达（光镜×４００）一 。 Ａ为ＴＧＦ—Ｂ１在正常大鼠肾脏组织表达；Ｂ为ＴＧＦ—Ｂ１在大鼠糖尿 病肾病模型形成时肾脏组织的表达；Ｃ为未治疗大鼠糖尿病肾病 组第８剧时肾脏组织中ＴＣＦ—Ｂｌ表达；Ｄ为冬虫夏草治疗大鼠糖 尿病肾病组第８周时。肾脏组织中ＴＧＦ—Ｂｌ表达 ２．８ ３组大鼠ＣＴＣＦ和ＴＧＦ—Ｂｌ表达相关性分析 见表４。Ｎ组两者无相关性，ＣＤ组两种蛋白明显成 正比。（Ｐ＜０．００５）。 表４ ３组大鼠ＣＴ６Ｆ和ＴＧＦ一８１表达相关性分析 注：Ｄ组、Ｃ组Ｐ值均＜Ｏ．Ｏｌ，两者间具有相关关系。 ３讨论 在本研究中．首次利用人工冬虫夏草治疗ＤＮ １．嗥吐口一 ａｎ琴虻 ・江西医药２０１４ ３ ３ ２ ２ １ １ Ｏ Ｏ ４年１１月第４９卷第１１期Ｊｉａｎｇｘｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２０１４，Ｖｏｌ ４９，Ｎｏ１１ １ｌ９１・ ｔ ｌ上Ｕ：Ｉ口Ｚ ２Ｏ ５ Ｏ ５ Ｏ ５ Ｏ ５ Ｏ ｒ－－ｉ Ｎ 四ＤＮ 嘲ＣＳ ２ ｗｅｅｋｓ ８ｗｅｅｋｓ ＴＧＦ－ｐ １ 图３各组大鼠肾脏组织中ＴＧＦ－ｐ １表达水平， Ｐ＜０．０５， ＜０ ０１。和Ｎ组比较； Ｐ＜０．０５。 Ｐ＜０．０１，和Ｄ组比较。 图４ ＣＴＧＦ在各组肾脏组织中的表达（光镜Ｘ ４００ ｏ Ａ为ＣＴＧＦ在正常大鼠肾脏组织表达：Ｂ为ＣＴＧＦ在大鼠糖尿病肾 病模型形成时肾脏组织的表达：Ｃ为未治疗大鼠糖尿病肾病组第８ 周时肾脏组织中ＣＴＧＦ表达：Ｄ为冬虫夏草治疗大鼠糖尿病肾病组 第８周时肾脏组织中ＣＴＧＦ表达。 ｒ－－ｉ Ｎ 圆ＤＮ 圈翻ＣＳ ２ ｗｅｅｋｓ ８ｗｅｅｋｓ ＣＴＧＦ 图５组大鼠肾脏组织中ＴＧＦ—Ｂ １表达水平。 Ｐ＜０．０５。 ＜Ｏ．０１， 和Ｎ组比较； Ｐ＜０．０５。 Ｐ＜０．０１，和Ｄ组比较。 大鼠，结果显示冬虫夏草可以减少实验大鼠的２４ｈ 尿蛋白排泄量，降低大鼠血肌酐的水平．从而减轻 ＤＮ大鼠肾组织的病理损伤 其主要机制可能是通 过下调ＴＧＦ—Ｂｌ和ＣＴＧＦ在ＤＮ大鼠肾组织的表 达实现的 体外研究表明．ＴＧＦ—ｐｌ在ＤＮ中的作用是促 进肾脏系膜细胞肥大．同时影响细胞外基质的代 谢．已有研究证实ＤＮ患者肾脏系膜细胞的ＴＧＦ— Ｂ１合成增加，并认为糖尿病表现早期的。肾小球肥 大可能是ＴＧＦ一［３１介导产生的㈣。在ＥＣＭ的代谢 中。ＴＧＦ—Ｂ１的主要作用是增加系膜区基质的合成 和减少降解 周青等研究显示．糖尿病肾病大鼠肾 组织中ＶＥＧＦ及ＴＧＦ—Ｂ１参与了早晚期蛋白尿及 肾脏肥大硬化的发生＿ｌｌ１。陈小辉等发现ＴＧＦ—Ｂｌ及 仅一ＳＭＡ在肾间质纤维化过程中发挥重要作用ｌ ｌ２ｌ。 Ｈ。ｈ等的研究发现给予ＳＴＺ腹腔灌注诱导大鼠形 成ＤＮ模型４周后观察肾小球ＴＧＦ—Ｂ１、ＦＮ、１Ｖ型 胶原的ｍＲＮＡ的水平和尿蛋白排泄率明显升高 ｌ１３］ 对转基因鼠的研究显示．使用用免疫组化和原 位杂交法证实ＴＧＦ—Ｂ１表达高的区域ＦＮ型胶原 合成增加，从而提示ＴＧＦ—Ｂｌ持续肾组织局部高度 表达可能引起肾小球的硬化 本研究中同样发现． 糖尿病肾病组肾脏组织中ＴＧＦ一１３１表达水平显著 升高。 ＣＴＧＦ是导致ＴＧＦ—Ｂ１促纤维化的一个重要 的下游因子 本研究结果显示．ＣＴＧＦ主要表达在 糖尿病肾病大鼠的肾小球．其次表达于近曲肾小 管上皮细胞及。肾问质细胞。该研究进一步显示。 ＣＴＧＦ与ＴＧＦ一［３１是促进糖尿病。肾病进展的重要 因素。体外实验表明．稳定表达ＣＴＧＦ蛋白的肾间 质成纤维细胞株能够直接诱导成纤维细胞转化成 肌成纤维细胞．并增加细胞外基质Ⅲ型胶原ｍＲＮＡ 的水平。同样在ｄｂ／ｄｂＤＮ小鼠和链脲佐菌素腹腔 灌注诱导的ＤＮ大鼠．观察其肾小球和近曲小管． 均发现ＣＴＧＦ ｍＲＮＡ和蛋白表达明显增加ｌ】４ ｌＷａｈａｂ等［１５］发现正常的大鼠在诱导出现ＤＮ的１４ 天后，其肾小球中的ＣＴＧＦ蛋白表达有所增加．同 时观察到随着时间延长．ＣＴＧＦ在肾小球的表达进 一步增加 同时在ＤＮ患者的肾活检标本的肾小球 中检测到ＣＴＧＦ蛋白．然而在正常大鼠的肾小球或 正常人的肾小球标本中未检测到ＣＴＧＦ蛋白．其后 又发现ＣＴＧＦ能介导ＴＧＦ—Ｂ１对人肾ＭＣ的促肥 大效应，这可能是早期ＤＮ肾脏肥大的机￣Ｉ］［１６１ Ｉｔ０ 等旧研究发现，ＣＴＧＦ对肾问质纤维化具有重要作 用，其对ＤＮ患者进行肾活检．发现肾小管萎缩明 显的区域和问质纤维化的区域ＣＴＧＦ ｍＲＮＡ表达 明显增加．其表达高低与肾脏纤维化程度相关 ・１１９２・ 江西医药２０１４年１１月第４９卷第１ｌ期ｌｉａｍ￣ｘｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｍａ１．Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２０１４．Ｖｏ１ ４９．Ｎｏ１１ 冬虫夏草（ＣＳ）是一种富含氨基酸、多糖、甘露 ［８］Ｗａｈａｂ ＮＡ，Ｓｃｈａｅｆｅｒ Ｌ，Ｗｅｓｔｏｎ ＢＳ，ｅｔ ａ１．Ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ 醇及多种微量元素的名贵中药 ＣＳ的药理作用主 ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ一１，ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｂｅｔａ ａｎｄ ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ 要表现在：减轻肾间质区炎症细胞浸润、抑制免疫 ｔｉｓｓｕｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｔａｇｅｓ ｏｆ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｉｎｔｅｒｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｒｏｌｅｓ ｉｎ ｍｅｓａｎｇｉａｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｓｔｉｍｕｌｉ 复合物在基底膜沉积、调节机体的免疫功能、促进 ［Ｊｊ．Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ，２００５，４８（１２）：２６５０－６０． 肾小管上皮细胞修复、抑制肾小球系膜细胞的增 （９】李冰，王静凤，杨延村，等．蛹虫草对糖尿病大鼠肾脏病程发展的 殖。有研究表明，人工虫草可降低肾脏疾病大鼠尿 抑制作用阴．２０１１，３２（１５）：２５５—２５９． ＮＡＧ酶和溶菌酶，提高肌酐清除能力，能有效的降 ［１Ｏ［Ｗｏｇｅｎｓｅｎｌ，ＮｉｅｌｓｅｎＣＢ，Ｈｉ０ｎｈＰ，ｅｔ ａ１．Ｕｎｄｅｒ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｒｅｎｌ— 低尿素氮及血肌酐水平．减轻内生肌酐清除率的 ｃｐｒｏｍｏｔｅｒ，ｌｏｃａｌｌｙ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｂｅｔａｌ ｉｎ— ｄｕｃｅｓ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｉｒｘ ｉｎ ｔｒａｎｓ 下降．减少尿蛋白的产生．对于大量尿蛋白和高脂 ｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｄｉａｂｅｔｅｓ，１９９９，４８（１）：１８２－１９２． 血症导致的肾小球滤过膜通透性增加．血液凝固 【ｌ１】周青，王冬芽，郭兵，等．糖尿病肾病大鼠肾组织ＶＥＧＦ及ＴＧＦ一 性增加等均有良好的影响【１ 。但是，ＣＳ治疗糖尿 １３１的动态表达及意义［Ｊ】．江西医药，２００８，４３（１）：１３—１６． 病肾病的确切机制尚不明了。本研究结果揭示，ＣＳ ［１２】陈小辉，陈红，钟爱民，等．转化生长因子ｐｌ和ｄ一平滑肌肌动 治疗后ＤＮ大鼠肾病病理较未治疗者明显减轻．同 蛋白在肾间质纤维化小鼠肾组织的表达【Ｊ】．江西医药，２０１２： ４７：２：１１０—１１２． 时，治疗组ＴＧＦ一１３１、ＣＴＧＦ蛋白表达水平显著下 【１３］Ｈａ Ｈ，Ｙｕ ＭＲ，Ｋｉｍ ＫＨ．Ｍｄａｔｉｏｎｉｎ ａｎｄ ｔａｎｒｉｎｅ ｒｅｄｕｃｅ ｅａｒｌｙ 降，这提示ＣＳ治疗糖尿病肾病、延缓肾脏纤维化 ｇｌｏｍｅｒｒｕｌｏｐａｔｈｙ ｉｎ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒａｔ［Ｊ］．Ｆｒｅｅ Ｒａｄｉｃ Ｂｉｏｌ Ｍｅｄ，１９９９；２６： 的机制可能是通过下调ＴＧＦ—Ｂｌ、ＣＴＧＦ的蛋白表 ９４４—９５０． 达．进而可能通过减少细胞外基质的沉积最终实 ［１４］Ｗａｈａｂｎａ，ＹｅｖｄｏｋｉｍｏｖａＮ，ＷｅｓｔｏｎＢ，ｅｔ ａ１．Ｒｏｌｅ ｏｆ ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ ｔｉｓ— 验减轻。肾脏纤维化过程 ｓｕｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｓｉｓ ｏｆ ｄｉｂａｅｔｉｃ ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ［Ｊ］． 参考文献 Ｂｉｃｃｈｅｍ，２００１，３５９（ｐｔ１）：７７—８７． ［１５］Ｗａｈａｂ ＮＡ，Ｗｅｓｔｏｎ ＢＳ，Ｒｏｂｅｔｓ Ｔ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ ｔｉｓｓｕｅ ｇｒｏｗｔｈ 【ｌ】董凤芹，蔡卫明，李红，等．肾纤维化发病机制的研究进展［Ｊ］．国 ｆａｃｔｏｒ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍｅｓａｎｇｉａｌ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ：ｒｏｌｅ ｉｎ ｃｅｌｌｕｌａｒ 外医学泌外系统分册，２００３．２３（４）：４５７—４５９． ［２１￣１春艳，刘佳．糖尿病。肾病的发病机制及治疗［Ｊ】．国际内分泌代 ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙ［Ｊ］．Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｎｅｐｈｒｏｌ，２００２，１３：２４３７—４２４５． 谢杂志，２０１１，３１（２）：８４—８６． ［１６］Ｍｃｌｅｎｎａｎ ＳＶ，Ｗａｎｇ ＸＹ，Ｍｏｒｅｎｏ Ｖ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ ｔｉｓｓｕｅ ｒｇｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｍｅｄｉａｔｅｓ ｈｉｇｈ ｕｃｏｓｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｍａｔｉｒｘ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ［３】黄海长，李惊子，王海燕．结缔组织因子诱导肾成纤维细胞转化 ｔｈｒｏｕＩｇｈ ｔｉｓｓｕｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｍａｔｉｒｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ｔｙｐｅ １；ｉｍｐｌｉｃａ— 成肌纤维细胞［ＪＪ．科学通报，２００２，４７（１）：３７—４０． ｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ［Ｊ］．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，２００４，１４５：５６４６— ［４】刘丽秋，岳少，等．冬虫夏草对肾小球硬化大鼠肾组织硬化因子一 ５６５５． １，２ｍＲＮＡ表达的影响ｆＪ］．肾脏病与透析肾移植杂志，２００４，１３ 【１７１Ｉｔｏ Ｙ，Ｇｏｌｄｓｃｈｍｅｄｉｎｇ Ｒ，Ｂｅｎｄｅ ＲＪ，ｅｔ ａ１．Ｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ （５）：４５７—４５８． ｔｉｓｓｕｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ［５］Ｃｒｅａｎ ＪＫＧ Ｆｉｎａｌｙ Ｄ ＭＵＲＰＨＹ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｐ４２／ｐ４４ＭＡＰＫ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ Ｂ ｉｎ ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ ｔｉｓｓｕｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｉｎｄｕｃｅｄ ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｎｅｐｈｒｉｔｉｓ［Ｊ］．Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｎｅｐｒｏｌ，２００１，１２：４７２—４８４． ［１８】王筱霞，吴兆龙．冬虫夏草对离体人肾小球系膜增殖的影响ＩＪＩ． ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｉｒｘ ｐｒｏｔｉｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，ｃｅｌｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ，ａｎｄ ａｃｔｉｏｎ－ 中国临床药学杂志，２００１，１０（１）：２４—２６． ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔａｌ ｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｍｅｓａｎｇｉａｌ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｊ Ｂｉｏｌ 『１９１戴春笋，刘志红．冬虫夏草防治环孢素Ａ肾毒性的体内与体外 Ｃｈｅｍ，２００２，（４６）：４４１８７－４４１９４． 实验研究咖．肾脏病与透析肾移植杂志，２０００，９（４）：３２２—３２８． ［６］Ｌｅｌｌｙ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｃｅｌｌ ｓｐｅｃｉｉｆｃ ｒｅｇｕｌａｔｉｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃ—ｍｙｃ ｇｅｎｅ ｂｙ ｍｉｔｏｇｅｎ ［２０】马丽娟，杜国利，吕文魁，等．氯沙坦对２型糖尿病肾病大鼠肾 ａｎｄ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｄｅｒｉｖｅｄ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ，１９８８，３５：６０３． 脏ＴＧＦ—Ｂ１、ＣＤ６８、和ＭＣＰ一１表达的影响【Ｊ］．中国病理生理杂 ［７］Ｂｏｒｄｅｒ ＷＡ，Ｎｏｂｌｅ ＮＡ．Ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｔｈａｔ ＴＧＦ－ｂｅｔａ ｓｈｏｕｌｄ ｂｅ ａ ｔｈｅｒａ－ 志，２０１２，２８（５）：９４７—９５０． ｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔ ｉｎ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ［Ｊ１＿Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ，１９９８，５４（４）： （收稿日期２０１４—１０—１８） １３９０－１ ３９１ 第二次江西省高血压学术会议的会议在南昌召开 ２０１４年１Ｏ月１８日，江西省内１６０多名从事高血压防 行了学术报告。之后进行病例讨论和现在问答，气氛十分热 治工作的医务人员，相聚在南昌，参加第二次江西省高血压 烈。 学术会议暨健康血压中国行（南昌站）活动。 会议期间，还召开江西省医学会心血管病学分会高血 依据办短会的精神，本次学术会议的时间仅为一天，会 压学组成员第三次工作会议，总结近２年来学组的工作，提 议日程安排得十分紧凑。赵连友教授、初少莉教授、苏海教 出了新的行动计划。 授、魏云峰教授、吴清华教授、李萍教授、曹平良教授分别进
