肾消康对糖尿病大鼠肾组织基因Gna12表达的影响.

栽蚤葬灶躁蚤灶允燥怎则灶葬造燥枣栽则葬凿蚤贼蚤燥灶葬造悦澡蚤灶藻泽藻酝藻凿蚤糟蚤灶藻469肾消康对糖尿病大鼠肾组织基因Gna12表达的影响*

乔

羽，解

颖，白玉宾，王兵，陈飞，刘春红，柳成刚，常佳怡，高恩宇，韩洁茹，姜德友

150040）

（黑龙江中医药大学基础医学院，哈尔滨

摘要：[目的]观察中药复方肾消康对糖尿病肾病大鼠的防治作用及对肾脏基因表达的影响，探讨糖尿病肾病（DN）的发病机制，揭示中药复方肾消康防治DN的作用机制，筛选药效作用靶点，为临床推广应用提供科学依据。[方法]本实验采用链脲佐菌素（STZ）加高热量饮食建立糖尿病大鼠肾脏损伤模型。运用放免、生化、光镜、电镜及美国是通过聚类分析寻找和DN有重要相关性的基因，并进一步采用实时荧光定量RT-PCR法做验证实验研究。[结果]Rat2302.0基因表达谱芯片检测糖尿病大鼠肾脏基因的表达，Gna12是筛选出的肾脏差异表达基因和药效靶点之一，并对该基因做荧光定量RT-PCR测序分析。基因功能分析表明，在糖尿病状态下，Gna12表达下调，与糖尿病肾脏损伤有重要相关性，而经肾消康治疗后大鼠肾脏组织中Gna12表达上调，可见肾消康对Gna12基因表达具有良性调节作用，其作用机制还有待于进一步研究。

关键词：肾消康；糖尿病；肾脏损伤；基因表达谱；鸟嘌呤核苷酸结合蛋白琢12中图分类号：R587.1

文献标识码：A

文章编号：1672-1519（2012）05-0469-06

鸟嘌呤核苷酸结合蛋白琢12（Gna12），在糖尿病大鼠肾脏表达下调，肾消康中剂量组表达上调。[结论]应用AffymetrixAffymetrix公司的基因表达谱芯片、逆转录聚合酶链反应法（RT原PCR）等先进检测手段和方法，观察了多项指标，尤其

糖尿病肾病（DN）是糖尿病的一种严重的微血管并发症，其主要病理改变为肾小球肥大，基底膜增厚，以及系膜区基质增加，导致弥漫性或结节性肾小球硬化。临床上早期表现为尿中排出微量白蛋白，继之出现临床蛋白尿，最后进展为慢性肾功能不全。近年来随着其发病率和病死率的提高，DN严重地威胁着人类的健康，影响患者的生存质量，因此，对DN的研究已成为世界性医学攻关课题。由于该病的发病机制较复杂，临床尚无理想药物，而中医药在防治DN方面颇具优势，为此笔者借助分子生物学研究方法，采用基因芯片技术，利用目前国际学术界公认的美国Affymetrix公司生产的Rat2302.0基因表达谱芯片，首先进行差异基因筛选，然后进一步用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR）检测，寻找DN相关基因，探讨DN病变机制，筛选药效靶点，阐释中药复方肾消康治疗DN的作用机制，为此笔者对链脲佐菌素（STZ）诱导DN大鼠的肾脏基因表达谱进行了研究。本文仅报告肾消康对

*基金项目：黑龙江省杰出青年科学基金课题项目（2070222）。作者简介：乔

羽（1983-），女，硕士，讲师，主要从事中医临

床基础研究。通讯作者：姜德友。

DN大鼠肾脏组织基因鸟嘌呤核苷酸结合蛋白琢12

（Gna12）表达的影响。

1基因芯片实验1.1主要试剂、药品和仪器链脲佐菌素（STZ）为Calbiochem公司产品；肾消康制成浸膏，由黑龙江中医药大学附属第一医院制剂室制备，-20益的冰箱保存，使用前加温至37益。有关芯片检测试剂及仪器，均为上海生物芯片有限公司制备，包括AffymetrixGenechipScanner2.0、AffymetrixFluidicsStation450、AffymetrixGenechipHybridizationOven0等。1.2动物造模及分组Wistar大鼠120只，雄性，体质量180~210g（由哈尔滨医科大学实验中心提供），合格证号：P00102004，分笼饲养，每笼饲养7只，室温（18依2）益，相对湿度50%耀60%，通风良好，每日光照12h，自由摄食、饮水。适应性喂养1周后，随机选取10只作为空白对照组，以普通饲料喂养，经左下腹注射柠檬酸缓冲液25mg/kg（pH4.4），其余大鼠称质量，以25mg/kgSTZ左下腹腔注射，每日上午注射1次，连续5d。注射前12h禁食，不禁水。注射后1h，大鼠自由饮水、进食。造模1周后测血糖。血糖值在16.7mmol以上的大鼠共50只，再随机分为模型组、西药对照组、肾消康高、中、低治疗组，各组均10只。各组均喂以高热量饲料（1豫胆固醇、10豫猪油、10豫蛋黄粉、1豫蔗糖、78豫为基础饲

470天津中医药

栽蚤葬灶躁蚤灶允燥怎则灶葬造燥枣栽则葬凿蚤贼蚤燥灶葬造悦澡蚤灶藻泽藻酝藻凿蚤糟蚤灶藻圆园12年10月第圆9卷第5期Oct援圆园12熏灾燥造援圆9晕燥援5料1.3）19给周药方，继续法喂养喂普养高通饲热料量7饲周料，共19喂周养后，26周随。机抽取各组大鼠进行病理检测，光镜、电镜下病理检测近似人类糖尿病慢性肾组织损伤的病理变化。空腹称质量，按大鼠的体表面积与成人剂量之间的换算关系计算给药量。肾消康治疗组给药量为0.79g/mL，每200g体质量每次给药2mL，每日灌胃1次，空白1.4组、标模型本采组集以等以量电生子理秤盐称水取灌每胃只。

大鼠体质量，禁食、水12h，摘眼球取血，分装不同试管，4益保存备检，以测肌酐、尿素氮等指标。乙醚麻醉后，常规固定180、消毒、铺布等处理，沿正中线切开腹壁，快速立即用益、预12冷h的生处理理过盐的水手冲术洗剪，冲刀洗摘后取在肾冰脏上、操称作质。量用将，右肾置于4豫多聚甲醛固定，供光镜观察及免疫组化实验使用；将1/3左肾置于2援5豫戊二醛中固定，以备制做电镜；将其余2/3左肾置于液氮中冻存以备提1.5取核统糖计核方酸法（RNA采用）使SPSS用。

18.0统计软件，计量资料采用均数依标准差（x依s）表示，组间比较采用单因素1.6方差1.6.1DN分血大析肌鼠，P<酐肾0.05、血脏损为尿素伤差氮的生异有统的变化化指计标学模型及意义病理。组变血化尿素氮BUN）水平明显升高，与空白组比较差异具有统计学意义（P<0.01），各治疗组较模型组有较大幅度降低P<0.01），其中西药对照组、肾消康高剂量组和中剂量组（P<0.01），肾消康低剂量组（P<0.05），各治疗组间比较差异无统计学意义（P>0.05）；血肌酐（SCr）模型组水平明显升高，与空白组比较差异具有统计学意义（P<0.01），各治疗组较模型组有较大幅度降低0.05P<0.01标降）低。）。

说，各明治疗组组肾消康可间使比较血肌差酐异、血无尿统素计氮学的生意义（化P>指表1各组血清Scr、BUN水平比较（n=10，x依s）

Tab.1

ComparisonofserumlevelsofScrandBUNinthree

groups（n=10，x依s）

组别Scr（滋mol/L）BUN(mmol/L)空白组107.19依13.216.33依1.14模型组162.66依17.06**15.78依3.95**西药对照组133.74依16.7

##高剂量组11.34依2.26##128.80依18.66##中剂量组121.44依22.48##10.95依0.97##低剂量组

123.9依21.37##10.52注：与空白组比较，**P<0.01；与模型组比较，11.78依#P<0.05依2.17##3.35#，##P<0.01。

1.6.2尿微量白蛋白、茁组大鼠尿微量白蛋白（Alb2-）微、茁球蛋白的变化模型排泄量明显高于空白组（P<0.012-）微，治疗组与球蛋白（茁模型2-MG组）比较，尿微量白蛋白、茁差异有统计学意义（P<0.012-微）球。提蛋白示排泄肾小量球明和显肾降小低管，的茁结构和功能受损，肾较2-好微的球保护蛋白作排用出。

量，说消明康其能对降肾低脏尿结微构量白蛋白及功能有、

表2各组24hAlb，茁2-MG水平比较（n=10，x依s）

Tab.2

ComparisonofAlband茁2-MGlevelsduring24hin

threegroups（n=10，x依s）

组别Alb（mg/24h）茁2空白组25.68依4.321.47-MG依（0.25mg/24h）模型组70.96依9.52**3.95依0.78**西药对照组40.25依9.83##高剂量组36.04依8.80##2.62中剂量组32.56依8.01##2.55依依0.79##低剂量组

33.52依7.86##依0.70##2.45依0.86##2.510.52##注：与空白组比较，**P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01。

1.6.3肾脏组织病理及超微结构变化光镜下观察，空白组：大鼠肾小球毛细血管基底膜厚薄均匀。近曲小管的上皮细胞较少，胞浆，管腔狭窄而不规则；远曲小管上皮细胞较多，胞浆伊红淡染，管腔宽而规则，见图1。模型组：肾小球系膜细胞增生，基质堆积明显，肾小球肥大，肾小球基底膜增厚，发生透明样改变，肾小球与囊壁粘连（渗出性肾小球硬化），小球分叶、分瓣明显（弥漫性肾小球硬化），趋向纤维化，见图2、图3。肾消康中剂量组：少数肾小球轻微的基底膜增厚，轻微的透明样变，部分肾小球囊壁增厚，少数肾小球粘连、有分叶状，有少数纤维增生，少数有局部系膜基质增生及轻度的肾小管扩张和上皮细胞脱落，见图4。

图1空白组肾脏HE染色图2模型组肾脏HE染色（光镜伊400）

（光镜伊400）

Fig.1KidneyofblankgroupFig.2KidneyofmodelgroupHEstaining(light伊400)

HEstaining(light伊400)

（（（圆园12年10月第圆9卷第5期Oct援圆园12熏灾燥造援圆9晕燥援5天津中医药

栽蚤葬灶躁蚤灶允燥怎则灶葬造燥枣栽则葬凿蚤贼蚤燥灶葬造悦澡蚤灶藻泽藻酝藻凿蚤糟蚤灶藻图3

模型组肾脏HE染色

图4

肾消康中剂量组肾脏

（光镜伊200）

Fig.3KidneyofmodelgroupFig.4HEKidney染色（光镜of伊treatment400）HEstaining(light伊200)

groupHEstaining(light伊400)

电镜下观察，空白组：近端小管上皮细胞微绒

毛密集，胞质内可见大量圆杆状线粒体和少量溶酶体，游离蛋白丰富，高尔基复合体、粗面内质网发达。远端小管上皮细胞结构正常，细胞器形态清晰，系膜细胞完好，见图5。模型组：肾小球基膜增厚，足细胞坏死，滤孔膜溶解，血管内皮细胞质呈网状排列。近端肾小管上皮微绒毛溶解脱落，细胞间连接消失。胞质内溶酶体数量增多，线粒体絮状变。远端小管坏死的细胞质膜脱落，质膜内褶区可见较多的小空泡，见图6、图7。肾消康中剂量组：肾小球毛细血管内皮清晰可见，滤孔膜栅栏状排列，足细胞核清晰，部分核呈凋亡状。近端小管微绒毛脱失、溶解，胞质内有大量的溶酶体，游离核蛋白体丰富。间质血管内皮功能活跃，细胞器数量增多，见图8。

图5空白组肾脏图6模型组肾脏

（电镜伊6000）（电镜伊6000）Fig.5

KidneyofblankgroupFig.6Kidneyofmodelgroup

(electronmicroscope伊6000)

(electronmicroscope伊6000)

图7模型组肾脏图8肾消康中剂量组肾脏

（电镜伊6000）（电镜伊6000）

Fig.7KidneyofmodelgroupFig.8KidneyofShenxi原(electronmicroscope伊6000)

(electronaokangmiddlemicroscopedose伊group6000)

1.7基因芯片实验方法从各组大鼠中取肾脏，使

用QIAGENRNAIsolationKit抽提总RNA，由纯化

的总RNA合成双链cDNA，经PLG提取、乙醇沉淀将High双链素Yield互补RNA脱氧核Transcript糖核酸（LabelingcDNA）纯Kit化，方用法以BioArray生物

光光Columns标记互度计法补核分体析外糖RNA转核录酸浓纯（cRNA度化进生物）合行质素成控标，，记QIAGEN凝的胶电cRNARneasy泳检测，用分

产物，片断化cRNA，合成cRNA探针。合成好的cRNA

探针经片段化处理后用于与基因芯片杂交。芯片的

杂交、洗脱、染色及检测利用Affymetrix公司生产的专用设备“基因芯片检测工作站”进行，一切操作过程1.8均按基Affymetrix因芯片检测公司数推荐据的的处条件理进芯片行。

扫描所得数据应用“AffymetrixMicroarraySuitesoftware5.0”进行数1.9据处基理。

因芯片筛选结果按照比较严格的条件筛选出差异表达基因，表达差异2倍以上的基因列表，包括基因名称、GenBank号、Uni号和染色体定位。其中，NM_031034.1：Gna12即是筛选出的差异表达基因之一，在DN大鼠肾脏组织表达下调，经肾消康治疗后表达上调，见图9。

灰度扫描图中采用芯片图像分析软件分析芯片灰度扫描图，得到芯片上每个基因点的原始信号值（包括前景信号值和背景信号值），从而进行差异表达基因的判定。散点图中X轴为对照组信号值，Y

472天津中医药

栽蚤葬灶躁蚤灶允燥怎则灶葬造燥枣栽则葬凿蚤贼蚤燥灶葬造悦澡蚤灶藻泽藻酝藻凿蚤糟蚤灶藻圆园12年10月第圆9卷第5期Oct援圆园12熏灾燥造援圆9晕燥援5轴为实验组信号值，图中红色点为实验组和对照组该基因的Detection均为P，蓝色为两组中有一个值不是P，而黄色为两组均为A。这些点在Affymetrix公2司的MASS5.02.1实时荧mal主要实光定量软验仪器RT-PCR件中可以显示ProbeSetID。PCR仪的，PTC-225实验检测荧cycler袁MJResearchInc.袁Waltham袁MassachusettsPeltierTher；鄄Thermal光定量CyclerPCR袁仪Corbett，Rotor-GeneReseach袁RG-3000Real-TimesenseDNGAAGGTGAAGTCGGTGAGCprimer大鼠、product肾组织值Gna12如下：sense的Sydneysense袁primerprimerAustralia遥

：5’-GGA尧anti-值AGTGGTGGAAC-3：60.30益。anti-sense-3’袁length：22bp，Tm鄄product’袁lengthprimer院：225’-GGCAGTGGTGAbp鄄2.2TAKARA实length:1验方法bp,product本实验采用TmEve值，：Tm92.50值：green益61.30益。法。

，试剂盒提供公的司反的应RNA体系PCR进行kit反转反录反转录试应。剂反盒转,使按用录照体系95益10加滋L，30益反应10min，42益反应30~50min，Version.2.1利热用5TAKARmin，4益反应5min中止。

反进行荧光公定司的TaKaRaExTaqRt-PCR45应条件95益120量秒PCR，95益反应。15反秒应，60体系益2520滋L秒，2.3个循实环时，荧72光益定20量秒RT-PCR中止。

数据分析实验结果利用软件Rotor-Gene6.0以及Excel7.0进行数据分2.4析处理。

2.4.1实Gna12时荧光的定扩量增RT-PCR曲线见结图果10。

1.501.251.000.750.500.25Threshold

-0.250.00

0

5101520253030Cycle

图10

各组Gna12扩增曲线

Fig.10

TheamplificationcurveofGna12ineachgroup

2.4.22.4.3Gna122.4.4Gna12的Gna12的标的扩准Copies溶曲解线曲值线见图Gna12见图11。

实12时。

定量结果表明，模型组大鼠肾脏组织Gna12表达下调，而经

肾消康治疗后大鼠肾脏组织中Gna12表达上调，见图13。

2120CT1918171615141312

10^06

Concentration

10^0710^08

图11Gna12不同浓度标准品的标准曲线Fig.11

Thestandardcurveofdifferentdensitystandard

preparationofGna12

df/df2015105

0Threshold

6065

7075808590OC

图12Gna12的溶解曲线

Fig.12

ThesolubilitycurveofGna12

1210820

正常组

模型组肾消康中剂量组

图13

各组Gna12mRNA基因表达水平（Copies均值伊103）比较

Fig.13

ComparisonofgeneexpressionofGna12mRNAin

eachgroup

3讨论

细胞间通过传递信号分子相互交流，G蛋白系统是细胞中最常见的信号传递方式。G蛋白即鸟嘌呤核苷酸（GTP）结合蛋白，具有GTP酶活性，是在细胞信号通路中起信号转换器或分子开关作用的蛋白质，是细胞信号传导通路上的重要组成部分，体内外许多激素、递质、毒物和药物等均可通过G蛋白引起细胞内相应的第二信使改变，导致一系列

圆园12年10月第圆9卷第5期Oct援圆园12熏灾燥造援圆9晕燥援5天津中医药

栽蚤葬灶躁蚤灶允燥怎则灶葬造燥枣栽则葬凿蚤贼蚤燥灶葬造悦澡蚤灶藻泽藻酝藻凿蚤糟蚤灶藻473生理生的异G三蛋白化变化聚体可分[1]。

，在膜为受两体类与：1效应）由琢器、之茁和间的酌亚信单号位转组导成中起中介作用；2）小分子G蛋白，为分子质量21耀28ku的小肽，只具有G蛋白琢亚基的功能，在细胞内进行信号转导，属于小GTP酶的Ras超家族。

当受体被配体激活后，G琢上的GDP为GTP所取代，这是G蛋白激活的关键步骤。此时G蛋白解离成GTP-G琢和G茁酌两部分，它们可分别与效应器作用，直接改变其功能，如离子通道的开闭，或通过产生第二信使影响细胞的反应。G琢上的GTP酶水解G茁酌GTP又，结终合止成G无蛋白活性介的导三的聚信体号转导。此时，G琢与[2]。

G上琢目前，G琢亚基主要有G琢s、G琢i、G琢q/11和不12/13同，几但种不却有同着的相类似型的。激它活们机主要是制。G琢在效应i抑制识ATP别生成cAMP；G琢q/11刺激膜结合的磷脂酶C测试，然后将PIP2裂解成两个第二信使：IP3和二酰基甘油（DAG）；G琢12/13参与Rho家族GTP酶信号转导通过RhoGEF家族）和控制细胞骨架重构，从而调节细胞的迁移[3]。

细胞骨架是一动态纤维网络，具有细胞收缩、维持细胞形状、细胞运动、黏附、吞噬等功能[4]。细胞骨架的主要成分是微丝，肌动蛋白（actin）是微丝的基础蛋白，以纤维状肌动蛋白（F-actin）和单球状肌动蛋白（G-actin）两种形式存在并相互转换，调节系膜细胞的收缩状态，从而调节毛细血管口径及肾小球滤过率信号G传蛋白[5]。

递途径是细的中胞中心重环要的节，因信此也号转就成导分了子众，是多许多药物和毒素攻击的靶位点。事实上，如糖尿病、失明、过敏、抑郁症、心血管缺陷和某些癌症疾病以及其他病Gna12症，都被认为是由于G蛋白信号紊乱引起的[6]国内外在相DN关研究发病极机少制，从中的作本实用验目研究前还结不果得可而。以知但看，出：在DN状态下，模型组大鼠肾脏Gna12表达下调，笔者由此推断高糖影响了Gna12的信号转导功能，从而使F-actin解聚，细胞骨架重构导致系膜细胞收缩功能失调，造成早期DN肾小球的高滤过状态，导致络，其DN脏为DN腑本的发生。

虚虚损标以实脾之肾证为，病著，脾及虚则五脏其六运腑化、、气血升清经、散精的作用不足，血中精微不能输布脏腑，濡养四

肢，积蓄过多则随小便漏泄体外，发为消渴[7]。脾肾两虚是病理基础，湿浊瘀血既是病理产物又是致病因素，脾肾亏虚、湿浊瘀血贯穿DN始终。

肾消康具有补肾健脾、利湿泄浊、化瘀通络的作用。肾阴得充则一身阴液得养，肾阳不虚，其蒸腾气化功能正常，肾之封藏功能如常，精微物质存内为机体所用而不外泄。健脾益气，培补后天之本，使水谷精微得以四布，脏腑得养，清者得升，浊者得降，湿浊得化，精微得布；脾气充盛又可化生气血，血流通畅，祛除瘀血形成之源。利湿泄浊可通过促进代谢，使体内精微物质得到利用，使本身有害物质得到清除。活血化瘀可使经络之瘀滞得除，各脏腑得新血濡养。

肾消康，其药物组成有生地、山药、山茱萸、茯苓、泽泻、牡丹皮、人参、黄芪、枸杞子、陈皮、葛根、水蛭等。方中以六味地黄汤为基础方，滋阴清热。枸杞子药性平和，为平补阴阳之佳品，用之增强补肾之力；人参、黄芪补虚扶正，且人参、黄芪与茯苓、泽泻、葛根、水蛭配伍，使扶正与祛邪协调兼顾，祛邪不伤正、扶正不留邪；陈皮与葛根配伍，陈皮辛散苦降，长于理气燥湿健脾泻胃浊，调中快膈；葛根升津、升发清阳、鼓舞脾胃清阳之气；水蛭破血逐瘀，效强而不伤正。方中诸药相合，祛邪而不伤正，扶正

而不留邪，标本兼顾，为临床治疗DN的良方[8]。王盛发等[9]通过糖尿病肾病中医治疗用药规律分析，

总结了一些用药频度较高的中药，如黄芪、茯苓、山药、山茱萸等，中药类型则以补益、健脾、活血、清热类为多，这为本方用药提供了有力的参考依据。

现代药理证实：生地、山茱萸、山药、黄芪、茯苓、泽泻均有降血糖作用；黄芪有双向调节血糖作用和减少尿蛋白排泄作用；茯苓、泽泻降糖降脂改善糖脂代谢，增加肾血流量，促进肾功能恢复[10]。谭俊珍等[11]认为六味地黄丸对糖尿病大鼠糖、脂代谢有4一结论

定的改善作用。本研究应用AffymetrixRat2302.0基因芯片检测糖尿病大鼠肾脏基因表达谱，筛选差异表达基因，Gna12基因是筛选出的肾脏差异表达基因和药效靶点之一，并对该基因做荧光定量RT-PCR测序分析。基因功能分析表明，在DN状态下，模型组大鼠肾脏Gna12表达下调，表明Gna12的信号转导功能受到影响。肾消康中剂量组Gna12表达上调，中药复方肾消康可Gna12的信号转导功能，对

（474天津中医药

栽蚤葬灶躁蚤灶允燥怎则灶葬造燥枣栽则葬凿蚤贼蚤燥灶葬造悦澡蚤灶藻泽藻酝藻凿蚤糟蚤灶藻圆园12年10月第圆9卷第5期Oct援圆园12熏灾燥造援圆9晕燥援5Gna12有良性调节作用。其作用机制有待于更深入研究。

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（收稿日期：2012-06-23）

EffectofShenxiaokangontherenaltissuesexpressionofGeneGna12indiabeticnephropathyrats

QIAOYu,XIEYing,BAIYu鄄bin,WANGBing,CHENFei,LIUChun鄄hong,LIUCheng鄄gang,CHANGJia鄄yi,GAOEn鄄yu,HANJie鄄ru,JIANGDe鄄you

nismofactioninthetreatmentofDN,thenprovideexperimentaldataforclinicalpractice.[Methods]ThemodelratsmaleWistarwereestablishedwithmultipleinjectionsoflowdoseSTZandhighcaloriediet.Kindsofexaminationmethodswereapplied,includingradiom鄄profilingchip,andrealtimequantitativereversetranscriptionpolymerasechainreactiontechniquetoobservetheeffectofShenxiaokangonindicators.MostespeciallyappliedclusteranalysismethodtomakecertainimportantassociatedgeneswithDN,andfurtherappliedRT鄄PCRtodoconfirmatoryexperiment.[Results]Gna12genewasdown鄄regulationintheDNmodelgroupratkidneysandup鄄regulationintheShenxiaokangtreatmentgroupratkidneys.[Conclusion]AppliedAffymetrixCo.US.rat2302.0geneexpressionprofilingchiptohomeandabroad.Togenesfunctionanalyzeshowthat,theGna12geneisdown鄄regulationintheDNmodelgroupratkidneys.Itisimpor鄄testdiabeticnephropathyratsrenaltissuesgenesexpresstion,Gna12geneisoneoftherenaltissuesdifferenceexpresstionanddrugeffecttargetsandappliedrealtimequantitativereversetranscriptionpolymerasechainreactiontechniquetoanalyzeit.Itisthefirsttimeattantassociatedwithdiabetickidneydamage,andup鄄regulationintheShenxiaokangtreatmentgroupratkidneys.Shenxiaokanghasbe鄄nigneffectonGna12geneExpresstion.Itsmechanismremainstobestudiedfurther.

Keywords:Shenxiaokang;diabetes;diabetickidneydamage;geneexpressionprofiling;Guaninenucleotidebindingproteinalpha12munoassay袁biochemistry,lightmicroscope,electronmicroscrope,immunohistochemical袁AffymetrixCo.US.rat2302.0geneexpression

Abstract:[Objective]ToobservethetherapeuticaleffectofacomplexprescriptionofShenxiaokangonDNratsanddiscussthemecha鄄

渊月葬sicMedicalCollege,HeilongjiangUniversityofTCM,Harbin150040,Chin葬冤