动物医学进展。２０１０，３１（５）：９０—９３ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ 嗜水气单胞菌检测技术研究进展 单晓枫 ，郭伟生 ，陈 畅 ，钱爱东卜 （１．吉林农业大学动物科学技术学院，吉林长春１３０１１８；２．铁岭出入境检验检疫局，辽宁铁岭Ｉ１２０００） 摘要：嗜水气单胞茵是重要的水生动物病原茵，也是重要的人兽共患病原菌。近年来，其检测技术取 得了迅速发展。论文对嗜水气单胞茵的检测技术进行了综述，并对其检测新策略进行了展望。 关键词：嗜水气单胞茵；检测技术 中图分类号：￥８５２．６ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００７—５０３８（２０１０）０５—００９０—０４ 嗜水气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）在分 证。 类上属于弧菌科气单胞菌属中嗜温有动力单胞菌。 在生化反应原理的基础上研制出的ＡＰＩ快速 该菌为革兰阴性短杆菌，两端钝圆，直或略弯，大小 反应板和细菌鉴定仪，大大缩短的检测时间。其只 为０．３ ｍ～１．０ ｍ×１．０ ｍ～３．５ ｍ，菌细胞多 需将培养的分离纯化细菌经一定比例的稀释，加入 数单个存在，少数双个排列，通常在菌体的一端有一 试剂板中的各个测试孑Ｌ中，通过１６ ｈ～１８ ｈ的培养， 根鞭毛，部分菌株有侧鞭毛，无荚膜，不形成芽孢，微 计算机可通过每个测试孔的生化反应所产生的颜色 需氧，最适生长温度２８℃，对热的抵抗力较差。嗜 不同进行分析，而鉴定出细菌的种属。李圆圆等［７ 水气单胞菌广泛存在于淡水、污水、淤泥及土壤中。 用ＡＴＢ细菌鉴定仪快速鉴定出鲟源致病性嗜水气 它不仅能引发多种水生动物的传染病，而且可以感 单胞菌Ｘ１，简化了检测程序，缩短了反应时间。 染爬行类、两栖类和鸟类［１ ］。近年来，大量资料证 ２免疫学技术 明，嗜水气单胞菌亦可引发人类的食物中毒、败血 抗原与相应抗体在体内体外均能发生特异性结 症、脑膜炎、蜂窝组织炎及伤口感染，影响食物安全， 合反应，在体外进行的抗原抗体反应称为免疫学技 并且是免疫抑制病人和肝病患者的机会致病菌。因 术，是建立免疫学检测技术的基础。由于免疫学反 此，嗜水气单胞菌已成为人一兽一鱼共患病病原菌 。］。 应具有高度特异性，已广泛应用于病原微生物的检 本文拟对嗜水气单胞菌的检测方法做一介绍，为进 测。 一步深入研究提供参考。 ２．１酶联免疫吸附试验 １ 常规生化鉴定方法 酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）方法是将抗原抗体 传统生化试验是依据细菌对营养物质分解能力 的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合的 不一致，代谢产物也不尽相同，而对细菌进行鉴定。 一种免疫学试验技术。 据此，致病性嗜水气单胞菌的检测已制定了国家标 Ｓｈｕｎｊｉ Ｋ等［８ 建立了嗜水气单胞菌溶血素的 准［５］：首先进行细菌的分离，细菌的鉴定包括了氧化 ＥＬＩＳＡ检测方法，可快速诊断人由致病性嗜水气单 酶试验、ＡＨＭ鉴别培养、吲哚试验及葡萄糖、蔗糖、 胞菌引发的腹泻型痢疾；在水产动物患病的诊断上， 阿拉伯糖、七叶苷、水杨苷等五种糖的发酵试验，并 钱冬等Ｉｇ 建立双抗夹心ＥＬＩＳＡ检测嗜水气单胞菌， 通过脱脂奶平板、斑点酶联免疫试验鉴定其致病性。 可检测出９．７７×ｌ０。ｃｆｕ／ｍＬ（病料），且与温和气单 而在细菌分离中，对污染材料，选用ＲＳ选择培养基 胞菌、点状气单胞菌无交叉反应，检测时间短，整个 的效果更加明显［６］。尽管此标准简化了方法、减少 过程只需１．５ ｈ；此外，Ｓｗａｉｎ Ｐ等ｎ０］也用ＥＬＩＳＡ对 了时间，但是，因为许多菌株在生化试验结果存在差 嗜水气单胞菌及其他细菌进行了检测，取得了良好 异，部分嗜水气单胞菌的生化反应结果与标准株结 的效果。 果并不相符，因此需要做大量的生化试验进一步验 与常规ＥＬＩＳＡ相似的Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ是２Ｏ世纪 收稿日期：２００９—１２—０１ 基金项目：吉林农业大学青年启动基金（２００９００４） 作者简介：单晓枫（１９７７一），男，吉林长春人，实验师，博士，主要从事水产微生物与免疫学研究。＊通讯作者 单晓枫等：嗜水气单胞菌检测技术研究进展 ９１ ８Ｏ年代初发展的一项免疫学技术，与ＥＬＩＳＡ过程 相似，只是将固相载体变为纤维素膜（ＮＣＭ）。 陈怀青等口妇应用Ｄｏｔ—ＥＬＩＳＡ检测嗜水气单胞菌 ＨＥＣ毒素，可检测的最低水平为９５ ｍｇ／ｍＬ，比溶 蛋白的金黄色葡萄球菌，标记了嗜水气单胞菌的高 免血清，制备ＳＰＡ诊断液，建立了检测嗜水气单胞 菌的ＳＰＡ—ＣＯＡ，比玻片凝集试验敏感性高２５倍～ ５Ｏ倍，特异性强，重复性好，操作简便快速。在此基 础上，马家好等口 研发了以ＳＰＡ—ＣＯＡ为主要检测 血试验的敏感性高４Ｏ倍；李焕荣等＿＿１ 用Ｄｏｔ— ＥＬＩＳＡ快速地检测了锦鲤致病性嗜水气单胞菌的 手段的鱼病诊断箱，可以诊断出包括嗜水气单胞菌 为病原的多种鱼类疾病，再次体现了其快速、特异、 敏感、操作简便等优点。 胞外蛋白酶并证明了该菌株的致病性。 随着免疫学技术的发展，ＥＬＩＳＡ的方法也逐渐 改进，而近几年发展起来的生物素一亲和素酶联免疫 吸附试验（ＢＡ—ＥＬＩＳＡ），与常规ＥＬＩＳＡ相比，具有 灵敏度更高、特异性更强、稳定性更好等优点。胡太 雁等＿１。 以中华鳖的致病性嗜水气单胞菌Ｔ０６０８株 为抗原制备高免血清，采用活化生物素标记兔ＩｇＧ， 建立的双抗体夹心ＢＡ—ＥＬＩＳＡ，该方法比常规 ＥＬＩＳＡ敏感１６倍，且与鱼类的气单胞菌、拟态弧菌 等无特异性反应，整个检测过程可在４ ｈ内完成，可 较好的应用于中华鳖嗜水气单胞菌快速检测。 ＥＬＩＳＡ方法具有简单、灵敏、快速、特异等优 点，适用于嗜水气单胞菌的快速检测，但ＥＬＩＳＡ在 操作过程中，影响因素较多，假阳性率较高，因此，仍 需要其他方法辅助检测。 ２．２免疫荧光技术 免疫荧光技术（ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ） 是将血清抗体以化学法与荧光素结合后，仍保留其 免疫特性，当带有荧光素的抗体与抗原结合后，则在 抗原的部位有荧光抗体的沉着，在荧光显微镜下观 察，可以看到发亮的荧光。荧光素可以用来标记抗 体，也可以用来标记抗原，但由于抗原结构和理化性 质的多样性，标记条件不易控制，所以多用荧光素标 记抗体，通常称为荧光抗体技术。荧光抗体技术分 为直接法和间接法两种。 陈昌福口 用直接荧光抗体法和细菌培养法对 中华鳖体内的嗜水气单胞菌进行检测时发现，用直 接荧光抗体法测定中华鳖各种器官中的细菌比培养 法的检出数量高出近１００倍，检出率较高，对冷冻保 存的标本也适用；李卫军 应用间接荧光抗体法检 测人工感染鳟鱼体内的嗜水气单胞菌，对杀鲑气单 胞菌、爱德华菌、荧光假单胞菌不发生交叉反应，且 时间短，操作简便。 ２．３ ＳＰＡ协同凝集试验（ＳＰＡ－Ｃ０Ａ） 金黄色葡萄球菌Ａ蛋白（ＳＰＡ）是细胞壁抗原 的主要成分，能与ＩｇＧ的Ｆｃ片段非特异性结合，但 不影响Ｆａｂ片段的活性，所以当带有ＳＰＡ的金黄色 葡萄球菌与抗体混合，再加入适量的相应抗原，结果 出现凝集反应更易于观察。李学勤等 用富含Ａ ２．４其他免疫学技术 血凝抑制试验（ＨＩ）广泛应用于具有血凝特性 的病毒的检测，而对有血凝特性的细菌研究较少。 姜正前等［１ ］运用ＨＩ试验检测嗜水气单胞菌，其试 验孔中的血凝现象能被抗嗜水气单胞菌阳性血清所 抑制，而对照孑Ｌ中加入的抗嗜水气单胞菌阴性血清 却不能抑制血凝现象，这说明嗜水气单胞菌也可以 用ＨＩ检测。 氢离子敏感高分子，因其独特的ｐＨ敏感性质 而在免疫分析中得到应用，一次高分子为载体的ｐＨ 敏感相分离免疫分析由于采用均相免疫反应和异相 分离，克服了均相和异相二种免疫分析模式的局限 性，与温度敏感高分子相比，又可以在３７℃进行免 疫反应，提高了反应速度和效率。林鹏等 以ｐＨ 敏感高分子为载体，建立了荧光免疫分析嗜水气单 胞菌膜蛋白（ＯＭＰ）的新方法。该方法同ＥＵＳＡ相 比较，其缩短了分析时间，灵敏度与ＥＬＩＳＡ相当。 ３聚合酶链反应 聚合酶链反应（ＰＣＲ）因其具有快速、简便、灵敏 的特点，已广泛应用于嗜水气单胞菌的检测，并可以 通过检测多种基因进行，如１６ Ｓ ｒＤＮＡ、溶血素基 因、气溶素基因、丝氨酸蛋白酶基因等等口 。 ３．１ 常规ＰＣＲ 常规ＰＣＲ已知待扩增目的片段序列，据此序列 设计一对相应的引物，其所依据的基因序列因研究 者不同而不同。其中最为常见为１６ Ｓ ｒＲＮＡ基因 序列，余晓丽等 建立了快速检测了鲢鱼嗜水气单 胞菌的ＰＣＲ方法，且特异性好、敏感性高、最低检测 量为１Ｏ ｐｇ嗜水气单胞菌基因总ＤＮＡ；邓先余等ｌ２ ］ 利用嗜水气单胞菌的１６ Ｓ～２３ Ｓ ｒＤＮＡ间区的序 列，设计出嗜水气单胞菌特异的ＰＣＲ引物，建立了 检测嗜水气单胞菌的ＰＣＲ方法，并对自来水、饮用 水、珠江水、养殖池水等水样进行了检测；Ｘｉａ Ｃ 等＿２ 依据８一溶血素基因建立的ＰＣＲ方法，与温和 气单胞菌、鳗弧菌、荧光假单胞菌没有交叉反应，敏 感性高。虽然常规ＰＣＲ有灵敏、快速的优点，但对 于一些致病性嗜水气单胞菌，存在漏检的可能性和 ９２ 动物医学进展２０１０年第３１卷第５期（总第２０３期） 污染造成的假阳性，因此一些技术更为先进的ＰＣＲ 应运而生。 ３．２多重ＰＣＲ ＬＡＭＰ扩增致病性嗜水气单胞菌具有较强特异性， 其灵敏度为１．４ Ｌ～１４ Ｌ。高于ＰＣＲ法，适用于 没有ＰＣＲ仪的基层实验室，具有良好的应用前景。 储卫华等ｌ＿２胡采用ＰＣＲ扩增特异性１６ Ｓ ｒＤＮＡ 和溶血素基因检测致病性嗜水气单胞菌，已很好的 将其与非致病性嗜水气单胞菌相区别，且同细菌生 化鉴定和溶血素生物学检测所得结果符合率为 ９７．２ ，但这只能检测产溶血素的致病性嗜水气单 胞菌；郭松林等＿２ 针对嗜水气单胞菌的溶血素和外 ５ 结语 嗜水气单胞菌广泛分布于环境中，对人、畜、鱼 的健康都构成威胁，是典型的人一兽一鱼共患病病原 菌。对嗜水气单胞菌的检测，国内外已经具有可借 鉴的技术，因此如何快速、准确、方便的对其检测，将 膜蛋白基因序列为目的基因，采用双重ＰＣＲ法快速 检测了欧鳗鲡的嗜水气单胞菌。饶静静等口 分别 针对嗜水气单胞菌气溶素基因、溶血素基因、１６ Ｓ ｒＲＮＡ和气溶素基因、１６ Ｓ ｒＲＮＡ、丝氨酸蛋白酶基 因建立的三重ＰＣＲ，将致病性嗜水气单胞菌的检测 提高到一个新的台阶。 ３．３免疫捕获ＰＣＲ 免疫捕获ＰＣＲ（ｉｍｍｕｎｏ－ｃａｐｔｕｒｅ ＰＣＲ）是一种快 速的病原菌检测方法，依据病原菌菌体抗原与抗体特 异性结合的免疫学原理，将抗原包被于磁珠或者ＰＣＲ 壁管上，富集标本中病原菌，在进行ＰＣＲ试验，即可 检测目的病原菌。Ｐｅｎｇ Ｘ Ｘ等［３ 以１６ Ｓ ｒＲＮＡ保守 区做为靶目标，设计引物５ＬＡＡＡＣＴＣＡＡＡＧＧＡＡｒ— ＴＧＡＣ一３ 和５ 一ＧＡＣＧＧＧＣＧＧＴＧＴＧＴＡＣＡＡ一３ ，扩增 出约５００ ｂｐ的产物，其快速、敏感、重复性好，为检测 嗜水气单胞菌提供了一个新方法。 ３．４荧光定量ＰＣＲ 荧光定量ＰＣＲ（ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ＰＣＲ）为 近年来发展起来的技术，其利用了探针技术的高特 异性、ＰＣＲ对ＤＮＡ的高效扩增和光谱技术的敏感 性及定量特点，不仅克服常规ＰＣＲ定性检测的不 足，且具有直观、特异性强、敏感性高、重复性好和易 操作等优点。高建忠。。 。 基于ＴａｑＭａｎ探针建立的 荧光定量ＰＣＲ方法检测嗜水气单胞菌，与常规ＰＣＲ 法、细菌培养法比较，其检测的灵敏度可达 １２．５ ｃ｛ｕ／ｍＬ，且速度快，包括核酸提取整个检测时 间仅为３ ｈ，比常规ＰＣＲ和细菌培养法所需时间大 大缩短，并表现了很好的特异性。 ４环介导恒温基因扩增法 环介导恒温基因扩增法（ＬＡＭＰ）是日本学者 Ｎｏｔｏｍｉ Ｔ发明的一种基因恒温扩增新技术，具有灵 敏度高、特异性强、速度快、耗时短、等温操作、设备 简单、产物检测方便等特点，更适合基层实验室检测 病原使用ｌ＿３引。程天印等Ｌ３ 以嗜水气单胞菌气溶素 基因序列，设计一套引物，建立了针对致病性嗜水气 单胞菌环媒恒温基因扩增法检测技术，结果表明： 成为今后研发的方向；并且嗜水气单胞菌存在活的 非可培养（ＶＢＮＣ）状态，这就给其检测提出了严峻 的考验。随着对嗜水气单胞菌基因组研究的深入、 有关蛋白质谱研究的增多、科技的进一步发展，更准 确、更快捷、更方便的检测及分析技术将会更多的应 用于致病性嗜水气单胞菌的研究。 参考文献： ［１］ 张玉芬，亢喜刚，张秀军．嗜水气单胞菌研究进展［Ｊ］．安徽农业 科学，２００９，３７（２６）：１２３８９—１２３９０． Ｅ２］ Ｒｏｅｉｏ Ｃ，Ｍａｒｉａ Ａ，Ｓｉｌｖｉａ Ｖ，ｅｔ ａ１．Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｌａｔｅｒａｌ ｆｉａｇｅｌｌａｒ ｇｅｎｅ ｓｙｓｔｅｍ ｏｆ Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ ＡＨＺ３［Ｊ］．Ｂａｃ— ｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，２００６，１８８（３）：８５２—８６２． Ｅ３］游忠岚，陈嵩，王宇明．慢性重型肝炎并发嗜水气单胞菌败血 症１例ＥＪ］．第三军医大学学报，２００８，３０（３）：２０６． ［４］Ｒａｔｈｉｎａｓａｍｙ Ｓ，Ｔｈａｎｇａｖｅｌｕ Ｔ，Ｇｏｖｉｎａｄｈａｓａｍｙ Ｖ，ｅｔ ａ１．Ｏｃ— ｃｕｒｒｅｎｃｅ ｏｆ Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅ ｒｉｔｉｓ ａ— ｍｏｎｇ ｃｈｉｌｄｒｅｎ［Ｊ］．Ｉｎｄｉａｎ Ｊ Ｍｅｄ Ｒｅｓ，２００６，１２３：６１－６６． Ｅ５］ 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局．ＧＢ／Ｔ １８６５２２２００２致病性嗜水气单胞菌检验方法［Ｓ］．北京：中国标 准出版社，２００２． ［６］ 凌红丽，陆承平，陈怀青，等．嗜水气单胞菌选择培养基鉴别效 果的比较ＥＪ］．中国兽药杂志，１９９８，３２（４）：６－９． ［７］李圆圆，曹海鹏，何珊，等．鲟源致病性嗜水气单胞菌ｘ１的分 离鉴定与药敏特性研究［Ｊ］．微生物学通报，２００８，３５（８）：１１８６— １ｌ９１． ［８］ Ｓｈｕ￣ｉ Ｋ，Ａｋａｎｅ Ｋ，Ｔｓｕｔｏｍｕ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｅｎｚｙｍｅ—ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕ— ｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ ｆｏｒ Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ ｈｅｍｏｌｙｓｉｎｓ［Ｊ］． ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ 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Ｈ，Ｒａｈｍａｎ Ｈ Ｍ，ｅｔ ａ１．ＰＣＲ ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉ— 兽医学报，１９９７，１７（１）：３３ ３５． ｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｈ ｈａｅｍｏｌｙｓｉｎ ｇｅｎｅ ｏｆ Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ ［１７］马家好，杨振国，李学勤，等．淡水养殖鱼类主要细菌性传染病 ｆｒｏｍ ｆｒｅｓｈｗａｔｅｒ ｆｉｓｈｅｓ ｉｎ Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．Ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ，２００４，２２９： 快速诊断的研究～鱼病诊断箱的应用试验［Ｊ］．黑龙江畜牧兽 ４５—５３． 医，１９９９（８）：４ ５． ［２８］储卫华，陆承平．ＰＣＲ扩增特异性１６Ｓ ｒＤＮＡ和溶血素基因 ［１８］姜正前，余建国．一株嗜水气单胞菌的血凝（ＨＡ）与血凝抑制 检测致病性嗜水气单胞菌［Ｊ］．水产学报，２００５，２９（１）：７９— （ＨＩ）试验［Ｊ１．黑龙江畜牧兽医，２００５（１１）：４９． ８２． ［１９］林鹏，冯建军，邹志华，等．ｐＨ控制相转变分离２荧光免疫 ［２９１郭松林，关瑞章，柳佩娟．双重ＰＣＲ法快速检测欧鳗鲡嗜水气 分析嗜水气单胞菌外膜蛋白［Ｊ］．分析化学，２００８。３６（５）：６９５— 单胞菌［Ｊ］．集美大学学报：自然科学版，２００７，１２（４）：２９４— ６９８． ３００． ［２Ｏ］Ｋｏｎｇ Ｒ Ｙ Ｃ，Ｌｅｅ Ｓ Ｋ Ｙ，Ｌａｗ ＴＰ，ｅｔ ａ１．Ｒａｐｉｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ［３０１饶静静，李寿崧，黄克和，等．嗜水气单胞菌多重ＰＣＲ检测方 ｓｉｘ ｔｙｐｅｓ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ ｉｎ ｍａｉｎｓ ｗａｔｅｒｓ ｂｙ ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ 法的建立［Ｊ］．中国水产科学，２００７，１４（５）：７４９ ７５５． ＰＣＲ［Ｊ］．Ｗａｔｅｒ Ｒｅｓ，２００２，３６：２８０２—２８１２． ［３１］王远微，汤承，于学辉，等．三重ＰＣＲ检测鱼类致病性嗜水 ［２１］卢强，任瑞义，王文东，等．致病性嗜水气单胞菌气溶素基因 气单胞菌［Ｊ］．微生物学报，２００８，４８（７）：９４７—９５１． ＰＣＲ检测方法的建立［Ｊ］．中国兽医学报，２００１，２１（４）：３４７— ［３２］Ｐｅｎｇ Ｘ Ｘ，Ｚｈａｎｇ Ｊ Ｙ，Ｗａｎｇ Ｓ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｉｍｍｕｎｏ—ｃａｐｔｕｒｅ ＰＣＲ ３４９． ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ口］．Ｊ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｍｅｔｈ— ［２２］Ｓｈａｎｎｏｎ Ｋ Ｅ，Ｌｅｅ Ｄ Ｙ，Ｔ Ｔｒｅｖｏｒｓ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｄｓ，２００２，４９：３３５－３３８． ｒｅａｌ ｔｉｍｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｂａｃｔｅ—－ ［３３］高建忠．嗜水气单胞菌的检测方法比较［Ｊ］．安徽农业科学， ｒｉａｌ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ ｄｕｒｉｎｇ ｍｕｎｉｃｉｐａｌ ｗａｓｔｅｗａｔｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｓｅｉ ２００８，３６（３１）：１３５５５—１３５５６，１３５７７． Ｔｏｔａｌ Ｅｎｖｉｒｏｎ，２００７，３８２（１）：１２卜１２９． ［３４］高建忠，魏雪，童琰，等．ＭＧＢ探针实时定量ＰＣＲ检测致 ［２３］Ｗａｎｇ Ｇ，Ｃｌａｒｋ Ｃ Ｇ，Ｌｉｕ Ｃ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｔｅｃｔ ｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃ— 病性嗜水气单胞菌［Ｊ］．安徽农业科学，２００９，３７（１９）：８９１１— ｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｈｅｍｏｌｙｓｉｎ ｇｅｎｅｓ ｉｎ Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ ８９１３． ａｎｄ Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｓｏｂｒｉａ ｂｙ ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ ＰＣＲ［Ｊ］．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｅｒｏｂｉｏｌ， ［３５］ Ｎｏｔｏｍｉ Ｔ．Ｌｏｏｐ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｎｉｐ— ２００３，４ｌ（３）：】０４８一】０５４． ｐｏｎ Ｒｉｎｓｈｏ，２００７，６５（５）：９５７—９６１． ［２４］Ｅｍｅｋｄａｓ Ｇ，Ａｓｉａｎ Ｇ，Ｔｅｚｃａｎ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｆｒｅ— ［３６］程天印，刘洵，常小斌．嗜水气单胞菌Ｌａｍｐ检测方法的建 ｑｕｅｎｃｙ，ａｎｔｉｍｉｅｒｏｂｉａｌ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ，ａｎｄ ｇｅｎｏｔｙｐｉｃ ｄｉｓｅｒｉｍｉ— 立及应用［Ｊ］＿中国兽医科学，２００７，３７（１２）：１０１３ １０１６． ｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｓｔｒａｉｎｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｍｕｎｉｃｉｐａｌｌｙ ｔｒｅａｔｅｄ ｔａｐ ｗａｔｅｒ ｓａｍｐｌｅｓ ｂｙ ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ＡＰ—ＰＣＲ［Ｊ］．Ｉｎｔ Ｊ Ｆｏｏｄ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｎ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ ＳＨＡＮ Ｘｉａｏ—ｆｅｎｇ ，ＧＵＯ Ｗｅｉ—ｓｈｅｎｇ ，ＣＨＥＮ Ｃｈａｎｇ ，ＱＩＡＮ Ａｉ—ｄｏｎｇ （１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆＡｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＪｉｌｉｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ，Ｊｉｌｉｎ，１３Ｏ１１８，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｔｉｅｌｉｎｇ Ｅｎｔｒｙ￣Ｅｘｉｔ Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ Ｂｕｒｅａｕ，Ｔｉｅｌｉｎｇ，Ｌｉａｏｎｉｎｇ，１ １ ２０００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ ｉｓ ｔｈｅ ｃａｕｓａｔｉｖｅ ａｇｅｎｔ ｏｆ ｆａｔａｌ ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ ｉｎ ｆｉｓｈ ａｎｄ ｃａｎ ｃａｕｓｅ ａ ｗｉｄｅ ｖａｒｉｅｔｙ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ｉｎ ｒｅｃｅｎｔ ｙｅａｒｓ，ｉｔｓ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ ｈａｖｅ ａ ｒａｐｉｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｔｈｅ ｐａｐｅｒ ｒｅｖｉｅｗｅｄ ｔｈｅ ｒｅｃｅｎｔ ａｄｖａｎｃｅ ｉｎ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ ａｎｄ ｌｏｏｋｓ ｆｏｒｗａｒｄ ｔｏ ｔｈｅ ｎｅｗ ｓｔｒａｔｅｇｙ ｏｆ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ＡＰｒｏｍｏｎａｓ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ；ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ
