热带医学杂志２０１４年５月第ｌ４卷第５期Ｊ Ｔｒｏｐ Ｍｅｄ，Ｍａｙ ２０１４，Ｖｏ１．１４，Ｎｏ．５ ・・５４７・ 硕博专栏论著・ 高通量测序筛选结核分枝杆菌耐药株差异基因 李劭源 ．－，张国良３文玉欣４毛冬婷Ｉ’２，曹开源Ｉ．２，陈心春３曾谷城１，２ （１．中山大学中山医学院微生物学教研室，广东广州５１００８０；２．中山大学热带病防治研究教育部重点实验室，广东广 州５１００８０；３．广东医学院附属深圳市第三人民医院肝病研究所，广东深圳５１８１１２；４．暨南大学第二临床医学院，深 ｌ 市人民医院胸外科，广东深圳５１８０２０） 摘要：目的 比较结核分枝杆菌中敏感株、多耐药株、广泛耐药株三者间基因表达的差异，为进一步针对耐药菌株的 研究提供方向。方法从深圳市第三人民医院收集敏感株、多耐药株、广泛耐药株各１株，提取菌株ＲＮＡ，然后构建 高通量测序后共得到基因３ ９６８个。将耐药株与敏感株的基因进行比较，选取表达差 ｃＤＮＡ文库，使用Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａｌｙｚｅｒ ＩＩｘ高通量测序仪进行全基因组测序，经过筛选比对后得到测序结果，再比较３个 菌株间的基因表达差异。结果异高于ｌＯ倍的基因。筛选得到多耐药株差异基因１６个、广泛耐药株差异基因１０个。这些表达差异基因大部分与毒 素一抗毒素系统、ＰＥ／ＰＰＥ家族蛋白、金属转运蛋白相关。还在多耐药株中发现了一系列高表达的前噬菌体基因及噬菌体 整合相关的基因。结论通过高通量测序筛选得到一系列耐药株差异表达基因，为未来对耐药菌株的研究提供依据。 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７２．３６１９（２０１４）０５．０５４７．０４ 关键词：结核分枝杆菌；耐药株；高通量测序 中图分类号：Ｒ３７８．９１１ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｆｏｒ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｇｅｎｅｓ ｏｆ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｓｔｒａｉｎｓ ｂｙ ｈｉｇｈ・ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ＬＩ Ｓｈａｏ－ｙｕａｎ － ，ＺＨＡＮＧ Ｇｕｏ—ｌｉａｎｇ３，ＷＥＮ Ｙｕ－ｘｉｎ４，ＭＡＯ Ｄｏｎｇ－ｔｉｎｇ ， ，ＣＡＯ Ｋａｉ－ｙｕａｎ ，。，ＣＨＥＮ Ｘｉｎ－ｃｈｕｎ ，ＺＥＮＧ Ｇｕ－ｃｈｅｎｇ ， （１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｚｈｏｎｇｓｈａｎ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｕｎ Ｙａｔ—ｓｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｕａｎｇｄｏｎｇ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１００８０； ２．Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒ Ｔｒａｐｉｃａｌ Ｄｉｓｅａｓｅｓ Ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆｔｈｅ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｓｕｎ Ｙａｔ—ｓｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１００８０；３．ＳｈｅｎｚｈｅｎＫｅｙＬａｂ ｆＩｏｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄＩｍｍｕｎｉｔｙ，ｔｈｅ ＴｈｉｒｄＰｅｏｐｌｅ Ｓ Ｈｏｓｐｉｔｌａ ｏｆＳｈｅｎｚｈｅｎ，ＧｕａｎｇｄｏｎｇＭｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，Ｓｈｅｎｚｈｅｎ ５１８１１２； ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＴｈｏｒａｃｉｃ Ｓｕｒｇｅｒｙ，ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ Ｐｅｏｐｌｅ ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆＳｈｅｎｚｈｅｎ，Ｓｅｃｏｎｄ ＡｆｉｌｆｉｔａｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆ￣ｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，Ｓｈｅｎｚｈｅｎ５１８０２０，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｗｅ ａｉｍｅｄ ｔｏ ｃｏｍｐａｒｅ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｏｆ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ａｍｏｎｇ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｓｔｒａｉｎ（Ｓ），ｍｕｌｔｉ－ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｓｔｒａｉｎ（ＭＤＲ）ａｎｄ ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ—ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｓｔｒａｉｎ（ＸＤＲ）ａｎｄ ｐｒｏｖｉｄｅ ｄｉｒｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｆｕｒｔｈｅｒ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｆ ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｓｔｒａｉｎｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｓ，ＭＤＲ ａｎｄ ＸＤＲ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｔｈｉｒｄ Ｐｅｏｐｌｅ Ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｓｈｅｎｚｈｅｎ．ＲＮＡ ｓａｍｐｌｅｓ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ ｃＤＮＡ ｌｉｂｒａｒｉｅｓ．Ｔｈｅｎ ｔｈｅ ｃＤＮＡ ｌｉｂｒａｒｉｅｓ ｗｅｒｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｄ ｂｙ Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａｌｙｚｅｒ ＩＩｘ ｔｏ ｏｂｔａｉｎ ｔｈｅ ｗｈｏｌｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ．Ｔｈｅ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓ ａｍｏｎｇ ３ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ３ ９６８ ｇｅｎｅｓ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ａｆｔｅｒ Ｈｉｇｈ－ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ． Ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｂｅｔｗｅｅｎ ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｓｔｒａｉｎｓ ａｎｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｓｔｒａｉｎ．Ｇｅｎｅｓ ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ １０ ｆｏｌｄｓ ｈｉｇｈｅｒ ｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｃｈｏｓｅｎ．１６ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｇｅｎｅｓ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｉｆｅｄ ｉｎ ＭＤＲ ａｎｄ １０ ｉｎ ＸＤＲ．Ｍｏｓｔ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ｇｅｎｅｓ ｗｅｒｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｏｘｉｎ—ａｎｔｉｔｏｘｉｎ ｓｙｓｔｅｍ，ＰＥ／ＰＰＥ ｆａｍｉｌｙ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ｍｅｔｌ ｔａｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ．Ａ ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ ＰｈｉＲｖ１ ｐｈａｇｅ ａｎｄ ｉｎｔｅｇｒａｔｉｎｇ ｇｅｎｅｓ ｗｅｒｅ ａｌｓｏ ｆｏｕｎｄ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｗｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ａ ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｇｅｎｅｓ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｏｆ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ，ｐｒｏｖｉｄｉｎｇ ｐｒｏｏｆｓ ｏｒ ｆｆｕｔｕｒｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｆ ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｏｆ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ；ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｓｔｒａｉｎｓ；ｈｉｇｈ－ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ 结核分枝杆菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）是世 耐药菌株的出现，以及艾滋合并结核病人的增多，结 核病再度死灰复燃…。据卫生部２００７—２００８年的统 计数据显示，我国每年新发耐多药肺结核病例约１２ 万，病例数居世界首位，但是查出并接受规范治疗的 只有几千例。对公众的健康造成了严重威胁。高通量 测序能够实现大规模高通量的测序，可以在几天之 内完成一个菌株全部基因的检测，其中获得的大量 界上严重危害人类的病原体之一。结核病至２０世纪 ７０年代一度得到抑制，发病率不断下降，其后由于 基金项目：国家自然科学基金（Ｃ０８０１０２）；国家自然科学基金委员会 与美国国立卫生研究院合作研究项目（８１２１１１４０８） 作者简介：李劭源（１９８９一），男，在读硕士研究生，研究方向为结核抗 感染免疫 通讯作者：曾谷城（１９８１一），男，博士，副教授，研究方向为感染与免 疫，Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｅｎｇｇｃｈ＠ｍａｉｌ．ｓｙｓｕ．ｅｄｕ．ｅｎ 信息有助于加深我们对结核分枝杆菌的了解，寻找 耐药株与敏感株之间的差异［ 刮。 热带医学杂志２０１４年５月第ｌ４卷第５期ＪＴｒｏｐ 丛 ２０ ： ： ： １材料与方法 Ｉ．１ 菌株的收集及培养在深圳市第三人民医院 检验科收集临床菌株。采用ＢＡＣＴＥＣ ＭＧＩＴ９６０快速 培养法进行痰结核分枝杆菌培养和药敏试验［引，根 据世界卫生组织的指南选出敏感株、多耐药株、广泛 耐药株各ｌ株［５］。使用７Ｈ９液体培养基（ＢＤ公司） ３７℃震荡培养２１ ｄ。 １．２菌株ｃＤＮＡ文库的构建培养后使用ＭＰ公司 ＦａｓｔＲＮＡ Ｐｒｏ Ｂｌｕｅ Ｋｉｔ提取３株菌株的ＲＮＡ，然后按 照Ｉｌｌｕｍｉｎａ公司Ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ ｓｍａｌｌ ＲＮＡ ｃＲＮＡ ｓｙｔｈｅｓｉｓ ｋｉｔ ２．０说明书构建ｃＤＮＡ文库。首先分别用３ 和５ 接头连接到ＲＮＡ片段的两端。再用随机引物和逆转 录酶将ＲＮＡ片段逆转录成含接头的ｃＤＮＡ文库。之 后使用接头引物扩增ｃＤＮＡ文库。使用电泳切胶法 获取长度范围在１００～３００ ｂｐ的ｃＤＮＡ片段。 １．３ 菌株高通量测序ｃＤＮＡ文库使用点样仪点样。 经过桥式ＰＣＲ扩增后，使用Ｉｌｌｕｍｉｎａ公司Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａｌｙｚｅｒ ＩＩｘ高通量测序仪进行测序。基因组的组 装、注释、筛选以及数据比对由国家人类基因组南方 研究中心完成。 １．４序列的筛选及比对测序后得到的是带有接头 的原始序列，还含有大量接头序列以及少量低质量序 列。去除接头和碱基数小于１０的低质量序列之后， 再与结核标准菌株基因组Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ Ｈ３７Ｒｖ ｕｉｄ５７７７７进行比对。比对分析使用ｂｏｗｔｉｅ软 件．选取错配碱基数小于２的序列，保留唯一匹配的 序列进行进一步分析。 ２结果 ２．１基因组比对结果测序结果经筛选比对后，敏 感株、多耐药株和广泛耐药株的比配对率分别为 ２３％、４６％和４６％（表１）。根据与结核分枝杆菌全基 因组比对结果，本次测序共得到数据９ ４３５项，包括 基因３ ９６８项（其中ｒＲＮＡ １项、ｔＲＮＡ ２４项）、ｎｃＲＮＡ ６项，以及基因间区５４６１项。基因间区是以每１００ｂｐ 为一项，大于１００ ｂｐ的基因间区以１００ ｂｐ为单位 分割。 表１菌株测序、筛选、比对得到的ｒｅａｄ数 Ｔａｂ．１ Ｓｔｒａｉｎｓ ｒｅａｄ ａｍｏｕｎｔｓ ａｆｔｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ，ｆｉｌｔｅｒ ａｎｄ ｂｌａｓｔ 项目 敏感株 多耐药株广泛耐药株 原始测序数据的ｒｅａｄｓ数 １４ ５３４ ３６５ １５ ３４３ ９８３ １３ ２６３ ６ｌ３ 过滤并除去接头后的ｒｅｄａｓ数１２ ３７８ ０６２ ８ １６８ ７４１ ３ ８９５ ５３４ 去除冗余序列之后的ｒｅａｄｓ数７ ５４３ ６０６ ２０７６ ４６０ １ ０４７ ９３７ 比对上ＴＢ基因组ｒｅａｄｓ数 ｌ ７３３ ５５５ ９６３ ４０７ ４８５ ９３７ 比配比率（％） ２３ ４６ ４６ ２。２耐药差异基因将广泛耐药株、多耐药株分别 与敏感株进行比较，选取耐药株表达水平高于敏感 株２倍的基因，多耐药株中发现１３０个基因，广泛耐 药株中发现７８个基因。将筛选范围缩小为耐药菌株 与敏感株的表达差异大于ｌ０倍，多耐药株得到基因 ｌ６个．广泛耐药株得到基因１０个（表２）。 表２耐药株差异表达基因的数量 Ｔａｂ．２ Ｔｈｅ ａｍｏｕｎｔｓ ｏｆ ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｓｔｒａｉｎｓ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｇｅｎｅｓ 在多耐药株表达量显著高于敏感株的ｌ６个 基因中，最显著的Ｒｖ１５７７ｃ表达差异达到６１．４０倍， 其次是Ｒｖ１５８４ｃ，表达差异也达到３４．００倍。经检索 ＮＣＢＩ数据库，Ｒｖ１５７７ｃ、Ｒｖ１５８４ｃ、Ｒｖ１５８３ｃ、Ｒｖ１５８７ｃ、 Ｒｖ１５８８ｃ、Ｒｖ１５８５ｅ、Ｒｖ１５７６ｃ和Ｒｖ１５８６ｃ都是与噬菌 体整合相关的基因，而ｍａｚＥ９、ｖａｐＢ９、ｖａｐＣ９是毒 素一抗毒素系统中的基因，ｃｍｔＲ和ｃｔｐＧ则与结核分 枝杆菌逃逸宿主细胞金属离子的杀伤相关（表３）。 在广泛耐药株表达量显著高于敏感株的１０个 基因中，最显著的基因是ｖａｐＢ９，广泛耐药株与敏感 株的表达差异达到３４．３５倍，多耐药株与敏感株的 差异达到２６．８５倍。其次是ｖａｐＣ９，广泛耐药株、多耐 药株的表达差异分别为２５．２４和２５．５３倍。ＰＰＥ１２和 ＰＥ３４是ＰＥ／ＰＰＥ蛋白家族成员，与结核分枝杆菌的 毒力密切相关（表４）。 ３讨论 本研究收集了敏感株、多耐药株和广泛耐药株， 利用Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａｌｙｚｅｒ ＩＩｘ高通量测序仪进行测序， 测序结果通过筛选和比对后得到３个不同菌株的全 基因组序列。然后针对基因的表达量以及表达差异 的基因等方面进行分析。 我们对敏感株和耐药株表达显著差异的基因进 行分析，ｍａｚＥ９、ｖａｐＢ９、ｖａｐＣ９三个基因都是毒素一抗 毒素系统中的基因。毒素一抗毒素系统在细菌中广泛 存在。发挥诱导程序性细胞死亡，应激条件下介导持 留菌形成，稳定基因大片段等功能［¨］。在结核分枝杆 菌中至少有８８个毒素一抗毒素基因Ｅｓ］。最近的研究 揭示了这个系统可能的运作机理，ｖａｐＣ２０能通过切 割２３Ｓ核糖体ＲＮＡ的Ｓａｒｃｉｎ．Ｒｉｃｉｎ环来抑制翻译。 细菌不能在短期内产生蛋白，因此能够逃避抗生素 对核糖体的攻击。被毒素抑制的细菌能够被抗毒素 Ｒｖ１５７７ｅ Ｒｖ１５８４ｃ ｍａｚＥ９ 前噬菌体样元件 前噬菌体样元件 抗毒素 ５１２ ２２１ ３４１ ５ ３ １５ ３０７ １０２ ４９２ ０ ０ １ ６１．４０ ３４．００ ３２．８０ ０．００ Ｏ．００ ０．０７ Ｒｖ１５８３ｃ ｖａｐＢ９ ｖａｐＣ９ 前噬菌体样元件 抗毒素 毒素 ３９８ ２２１ ３８３ ３ ２６ １７ ９３ ６９８ ４３４ ０ ８９３ ４２９ ３１．００ ２６．８５ ２５．５３ Ｏ．００ ３４．３５ ２５．２４ ｅｍｔＲ ｅｔｐＧ 金属传感转录因子 金属阳离子Ｐ型ＡＴＰ转运蛋白Ｇ ３５６ ２７２ １５１ ５３ ３ ２２５ １ １２４ ３ ３０８ ８２６ ２１．３６ ２１．２１ ２１．９１ １５．５８ Ｒｖ１５８７ｅ ｈｐ３ 部分ＲＥＰ１３ＥＩ２重复序列 酮类酰基一ＣｏＡ硫解酶 １ ００１ １ １８４ ５ １５ ９２ ２５０ ０ ２６７ １８．４０ １６．６７ ０．００ １７．８Ｏ ＰＰＥ１２ Ｒｖ１５８８ｅ Ｒｖ１５８５ｃ Ｒｖ１５７６ｅ ｍｂｔＫ ＰＰＥ蛋白家族成员 部分ＲＥＰ１３Ｅ１２重复序列 前噬菌体样元件 前噬菌体样元件 赖氨酸Ｎ一乙酰基转移酶 １８５ ５１５ １８５ ５１５ ６３２ １５９ １ ２ １２ ２７０ ２ ４１９ １４ ２８ １４３ ３ １９８ ２ ９２５ １５ ０ ２ ３ ２００ １５．２１ １４．００ １４．００ １１．９２ ｌ１．８４ １８．０ ４１５．００ Ｏ．００ ０．１７ １１．８５ Ｒｖ１５８６ｅ 噬菌体整合酶 １ ４０９ １４ １５８ ２ １１．２９ ０．１４ 的表达营救［８－９］。结核分枝杆菌可以通过ｍａｚＥ９、 ｖａｐＢ９、ｖａｐＣ９等基因参与的毒素一抗毒素系统逃避 抗生素等药物的杀伤，从而增强耐药能力。 ＰＰＥ１２和ＰＥ３４这两个基因属于ＰＥ／ＰＰＥ蛋白 家族。ＰＥ／ＰＰＥ蛋白家族大约占整个结核分枝杆菌 基因组的１０％Ｅｌ０］。ＰＥ／ＰＰＥ家族的基因大部分都与 分枝杆菌的毒力相关，相当一部分ＰＥ／ＰＰＥ基因在 没有毒力的分枝杆菌中是不表达的。在不同毒力 的结核分枝杆菌菌株或者不同的临床分离株中， ＰＥ／ＰＰＥ基因也发生了突变Ｉｎ］。ＰＰＥ１２和ＰＥ３４作为 ＰＥ／ＰＰＥ家族的成员。在耐药株中高表达，可能作 为潜在的毒力因子，可以用作结核病生物标志物的 研究。 表明结核分枝杆菌能够通过表达ｃｔｐＧ等金属阳离 子Ｐ型ＡＴＰ转运蛋白来躲避来自宿主细胞的杀伤。 在结核分枝杆菌感染后，大量锌离子内流并积累在巨 噬细胞内。与此同时，结核分枝杆菌编码的金属阳离 子Ｐ型ＡＴＰ转运蛋白大量表达，通过外排重金属离 子，从而降低胞内重金属离子浓度。中和细胞对其的 毒害作用［挖］。ｃｍｔＲ是金属感应蛋白转录因子， 主要与结核分枝杆菌镉离子的代谢相关［１３］。 在多耐药株中有一大类的高表达基因都与噬菌 体的整合相关，Ｒｖ１５７７ｅ、Ｒｖ１５８４ｃ、Ｒｖ１５８３ｅ、Ｒｖ１５８５ｃ、 Ｒｖ１５７６ｅ是前噬菌体的序列，Ｒｖ１５８６ｃ是噬菌体整合 酶。Ｒｖ１５８７ｃ、Ｒｖ１５８８ｅ为部分ＲＥＰ１３Ｅ１２重复序列， 是噬菌体插人的位点。噬菌体ｐｈｉＲｖｌ能通过利用结 核分枝杆菌的整合酶，将其基因整合到细菌基因组 ｃｔｐＧ是金属阳离子Ｐ型ＡＴＰ转运蛋白Ｇ，研究 ・５５０・ 热带医学杂志２０１４年５月第１４卷第５期ＪＴｒｏｐ ｂｌｅｄ，Ｍａｙ ２０１４ Ｖｏ１．１４，Ｎｏ．５ 关于对重复发表、剽窃、抄袭问题处理的声明 为维护本刊的声誉和广大读者、作者的利益，遏止学术，现将本刊对重复发表、剽窃、抄袭问题处 理的声明刊登如下： （１）本声明中所涉及的文稿指２篇文稿在文字的表达和讨论的叙述上可能存在某些不同之处。但这些文稿 的主要数据和图表是相同的。所指文稿不包括重要会议的纪要、疾病的诊断标准和防治指南、统一的实验方法、 有关组织达成的共识性文件等。（２）￣ｌＪ １篇文稿以全文方式在某刊物发表，除非文种不同，否则不可再将该文投 寄给本刊。（３）凡来稿接到编辑稿件待审通知后６个月内未接到录用通知，则表明稿件仍在处理中，作者欲投他 刊，应事先与本刊联系。（４）编辑部启用一套完善的期刊文献检索系统，对预刊文章统一进行全面审核。如认为 文章有重复发表或者剽窃、抄袭嫌疑时，将认真收集相关资料并仔细核对后再通知作者。（５）重复发表或者剽 窃、抄袭行为一经证实，将在杂志显要位置刊出其作者单位、姓名、及撤消论文的通告；且该文稿第一作者所撰 写的所有文稿５年内不得在本刊发表；编辑部将就此事件向作者所在单位进行通报。 本刊编辑部
